發(fā)布時(shí)間：2020-05-05 09:19

【摘要】：目的:基于金銀花中分離到的雙抗素六元環(huán)狀過(guò)氧化物結(jié)構(gòu),通過(guò)骨架躍遷設(shè)計(jì)和有機(jī)小分子仲胺催化劑催化串聯(lián)反應(yīng)合成新穎的手性六氫噠嗪類化合物,對(duì)該類化合物及其衍生物進(jìn)行體外抗腫瘤活性測(cè)試,并闡明其作用機(jī)制。方法:1.采用醛、硝基烯烴和偶氮二羧酸酯的串聯(lián)反應(yīng),合成一類雙抗素氮雜衍生物,并用~1H-NMR、~(13)C-NMR、HRMS進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,X-ray單晶衍射測(cè)定絕對(duì)構(gòu)型,手性HPLC分析對(duì)映體過(guò)量百分?jǐn)?shù),從而建立多官能團(tuán)化的手性六氫噠嗪類化合物庫(kù);2.運(yùn)用MTT法測(cè)定供試化合物對(duì)MCF-7乳腺癌細(xì)胞和HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞的體外抗增殖活性,并以細(xì)胞增殖活力、細(xì)胞形態(tài)學(xué)為評(píng)價(jià)指標(biāo),在細(xì)胞水平驗(yàn)證其體外抗腫瘤活性;3.采取生物信息學(xué)技術(shù)中的相關(guān)手段建立系統(tǒng)的藥物相關(guān)樞紐蛋白作用網(wǎng)絡(luò);4.利用流式細(xì)胞儀和熒光染色檢測(cè)其在體外誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性和對(duì)細(xì)胞周期的影響,借助蛋白印跡試驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)調(diào)控細(xì)胞凋亡相關(guān)靶點(diǎn)蛋白的表達(dá),從而對(duì)抑制MCF-7細(xì)胞增殖活性高的化合物做進(jìn)一步的分子機(jī)制研究。結(jié)果:1.高對(duì)映選擇性合成得到17個(gè)新化合物(4a-4eH和5a-5c),目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)都經(jīng)過(guò)~1H-NMR、~(13)C-NMR、HRMS正確分析表征,ee值用手性HPLC測(cè)定,均大于90%;2.體外抗腫瘤活性結(jié)果表明,各化合物物均有一定抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用,呈劑量相依的正相關(guān)。其中化合物5c作用最為明顯。3.作用機(jī)制研究表明,化合物5c產(chǎn)生抗腫瘤作用是通過(guò)兩條凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的實(shí)現(xiàn)的,細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)和多聚(二磷酸腺苷-核糖)聚合酶(PARP)相關(guān)通路。結(jié)論:我們已經(jīng)建立了一種通用于構(gòu)建多官能團(tuán)化的雙抗素氮雜衍生物的有機(jī)催化串聯(lián)反應(yīng)Michael-amination-hemiaminalization。由醛、硝基烯烴、偶氮二羧酸酯作為起始原料,能夠以中等到優(yōu)異的收率和高的立體選擇性得到一個(gè)具有抗腫瘤活性的產(chǎn)品化合物庫(kù)�；瘜W(xué)合成得到的手性六氫噠嗪類化合物通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而具有一定的體外抗人乳腺癌細(xì)胞和結(jié)腸癌細(xì)胞增殖作用。
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2017 屆碩士畢業(yè)論文化合物中，化合物 5c 具有劑量依賴性抑制 MCF-7 和 HCT116 癌細(xì)胞的增殖的活力，給藥 24 h 的 50%抑制率對(duì)應(yīng)濃度分別是 15 μM (8.5 μg mL-1)和 29.8 μM (16.9μg mL-1)。故隨后進(jìn)一步重點(diǎn)觀察化合物 5c 對(duì) MCF-7 細(xì)胞抗腫瘤的機(jī)制探討。

44圖 7A) 在剛加入 15 μM 的 5c 時(shí)或處理 24 h 后用相差顯微鏡觀察到 MCF-7 細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。最右邊的圖片是中間圖片方框區(qū)域的放大。B) 進(jìn)行和 A)相同的實(shí)驗(yàn)，，不同點(diǎn)在于培養(yǎng)中用 Hoechst 染料染色并用熒光顯微鏡觀察。C) 在實(shí)驗(yàn) A)中培養(yǎng)的細(xì)胞在未加 5c 處理和 5c 處理 12 h 或 24 h 后分別用流式細(xì)胞儀分析的結(jié)果。Figure 7. A) Cellular morphology of the MCF-7 cells was observed by phasecontrast microscopyin the absence of 15 μM 5c or after 24 h of exposure. The panel on the far right is a magnificationof the boxed region in the central panel. B) The same experiment as that in A) was conducted,except that cultures were stained with Hoechst dye and examined by fluorescence microscopy. C)Cultures from the experiment in A) were analyzed by flow cytometry (FCM) without exposure to5c or after exposure for 12 or 24 h.
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2649890