【摘要】：目的:利用體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細胞(MRC-5),探究中藥黃芩提取物黃芩素是否具有抗水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella Zoster Virus,VZV)感染的作用。方法:首先制備VZV感染人胚肺成纖維細胞(MRC-5)模型,依據(jù)Read-Muench法計算TCID50,以確定VZV的毒力,采用四甲基偶氮唑鹽比色(MTT)法和細胞觀察法確定實驗藥物黃芩素和陽性對照藥阿昔洛韋(Acyclovir,ACV)的最大無毒濃度TC_0和最小有效濃度MEC,以有效濃度為加藥劑量,將實驗分為四組:空白對照組、VZV接種組、VZV+藥物黃芩素實驗組、陽性對照阿昔洛韋組。在給藥方式,細胞因子,病毒核酸,蛋白表達四個方面對黃芩素體外抗VZV作用進行評估。首先進行細胞形態(tài)學觀察法對實驗組細胞進行形態(tài)觀察,分別通過先接毒后加藥,藥和毒同時加入兩種給藥途徑進行接毒加藥并連續(xù)觀察五天,初步判斷黃芩素對VZV是否具有抑制作用,與陽性對照ACV組、單獨VZV組、空白對照組比較,觀察不同組間細胞狀態(tài)的差異;收集不同組細胞上清液,通過測定細胞因子IFN-β(β干擾素)、FGF(細胞生長因子)的濃度進行比較分析,根據(jù)不同組細胞的細胞因子濃度差異判斷黃芩素以及陽性對照藥物對VZV的抑制作用;通過實時熒光PCR(Real Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法測定不同時間點各組細胞的病毒拷貝數(shù),進行各實驗組細胞病毒拷貝數(shù)差異比較分析;用蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)比較不同組VZV重要蛋白gE(glycoprotein E)的表達情況,對各組VZV gE測定的灰度值進行差異分析,綜合分析以上各組實驗結(jié)果,比較分析黃芩素是否具有體外抗VZV作用并對其效果進行評價。結(jié)果:黃芩素用藥的最大無毒濃度和最小有效濃度分別100μg/ml和25μg/ml,黃芩素藥物治療指數(shù)與阿昔洛韋相同。通過細胞形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn)黃芩素實驗組、陽性對照阿昔洛韋組細胞的細胞病變效應(cytopathic effect,CPE)約為20%,只接毒實驗組細胞逐漸呈現(xiàn)皺縮狀態(tài)并發(fā)生特征性葡萄串珠樣病變,CPE約為80%;不同給藥方式對VZV的抑制作用無明顯差異。藥物黃芩素組、陽性對照阿昔洛韋組所收集的細胞上清液中細胞因子IFN-β和FGF濃度接近,且分別高于VZV接種組細胞因子濃度;結(jié)果顯示,VZV接種組DNA拷貝數(shù)與其他組相比增長迅速;VZV接種組細胞內(nèi)的VZV gE含量高于黃芩素實驗組以及陽性對照阿昔洛韋組。結(jié)論:黃芩素具有體外抗VZV感染人胚肺成纖維的作用,在細胞因子層面黃芩素與阿昔洛韋作用效果相似,在核酸和蛋白表達方面,阿昔洛韋作用效果略強于黃芩素。
【圖文】：

圖 1 不同給藥方式對 MRC-5 形態(tài)影響觀察可以看出，黃芩素在體外對 VZV 具有一定的抑制作用。兩種不同給藥途徑對細胞病變程度影響差別不大。接毒加藥后連續(xù)觀察細胞五天，只接毒組細胞逐漸出現(xiàn)葡萄串珠樣病變，，每孔 CPE 約有 80%；黃芩素實驗組和 ACV 陽性對
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285

【參考文獻】

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本文編號：2654974