發(fā)布時間：2020-05-07 19:26

【摘要】：目的:通過建立DCP小鼠模型,觀察縮泉丸對DCP模型小鼠排尿情況、糖代謝水平及膀胱結(jié)構(gòu)與功能的影響,并運用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)研究其對DCP小鼠膀胱組織中CHRM3、β3-AR、TRPV1 mRNA 以及 SP、NK1R、P2X2、P2X3 表達(dá)的影響,共同探討縮泉丸對糖尿病膀胱病變的作用及其機制。方法:1構(gòu)建DCP模型,觀察縮泉丸對其排尿情況及糖代謝水平的影響。SPF級雄性C57BL/6小鼠,隨機分為正常組(n=8)及造模組。試驗期間,正常組喂養(yǎng)普通飼料,造模組采用高脂飼料喂養(yǎng)。飼養(yǎng)4周后,造模組按200mg/kg劑量腹腔注射2%的STZ溶液。注射STZ三天后,FBG達(dá)189 mg/dL視造模成功,將造模成功小鼠隨機分為模型組,陽性組(甲鈷胺片),縮泉丸高、低劑量組,每組8只。注射STZ第9周開始,分別灌胃給藥4周,給藥期間對各組動物體重、飲食、排尿、血糖進行監(jiān)測,末次給藥前后進行口服葡萄糖耐量試驗,腹主動脈取血測定血清中糖化血清蛋白及胰島素含量,觀察縮泉丸的影響。2觀察縮泉丸對DCP小鼠膀胱結(jié)構(gòu)與功能的影響末次給藥后使用尿動力學(xué)檢測儀觀察縮泉丸對DCP小鼠膀胱功能的影響;無菌分離膀胱,運用Powerlab生理機能放大系統(tǒng)研究縮泉丸對膀胱肌條對α,β-meATP、Carbachol、Capsaicin、KCl誘發(fā)的逼尿肌條舒縮反應(yīng)的影響;將膀胱組織浸入4%多聚甲醛溶液,進行HE染色及MASSON染色,觀察縮泉丸對DCP小鼠膀胱組織病理形態(tài)學(xué)的影響。3研究縮泉丸對DCP小鼠相關(guān)神經(jīng)受體及神經(jīng)遞質(zhì)的影響利用RT-PCR及免疫熒光技術(shù),研究縮泉丸對DCP小鼠膀胱組織中CHRM3、β3-AR、TRPV1mRNA以及SP、NK1R、P2X2、P2X3表達(dá)的影響,闡釋縮泉丸治療糖尿病膀胱病變的作用機制。結(jié)果:1各組動物排尿情況及糖代謝水平監(jiān)測結(jié)果DCP模型小鼠體重明顯減輕;飲水量、攝食量、排尿量均顯著增多;血糖水平以及血清中GSP和胰島素含量顯著上升�？s泉丸對DCP小鼠干預(yù)后,體重、飲水量、攝食量以及血清中GSP及胰島素含量無明顯變化,高劑量縮泉丸能明顯減少DCP小鼠排尿量。2各組動物膀胱結(jié)構(gòu)與功能觀測結(jié)果尿動力學(xué)監(jiān)測結(jié)果表明,DCP模型小鼠漏尿點壓、膀胱最大壓、排尿效率均顯著降低,排尿量、膀胱容量、膀胱順應(yīng)性及殘余尿量明顯升高;縮泉丸可以上調(diào)DCP小鼠膀胱壓力與排尿效率,減少排尿量和殘余尿量,降低膀胱容量及膀胱順應(yīng)性。膀胱離體肌條實驗結(jié)果顯示,DCP模型小鼠膀胱肌條對α,β-meATP、Carbachol、Capsaicin與KC1的收縮反應(yīng)均顯著下降,且Capsaicin刺激后ATP釋放量明顯減少;縮泉丸高低劑量均可以增強DCP小鼠膀胱肌條對α,β-me ATP、Carbachol與Capsaicin的收縮反應(yīng)強度,并能增加膀胱肌條受Capsaicin刺激所釋放ATP量�？s泉丸高劑量還能增強DCP小鼠膀胱肌條對KC1的收縮反應(yīng)強度,縮泉丸低劑量對KC1的收縮反應(yīng)強度無明顯影響。膀胱組織病理形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),DCP小鼠膀胱壁厚及膠原密度明顯下降,并出現(xiàn)肌束排列紊亂,肌細(xì)胞肥大,膠原蛋白及彈性蛋白松散等狀況,經(jīng)縮泉丸干預(yù)后,膀胱組織病理形態(tài)學(xué)得到明顯改善。3各組動物相關(guān)神經(jīng)受體及神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)情況RT-PCR及免疫熒光實驗結(jié)果表明,DCP模型小鼠膀胱組織中CHRM3、TRPV1 mRNA及SP、NK1R、P2X2、P2X3表達(dá)水平均明顯下降;縮泉丸能夠顯著升高DCP小鼠膀胱組織中CHRM3、TRPV1mRNA及SP、NK1R、P2X2、P2X3表達(dá)水平;各組動物β3-AR mRNA表達(dá)水平未出現(xiàn)顯著性差異。結(jié)論:縮泉丸可以通過肌源性和神經(jīng)源性兩大方面改善DCP小鼠膀胱功能。其機制可能是:縮泉丸通過升高膀胱組織中CHRM3、TRPV1、NK1R及P2X3受體的表達(dá),以及促進相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)(如ATP、SP)的釋放,從而改善DCP小鼠膀胱失約及逼尿肌收縮無力等癥狀,
【圖文】：

圖２縮泉丸對ＤＣＰ小鼠ＯＧＴＴ的影響逡逑縮泉丸對ＤＣＰ小鼠口服糖耐量ＡＡＵＣ0－２ｈ邋（ｍｇ＊ｈｒ／ｄｌ）的影響（７±邋ｓ邋，，Ｔａｂｌｅ邋６邋Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ邋ｏｆ邋ＳｕｏＱｕａｎ邋Ｗａｎ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｇｌｕｃｏｓｅ邋ＡＡＵＣ0－２ｈ邋ｏｆ邋ＤＣＰ邋ｍｉ（ｘ邋±邋ｓ，ｎ＝８）逡逑

圖３縮泉丸對ＤＣＰ小鼠ＡＡＵＣｔｗｈ的影響逡逑２縮泉丸對ＤＣＰ小鼠糖代謝水平的影響逡逑
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

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本文編號：2653440