【摘要】：研究背景:肺癌的發(fā)病率和死亡率居所有惡性腫瘤之首,其中非小細胞肺癌(N SCLC)占所有肺癌病理類型的80%。NSCLC的治療手段以手術、放化療、靶向治療和免疫治療為主。因NSCLC起病較為隱匿,多數(shù)患者確診時已屬晚期,而失去手術機會,生存期短,預后差�；熓欠伟┲委煹闹匾侄巍５伟┒嗨幠退�(MDR)問題的出現(xiàn),常導致化療的失敗,并使化療臨床療效難以有更進一步提高。大量研究表明NSCLC多藥耐藥的發(fā)生與P-gp和MRP1蛋白的表達密切相關。P-gp和MRP蛋白是JNK信號通路中的關鍵蛋白,課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)二陳湯可抑制JNK通路的活性。因此我們提出“二陳湯是否通過JNK信號通路參與調控P-gp和MRP1蛋白的表達,從而達到逆轉NSCLC多藥耐藥的作用”的假說。并擬通過MTT、免疫熒光和免疫蛋白印跡三種體外實驗,初步探索二陳湯對人肺腺癌耐順鉑細胞株(A549/DDP)的增殖抑制、及P-gp和MRP1蛋白表達情況的影響。為MDR發(fā)生機制及逆轉劑的中醫(yī)藥研究提供參考數(shù)據(jù),為臨床應用二陳湯治療NSCLC提供理論依據(jù)。研究目的:通過體外實驗研究二陳湯對A549/DDP細胞增殖抑制及多藥耐藥相關蛋白P-gp、MRPI表達的影響,為臨床應用二陳湯治療NSCLC提供理論依據(jù)。研究方法:1.采用MTT法檢測二陳湯及二陳湯+六味方、二陳精簡方、二陳湯+益氣養(yǎng)陰方,對A549/DDP細胞作用48小時后的生長抑制情況,并篩選出較優(yōu)的藥物及濃度作為下一步實驗用藥的依據(jù)。2.免疫熒光技術觀察順鉑組、二陳湯組、二陳湯+順鉑組對A549/DDP細胞株形態(tài)學的影響及對P-gp蛋白表達的影響。3.免疫蛋白印跡(Western Blot)法檢測順鉑組、二陳湯組、二陳湯+順鉑組對A549/DDP細胞株的影響及對P-gp、MRP1蛋白表達的影響研究結果:1.MTT實驗結果顯示:不同的二陳湯加減方在藥物濃度為25.6mg/ml時對A549/DD P細胞株均有抑制作用,并且與空白對照組相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。二陳湯組(25.6mg/ml)與空白對照組相比,統(tǒng)計學有顯著差異(P0.01)。其中二陳湯(25.6mg/ml)與順鉑(10ug/ml)組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。故選取濃度為25.6mg/ml二陳湯組完成進一步實驗。2.免疫熒光技術顯示:空白對照組和順鉑組的A549/DDP細胞株形態(tài)未發(fā)生變化,細胞質中P-gp蛋白分布較為緊密。而含有二陳湯組的A549/DDP細胞株可觀察到細胞核萎縮,細胞質中P-gp蛋白的表達也較弱,熒光顯示較為疏散。二陳湯+順鉑組中A549/DDP細胞株形態(tài)學改變更加明顯。3.Western Blot檢測結果顯示:與空白對照組相比,二陳湯組中P-gp、MRP1蛋白表達均明顯降低,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在P-gp蛋白表達量上:二陳湯+順鉑組與空白對照組比較,統(tǒng)計學有顯著性差異(P0.01),與順鉑組相比較,差異也有統(tǒng)計學意義(P0.05)。MRP1蛋白表達量上:二陳湯+順鉑組與空白組相比較,統(tǒng)計學有顯著差異(P0.01)。結論:1.不同的二陳湯加減方在藥物濃度為25.6mg/ml時具有抑制A549/DDP細胞株增殖的作用。2.二陳湯具有一定逆轉腫瘤細胞多藥耐藥的作用,其機制與通過JNK信號轉導通路降低多藥耐藥相關蛋白P-gp及MRP1表達有關。
【圖文】：

圖１：用二陳湯（２５．６ｍｇ／ｍｌ），，ＤＤＰ邋（１０｜ｉｇ／ｍＬ）和聯(lián)合組處理細胞４８小時
【學位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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本文編號：2655311