【摘要】：目的:觀察人參皂苷Rh1對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7增殖和侵襲能力的影響,并比較人參皂苷Rh1對兩種細(xì)胞系抑制作用強(qiáng)弱。探究人參皂苷Rh1對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7中DDIT3和HYAL1、PLD1三種基因表達(dá)的影響,驗證人參皂苷Rh1對乳腺癌的抑制作用并探討可能的作用靶點(diǎn)。材料與方法:人參皂苷Rh1分別作用于三陰型乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和luminal A型型人乳腺癌細(xì)胞MCF-7,觀察其對兩種乳腺癌細(xì)胞的抑制作用,計算抑制率,通過Origin軟件得到半抑制濃度(IC50);根據(jù)IC50計算合理的最佳藥物濃度作用于細(xì)胞,采用MTT法檢測細(xì)胞的增殖能力;通過Transwell小室觀察細(xì)胞侵襲力;細(xì)胞成球?qū)嶒炗^察細(xì)胞活性及增殖轉(zhuǎn)移能力;RT-PCR法檢測細(xì)胞中的DDIT3和HYAL1、PLD1的表達(dá),探討這些基因在乳腺癌細(xì)胞中差異性表達(dá)對乳腺癌的增殖、轉(zhuǎn)移是否有調(diào)控作用,從而找到人參皂苷Rh1在乳腺癌中可能的作用靶點(diǎn)。結(jié)果:1.研究發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7均有抑制作用,其中人參皂苷Rh1對人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231的抑制作用較強(qiáng),最大抑制率達(dá)到82.66%,IC50在0.59-0.64×10~(-3)mol/L之間,而MCF-7細(xì)胞的最大抑制率為80.46%,IC50在0.63-0.71×10~(-3)mol/L之間,IC50的數(shù)值越大反而抑制作用越弱。2.研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)人參皂苷Rh1濃度分別為250μM、500μM、750μM時對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231/MCF-7的最大抑制率分別為23.31%/18.93%、43.18%/39.53%、82.45%/80.39%,可見當(dāng)人參皂苷Rh1濃度為750μM時對腫瘤細(xì)胞抑制作用最為明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而且隨著藥物作用時間的延長抑制作用也隨之增強(qiáng),說明人參皂苷Rh1有明顯的濃度依賴性和時間依賴性。我們選擇人參皂苷Rh1濃度750μM時繪制細(xì)胞生長曲線,相同濃度的人參皂苷Rh1抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖作用強(qiáng)于MCF-7細(xì)胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.統(tǒng)計24小時穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)目,結(jié)果顯示:MDA-MB-231實(shí)驗組(21±1.14)、MDA-MB-231對照組(85.6±2.18);實(shí)驗組與對照組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);MCF-7實(shí)驗組(25.7±1.25),MCF-7對照組(84.8±1.37),實(shí)驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。對比人參皂苷Rh1對MDA-MB-231細(xì)胞侵襲能力抑制率(75%)與對MCF-7細(xì)胞侵襲能力抑制率(69%)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。4.本實(shí)驗發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1對腫瘤細(xì)胞成球能力有影響,一周后拍照對比發(fā)現(xiàn)對照組細(xì)胞成球率明顯高于實(shí)驗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。對比發(fā)現(xiàn)MDA-MB-231實(shí)驗組成球率較MCF-7實(shí)驗組低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5.RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh1使兩種細(xì)胞中的DDIT3、HYAL1、PLD1基因差異表達(dá),但只有HYAL1的低表達(dá)有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:1.本實(shí)驗中人參皂苷Rh1對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞活性均有抑制作用,其中人參皂苷Rh1對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的抑制作用較強(qiáng),IC50的數(shù)值在600-700μM之間。2.本實(shí)驗中人參皂苷Rh1有明顯的濃度依賴性和時間依賴性,當(dāng)人參皂苷Rh1濃度750μM時對人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7的增殖抑制作用最強(qiáng),隨著藥物作用時間的延長抑制作用也隨之增強(qiáng)。相同濃度的人參皂苷Rh1抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖作用強(qiáng)于MCF-7細(xì)胞,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.本實(shí)驗中人參皂苷Rh1降低人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7細(xì)胞的活力,影響細(xì)胞的增殖和侵襲能力,對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7的增殖和轉(zhuǎn)移有抑制作用,且對MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于MCF-7細(xì)胞。4.本實(shí)驗中人參皂苷Rh1對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和MCF-7的成球能力均有抑制作用,說明人參皂苷Rh1可能對乳腺癌細(xì)胞的干性有影響。5.基因HYAL1可能是人參皂苷Rh1抑制乳腺癌生物學(xué)行為的作用靶點(diǎn)。
【圖文】：

圖 1.不同濃度人參皂苷 Rh1 對細(xì)胞增殖抑制率 圖 2. 人參皂苷 Rh1750μM 時的細(xì)胞生長曲線.Transwell 實(shí)驗結(jié)果：人參皂苷 Rh1 濃度為 750μM 處理細(xì)胞，培養(yǎng) 24h 后實(shí)驗結(jié)果拍照并檢測侵襲數(shù)目果顯示：MDA-MB-231 實(shí)驗組（21±1.14）、MDA-MB-231 對照組（85.6±2.18）；組與對照組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；MCF-7 實(shí)驗組（25.7±1.25），MC照組（84.8±1.37），實(shí)驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。對比人苷 Rh1 對 MDA-MB-231 細(xì)胞侵襲能力抑制率（75％）與對 MCF-7 細(xì)胞侵襲能力抑制69％）有差異，，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。下圖（圖 3、圖 4）對比了 MDA-MB-231 細(xì)胞未經(jīng)人參皂苷 Rh1 作用與經(jīng)人參皂苷 用后的細(xì)胞侵襲遷移能力，可以明顯的看出經(jīng)人參皂苷 Rh1 作用后的細(xì)胞數(shù)量明顯，說明人參皂苷 Rh1 對人乳腺癌 MDA-MB-231 細(xì)胞的侵襲遷移能力有抑制作用。

圖 1.不同濃度人參皂苷 Rh1 對細(xì)胞增殖抑制率 圖 2. 人參皂苷 Rh1750μM 時的細(xì)胞生長曲線.Transwell 實(shí)驗結(jié)果：人參皂苷 Rh1 濃度為 750μM 處理細(xì)胞，培養(yǎng) 24h 后實(shí)驗結(jié)果拍照并檢測侵襲數(shù)目果顯示：MDA-MB-231 實(shí)驗組（21±1.14）、MDA-MB-231 對照組（85.6±2.18）；組與對照組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；MCF-7 實(shí)驗組（25.7±1.25），MC照組（84.8±1.37），實(shí)驗組與對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。對比人苷 Rh1 對 MDA-MB-231 細(xì)胞侵襲能力抑制率（75％）與對 MCF-7 細(xì)胞侵襲能力抑制69％）有差異，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義。下圖（圖 3、圖 4）對比了 MDA-MB-231 細(xì)胞未經(jīng)人參皂苷 Rh1 作用與經(jīng)人參皂苷 用后的細(xì)胞侵襲遷移能力，可以明顯的看出經(jīng)人參皂苷 Rh1 作用后的細(xì)胞數(shù)量明顯，說明人參皂苷 Rh1 對人乳腺癌 MDA-MB-231 細(xì)胞的侵襲遷移能力有抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉博;俞婷;陳乃宏;;人參皂苷抗炎分子機(jī)制的研究進(jìn)展[J];神經(jīng)藥理學(xué)報;2018年06期

2 張偉云;劉發(fā)貴;鄭毅男;;黑參加工過程中3種稀有人參皂苷的含量變化[J];時珍國醫(yī)國藥;2019年02期

3 吳曉民;趙丹;朱艷萍;王艷紅;;人參皂苷分析測定方法的研究進(jìn)展[J];上海中醫(yī)藥雜志;2018年05期

4 鄧碧華;朱俊;馬鶴毓;徐海;盧宇;;高效液相色譜法測定人參皂苷復(fù)乳中人參皂苷含量[J];中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志;2018年03期

5 方偉;;人參皂苷干預(yù)糖尿病微血管并發(fā)癥研究進(jìn)展[J];人參研究;2018年03期

6 李泰平;人參皂苷藥理活性的研究進(jìn)展[J];生物學(xué)教學(xué);2003年04期

7 崔杰;何正有;李維;劉婧;聶敏奎;;人參皂苷粉、銀杏葉提取物對雞胚絨毛尿囊膜血管新生的作用[J];成都大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2016年04期

8 魯文慧;楊辛欣;劉會;曹麗珠;張嘯環(huán);;不同蒸制時間對紅參中人參皂苷及農(nóng)藥殘留的影響[J];人參研究;2016年04期

9 郭楓;劉煥煥;邱智東;王偉楠;;稀有人參皂苷的酶轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)進(jìn)展;2017年04期

10 丁苗苗;楊凱倫;王東亮;汝文文;黃瑞;劉志東;李楠;張兵;;超微粉碎對西洋參中人參皂苷體外溶出的影響研究[J];天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2016年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 趙雪淞;王姣;宋王芳;;毀滅柱孢菌對人參皂苷的酶促降解與其致病性的關(guān)系[A];中國第八屆植物化感作用學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2017年

2 嚴(yán)欽;周偉;李幸慰;馮美卿;周s

本文編號：2653132