【摘要】：目的:探討杜鵑花總黃酮(TFR)改善缺血性腦損傷的保護作用與腦基底動脈瞬時受體電位通道4(TRPV4)、中電導的鈣激活鉀通道(IKca)、小電導的鈣激活鉀通道(SKca)的關系及可能存在的相關機制。方法:雄性SD(Sprague Dawley Rat)大鼠72只,8周齡,體質量(240±20)g,自由飲食與飲水。適應性喂養(yǎng)7天后,通過四血管阻斷法(four-vessel occlusion,4-VO)構建全腦缺血再灌注(CIR)模型。將CIR大鼠隨機分為CIR組(NS,n=8)、TFR組(100 mg/kg,n=8)、TFR+TRPV4阻斷劑HC-067047組(100 mg/kg+10 mg/kg,n=8)、HC-067047組(10 mg/kg,n=8)、TFR+IKca阻斷劑TRAM-34組(100mg/kg+0.5 mg/kg,n=8)、TRAM-34組(0.5 mg/kg,n=8)、TFR+SKca阻斷劑Apamin組(100 mg/kg+0.3 mg/kg,n=8)、Apamin組(0.3 mg/kg,n=8),以SD大鼠為假手術組(NS,n=8)。于夾閉兩側頸總動脈前30 min尾靜脈注射上述藥物,造模完成24 h后處死大鼠。腦電波記錄儀檢測腦組織缺血前,缺血25 min及再灌注2 h大鼠腦電波;造模前稱量大鼠體重,造模完成后取腦組織稱量其濕重,比較各組大鼠大腦重量指數差異;大鼠腹主動脈取血,分離血清,采用ELISA法檢測血清中MDA含量與LDH活性;HE及尼氏染色分別觀察大腦皮層病理學改變;采用動脈加壓灌注法,觀察TFR對CIR大鼠CBA產生舒張作用的影響及TRPV4、IKca、SKca通道阻斷劑對其產生的影響;Western blot法檢測TFR對CIR大鼠腦基底動脈TRPV4、IKca、SKca通道蛋白表達的影響及各阻斷劑對TRPV4、IKca、SKca通道蛋白表達的影響;RT-qPCR法檢測TFR對CIR大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表達的影響及各阻斷劑對TRPV4、IKca、SKca通道m(xù)RNA表達的影響;激光共聚焦檢測TFR對CIR大鼠CBA平滑肌細胞Ca~(2+)濃度的影響以及TRPV4、IKca、SKca通道阻斷劑對其產生的影響。結果:(1)與Sham組相比,CIR組大鼠缺血前腦電波無明顯變化;當缺血25min時,腦電波逐漸變平,波動變緩,波幅變低;再灌注2 h后腦電波逐漸恢復。(2)與Sham組相比,CIR組大鼠大腦重量指數明顯升高(P0.01);與CIR組相比,TFR組及TFR聯(lián)用各通道阻斷劑組大腦重量指數均呈不同程度降低(P0.01);與TFR組相比,TFR聯(lián)用HC-067047組大腦重量指數明顯升高(P0.05),TFR聯(lián)用TRAM-34組、Apamin組略有升高,但差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。(3)ELISA法結果顯示,CIR組與Sham組相比,大鼠血清中MDA含量及LDH活性顯著升高(P0.01);與CIR組相比,TFR組及TFR聯(lián)用各通道阻斷劑組MDA含量及LDH活性顯著降低(P0.05,P0.01);與TFR組相比,TFR聯(lián)用各阻斷劑組MDA含量及LDH活性均有所升高(P0.05,P0.01)。(4)HE及尼氏染色顯示CIR大鼠腦組織大量細胞萎縮變性、胞核深染、胞質空泡、神經纖維崩解,TFR組及TFR聯(lián)用各阻斷劑組腦組織病理變化呈不同程度改善。(5)動脈加壓灌注結果顯示,累加濃度的TFR能劑量依賴性的舒張CIR大鼠CBA,而使用TRPV4、IKca、SKca通道阻斷劑預處理后出現不同程度抑制血管舒張反應的現象。(6)Western blot法結果表明,CIR組較Sham組,大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表達水平顯著降低(P0.01);與CIR組相比,TFR組CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表達水平顯著升高(P0.01),聯(lián)用各通道阻斷劑組CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表達均有所升高(P0.05),單用各通道阻斷劑組CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表達明顯下降(P0.05,P0.01);與TFR組相比,各聯(lián)用通道阻斷劑組CBA中TRPV4、IKca、SKca蛋白表達明顯下降(P0.05,P0.01)。(7)RT-qPCR結果顯示,CIR組較Sham組,大鼠CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表達顯著降低(P0.01);與CIR組相比,TFR組CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表達顯著升高(P0.01),聯(lián)用各通道阻斷劑組CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表達均有所升高(P0.01),單用各通道阻斷劑組CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表達明顯下降(P0.05,P0.01);與TFR組相比,聯(lián)用各通道阻斷劑組CBA中TRPV4、IKca、SKca mRNA表達明顯下降(P0.05,P0.01)。(8)激光共聚焦結果顯示,與Sham組相比,CIR組大鼠CBA平滑肌細胞Ca~(2+)熒光強度顯著增強(P0.01);與CIR組相比,TFR組及TFR聯(lián)用各阻斷劑組Ca~(2+)熒光強度呈不同程度減弱(P0.05,P0.01);與TFR組比較,TFR聯(lián)用各阻斷劑組Ca~(2+)熒光強度明顯增強(P0.01)。結論:TFR對全腦缺血再灌注大鼠腦損傷具有明顯的改善作用,其機制可能與TFR作用于腦基底動脈,激活TRPV4通道,繼而激活IKca與SKca通道,使內源性EDHF增多,導致平滑肌細胞產生內皮依賴性超極化,阻滯Ca~(2+)內流,促使腦基底動脈舒張有關。
【圖文】：

圖 4 TRPV4 等各阻斷劑對 TFR 改善 CIR 大鼠大腦皮層病理學改變的影響（尼氏染色，×400 倍）Fig 4 Effects of various blockers such as TRPV4 on the pathological changes of cerebracortex in CIR rat induced by TFR (Nissl staining, × 400)A:Sham；B:CIR；C:TFR；D:TFR+HC-067047；E:TFR+Apamin；F: TFR+TRAM-. HE 染色觀察大鼠腦組織病理學改變如圖 5 所示，與 Sham 組相比，CIR 組大鼠腦組織細胞出現大量空泡，萎圍間隙增大，神經纖維崩解以及小血管增生，并見有少量膠質細胞水腫。IR 組相比，TFR 組腦組織病變明顯改善，但仍存在少量細胞變性；各聯(lián)用阻組的腦組織細胞變性壞死仍較明顯，但較 CIR 組有所改善。提示 TFR 對全血再灌注大鼠腦組織具有保護作用，且可能與 TRPV4、SKca 及 IKca 通道

圖 5 TRPV4 等各阻斷劑對 TFR 改善 CIR 大鼠腦組織病理學改變的影響（HE 染色，×400 倍）Fig 5 Effects of various blockers such as TRPV4 on the pathological changes of cerebratissue in CIR rat induced by TFR (HE staining, × 400)：Sham；B：CIR；C：TFR；D：TFR+HC-067047；E：TFR+Apamin；F：TFR+TRAM. 動脈加壓灌注法檢測 CIR 大鼠 CBA 舒張作用的改變.1 TFR 對 CIR 大鼠 CBA 舒張作用的影響如表 5、圖 6、圖 7 所示，，在 PSS 液中加入 L-NAME(3×10-5mol/L)和 I10-5mol/L）預灌注 CIR 大鼠 CBA 30 min 后，加入 30 mmol/L KCl 使血管收定，再依次灌注含有 TFR（11~2700 mg/L）的 PSS 液。實驗結果發(fā)現，在 NO 和 PGI2血管舒張作用的情況下，累加濃度的 TFR 仍能使 CBA 產生濃
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

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2 韓軍;宣佳利;胡浩然;陳志武;;金絲桃苷對大鼠離體大腦中動脈血管內皮功能的影響及其內在機制的研究[J];中國中藥雜志;2014年24期

3 趙涓涓;柯國平;湯俊;黃娟;黎莉;;線栓法大腦中動脈閉塞所致局灶性腦缺血再灌注鼠模型的腦水腫和腦梗死比的變化[J];數理醫(yī)藥學雜志;2006年04期

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相關博士學位論文 前3條

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本文編號：2648197