【摘要】：目的:研究石菖蒲-益智仁精油的提取方法,省睡方水提液和精油的抗AD活性及機制。方法:(1)采用水蒸氣蒸餾提取法和超臨界CO_2萃取法進行石菖蒲-益智仁精油的提取,用GC-MS法對提取的精油進行成分分析,并運用基于計算機系統(tǒng)的網絡藥理學方法,構建精油成分-靶點網絡、成分-靶點-疾病網絡及蛋白作用通路網絡圖,對不同提取方法所得精油關鍵成分活性進行預測比較,指導精油提取方法的選擇。(2)采用Aβ_(1-42)復制的AD小鼠模型及APP/PS1雙轉基因AD小鼠模型,以行為學、組織形態(tài)學、相關遞質含量水平的改變,對省睡方水提液灌胃及精油吸嗅抗AD活性進行研究。(3)采用免疫組化法,分析省睡方水提液及精油干預后小鼠腦內能量相關生化指標的變化,選取葡萄糖轉運體1(GLUT-1)及胰島素通路關鍵分子1(IRS-1)為指標,觀察省睡方防治AD的可能機制。結果:(1)通過GC-MS對兩種不同提取方法所得精油進行分析,水蒸氣蒸餾法共鑒定出揮發(fā)性成分35種,以醚類(54.70%)、烯類(25.82%)、酮類(2.88%)、醇類(1.68%)為主,超臨界CO_2萃取法共鑒定出49種,以醚類(37.97%)、烯類(20.26%)、酮類(16.81%)、烷類(7.40%)、醇類(0.92%)為主。(2)通過C-T-D網絡的構建,依據(jù)degree(度值)分析發(fā)現(xiàn),水蒸氣蒸餾提取中度值在8以上的成分有14種,主要為醚、醇、烯類化合物(合計相對百分含量64.12%);超臨界萃取中度值8以上的成分有10種,主要為醚、醇、烯類化合物(合計相對百分含量45.35%),而超臨界中占比較大的烷類(7.40%)、酮類(16.81%)化合物僅發(fā)現(xiàn)茉莉酮(0.22%)具有抗AD的靶點。提示在抗AD活性預測中,醚、醇、烯類化合物起著重要的作用,且水蒸氣蒸餾法相關成分的含量多于超臨界,超臨界提取雖能提取出更多種類的化合物,但與抗AD活性不呈正相關。(3)藥效驗證中,與正常組比較,模型組跳臺實驗潛伏期顯著收縮,錯誤次數(shù)顯著增長(P0.01),Morris水迷宮實驗定位航行逃避潛伏期明顯延長(P0.05,P0.01),海馬CA1區(qū)神經元出現(xiàn)缺失,DG區(qū)出現(xiàn)明顯的老年斑沉積(P0.05),ACH含量均顯著下降,GABA,GLU水平均顯著升高(P0.01);與模型組比較,各給藥組均可顯著延長小鼠跳臺實驗潛伏期、減少跳臺錯誤次數(shù)(P0.01),明顯降低定位航行小鼠逃避潛伏期(P0.01,P0.05),可以一定程度保護小鼠海馬CA1區(qū)神經元,減少DG區(qū)老年斑沉積(P0.05,P0.01),明顯增加小鼠腦組織中ACH表達(P0.05,P0.01),減少GABA,GLU水平(P0.01)。(4)免疫組化實驗中,與正常組比較,模型組GLUT1含量均顯著下降(P0.01),IRS-1的表達均顯著升高(P0.01);與模型組比較,各給藥組明顯增加小鼠腦組織中GLUT1表達(P0.05,P0.01),減少IRS-1的表達(P0.01)。結論:水蒸氣蒸餾法、超臨界CO_2萃取法所獲得的石菖蒲-益智仁精油均具有豐富的活性成分,均具有潛在的防治AD的活性,通過吸嗅給藥能在動物模型中得到相應的驗證,調控神經遞質系統(tǒng)、淀粉樣蛋白水平及能量代謝是石菖蒲-益智仁精油防治AD的機制之一。
【圖文】：

1) 表示劑量單位 μg·mL-1 AD 小鼠海馬 CA1 區(qū)神經元的影響從尼氏染色結果看，正常對照組小鼠海馬 CA1 區(qū)神經元排列有序，無明顯核固縮術組小鼠海馬 CA1 區(qū)神經元排列有序，無核固縮。模型組小鼠海馬 CA1 區(qū)神經組排列混亂，并具有神經元缺失、核固縮現(xiàn)象。各給藥組小鼠海馬 CA1 區(qū)神經元組排列有序，無明顯神經元缺失，但也存在疏松、核固縮。見圖 1。模型組 - 20.88±4.20精油低劑量組 12.131)22.91±4.99精油高劑量組 48.501)22.44±3.58原方對照組 0.46 21.93±3.16

E圖 2 對小鼠海馬 CA1 區(qū)神經元的影響(尼氏染色，×400)常組；B. 模型組；C. 精油低劑量組(12.13 μg·mL-1)；D. 精油高劑量組(48.50 μg·mL-1)；E. 原照組(0.46 g·kg-1)；n=3/組（圖 2 同）1 Effects on morphology in hippocampal CA1 region in AD mice（Nissl’s staining, × AD 小鼠海馬 DG區(qū)老年斑的影響硫磺素染色結果顯示，與正常組小鼠海馬比較，模型組海馬 DG 區(qū)的老年斑沉積升高（P<0.01）。與模型組比較，各給藥組小鼠海馬 DG 區(qū)老年斑沉積水平明顯<0.05，P<0.01）。見圖 2，表 4。A B C D
【學位授予單位】：江西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：TQ461;R285.5

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 易美華,肖紅,梁振益;益智仁、葉、莖揮發(fā)油化學成分的對比研究[J];中國熱帶醫(yī)學;2004年03期

2 蔣家華;黃風和;李月華;;益智仁氯仿抽提物對兔主動脈螺旋條收縮反應的影響[J];廣東醫(yī)藥學院學報;1989年02期

3 黃鳳和;林明世;鐘然;吳偉平;馮冰虹;李月華;;益智仁藥理作用的初步研究[J];廣東醫(yī)藥學院學報;1989年02期

4 趙士凱，，黃有云;益智仁的傳統(tǒng)炮制及其工藝選擇[J];中成藥;1994年03期

5 德晟;;暖腎固精益智仁[J];開卷有益-求醫(yī)問藥;2018年11期

6 ;益智仁栽培技術[J];農村實用技術;2008年10期

7 姬霞;砂仁與益智仁的鑒別[J];陜西中醫(yī);2002年04期

8 田紀祥;鐘俊武;;益智仁對小鼠的免疫調節(jié)作用的研究[J];世界最新醫(yī)學信息文摘;2018年90期

9 王魯;梁支明;舒暢;代方貴;;益智仁提取液抗應激作用試驗[J];中國獸醫(yī)雜志;2009年05期

10 李貞漢，蔡月英;益智仁炮制新法[J];福建中醫(yī)藥;1995年04期

相關會議論文 前10條

1 張俊清;王勇;陳峰;李海龍;譚銀豐;李永輝;;益智的化學成分與藥理作用研究進展[A];海峽兩岸暨CSNR全國第十屆中藥及天然藥物資源學術研討會論文集[C];2012年

2 李文兵;胡昌江;黃勤挽;謝秀瓊;;鹽炙益智仁中5-羥甲基糠醛的分離鑒定[A];中華中醫(yī)藥學會中藥炮制分會2009年學術研討會論文集[C];2009年

3 胡昌江;黃勤挽;李興華;謝秀瓊;余凌英;;益智仁鹽炙對豚鼠離體膀胱平滑肌活動影響的研究[A];中華中醫(yī)藥學會中藥炮制分會2008年學術研討會論文集[C];2008年

4 金傳山;吳德玲;周燕;;益智不同藥用部位間成分的比較研究[A];中華中醫(yī)藥學會第六屆中藥炮制學術會議論文集[C];2006年

5 胡昌江;帥小翠;王虎;徐志毅;王智鵬;張然;;益智仁鹽炙前后對縮泉丸縮尿作用的研究[A];2010全國知名中醫(yī)院院長暨道家文化與中醫(yī)藥養(yǎng)生論壇論文集[C];2010年

6 華俏麗;鄒川;吳禹池;許苑;劉旭生;;黃春林教授談尿失禁的中醫(yī)治療對策[A];中國中西醫(yī)結合學會腎臟疾病專業(yè)委員會2018年學術年會論文摘要匯編[C];2018年

7 胡昌江;帥小翠;王虎;徐志毅;王智鵬;張然;;益智仁鹽炙前后對縮泉丸縮尿作用的研究[A];2010中藥炮制技術、學術交流暨產業(yè)發(fā)展高峰論壇論文集[C];2010年

8 李文兵;胡昌江;吳珊珊;高源;龍?zhí)m艷;;益智仁鹽炙溫腎縮尿作用初步研究[A];中華中醫(yī)藥學會中藥炮制分會2011年學術年會論文集[C];2011年

9 董友軍;;機械搗藥效果好[A];2004年全國中藥研究暨中藥房管理學術研討會論文匯編[C];2004年

10 嵇志紅;于新宇;;益智仁水提取物對腦缺血大鼠記憶障礙的改善作用[A];“基因、進化與生理功能多樣性”海內外學術研討會暨中國生理學會第七屆比較生理學學術會議論文摘要[C];2009年

相關重要報紙文章 前10條

1 查渠;前列腺炎常用的中藥方[N];中國中醫(yī)藥報;2017年

2 石橋;藥材需求 左右價格[N];中國醫(yī)藥報;2001年

3 尚學瑞;鼻嗅識中藥[N];中國醫(yī)藥報;2003年

4 陸善旦;益智仁價格堅挺原因分析[N];中國中醫(yī)藥報;2000年

5 丁鄉(xiāng);四種中藥材貨少價揚[N];中國中醫(yī)藥報;2000年

6 雪立;大黃價堅走暢 枸杞命運難改[N];中國中醫(yī)藥報;2001年

7 農訓學;益智仁銷勢旺盛[N];中國中醫(yī)藥報;2001年

8 羅賢圣;亳州藥市 大茴 桔梗 佛手 益智仁價格反彈[N];中國中醫(yī)藥報;2001年

9 尚學瑞;鼻嗅識藥--淺談中藥材的鑒別[N];中國中醫(yī)藥報;2003年

10 宋盼來;益智仁價格在振蕩中前行[N];中國中醫(yī)藥報;2007年

相關博士學位論文 前2條

1 關水;益智仁中原兒茶酸對PC12細胞保護作用研究[D];大連理工大學;2006年

2 黃勤挽;益智仁鹽炙“縮尿”作用的研究[D];成都中醫(yī)藥大學;2008年

相關碩士學位論文 前10條

1 倪雅麗;基于腸道菌群與代謝組學分析益智仁治療糖尿病腎病的作用機制[D];海南醫(yī)學院;2019年

2 羅俊;石菖蒲—益智仁精油提取工藝及精油吸嗅給藥對AD的作用研究[D];江西中醫(yī)藥大學;2019年

3 牛晴;藥食同源植物益智Alpinia oxyphylla Miq.不同部位綜合利用價值研究[D];海南大學;2019年

4 王亞玲;益智仁乙酸乙酯部位化學成分及生物活性的研究[D];鄭州大學;2019年

5 馮惠敏;益智仁改善記憶和縮尿功效的活性成分研究[D];江南大學;2019年

6 龔曉猛;益智仁鹽炙后石油醚部位藥效成分分離與藥效驗證[D];成都中醫(yī)藥大學;2017年

7 景昊;中醫(yī)學對健忘的認識及田七、天麻、益智仁藥組對小鼠記憶力減退干預作用研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2014年

8 趙騫;益智仁健腦的神經保護作用藥效物質篩選[D];西南交通大學;2017年

9 李倩;中藥益智仁的化學成分研究[D];云南中醫(yī)學院;2014年

10 王治元;干姜和益智仁化學成分研究[D];安徽大學;2010年

本文編號：2650398