發(fā)布時間：2020-04-24 09:21

【摘要】：實驗目的:通過對模型組大鼠尿液生成調節(jié)激素,鈉鉀泵活性,肝臟各類水轉運蛋白表達、含量、mRNA的含量、磷酸化水平的系統(tǒng)研究探究濕阻中焦證對肝臟Na~+-K~+-ATP酶活性、尿液生成調節(jié)激素、水轉運蛋白的影響及平胃散干預關系,探討平胃散是否通過影響Na~+-K~+-ATP酶活性,調整尿液生成調節(jié)激素失衡狀態(tài),使肝臟水轉運蛋白含量、表達、活性發(fā)生變化,維持水鹽平衡,揭示尿液調節(jié)激素與水轉運蛋白在濕困脾胃后的作用機制,及平胃散對肝細胞跨膜物質轉運功能的調控作機理。實驗方法:濕阻中焦證造模后比色法測定肝臟鈉鉀泵活性,過氧化物酶法檢測肝臟中葡萄糖含量,HPLC檢測肝臟ATP含量,ELISA測定血清中各類激素和肝臟組織中SGLT1、GLUT2、NKCC1含量、PCR法測定肝臟組織SGLT1、GLUT2、NKCC1中mRNA的含量,WB法測定肝臟組織中SGLT1、GLUT2、NKCC1磷酸化水平的影響。實驗結果:1濕阻中焦證模型的評估:(1)對大鼠進行一般情況觀察,濕困脾胃證大鼠形體消瘦,食欲較差,飲水明顯減少,嗜睡倦臥。(2)濕邪侵襲后大鼠的胃腸運動和糖吸收異常,肝臟葡萄糖不能轉化利用,ATP生成減少,鈉鉀泵活力降低。(3)濕困脾胃后各類水轉運蛋白在肝組織免疫表達異常。(4)服藥治療后,模型組大鼠宏觀體征、客觀指標、病理損傷、免疫功能、代謝能力都有所改善。2尿液生成激素的含量造模后,與空白組對照,濕困脾胃證大鼠腎素、血管升壓素、內皮素、腎上腺素、血管緊張素Ⅱ的含量出現(xiàn)降低,醛固酮和利鉀尿肽的含量升高;與濕困脾胃證大鼠比較,機體進行自我修復后或服用平胃散后腎素、血管緊張素Ⅱ、心房鈉尿肽的含量均高于濕困脾胃證大鼠,內皮素、醛固酮、利鉀尿肽、抗利尿激素、腎上腺素的含量均低于模型組;與自然恢復組比較,給予不同劑量中藥治療組中腎素、血管緊張素Ⅱ、醛固酮、心房鈉尿肽的含量高于自然恢復組,給予不同劑量的中藥后,腎上腺素和血管升壓素的含量低于自然恢復組大鼠;服用高劑量和中劑量中藥組內皮素的含量高于恢復組,服用中藥中劑量組利鉀尿肽的含量高于自然恢復組,服用中藥低劑量組內皮素的含量低于自然恢復組,用平胃散高劑量,和低劑量灌胃后的大鼠利鉀尿肽的含量明顯比自然恢復組低。3肝臟水轉運蛋白的表達、含量、mRNA的含量、磷酸化活性。(1)水糖協(xié)同轉運蛋白免疫表達、含量、mRNA的含量、磷酸化活性變化濕困脾胃后,與正常組進行對照,濕困脾胃證大鼠肝臟中SGLT1的蛋白免疫表達出現(xiàn)上調,SGLT1的含量表現(xiàn)為降低,mRNA的含量降低,磷酸化活性降低;經過恢復后,與濕困脾胃證大鼠進行對照,恢復組肝臟中SGLT1的蛋白表達表現(xiàn)為上調,SGLT1的含量會降低,mRNA的含量出現(xiàn)降低,磷酸化活性升高;與自然恢復組比較,給予不同劑量的中藥組肝臟中SGLT1的蛋白表達上調,SGLT1的含量升高,mRNA的含量升高,SGLT1磷酸化活性降低。濕困脾胃后,與空白組進行對照,濕困脾胃證大鼠肝臟中GLUT2的蛋白表達表現(xiàn)為下調趨勢,GLUT2的含量出現(xiàn)降低,mRNA的含量降低,磷酸化活性降低;與濕困脾胃證大鼠進行對照,自然恢復后肝臟中GLUT2的蛋白表達出現(xiàn)下調趨勢GLUT2的含量升高,mRNA的含量升高,磷酸化活性升高;與恢復組比較,給予不同劑量的平胃散中藥后肝臟中GLUT2的蛋白表達出現(xiàn)下調的趨勢,GLUT2的含量高,mRNA的含量升高,平胃散低劑量組肝臟中GLUT2磷酸化活性升高,平胃散高、中劑量有降低趨勢。(2)水鹽協(xié)同轉運蛋白免疫表達含量、mRNA的含量、磷酸化活性變化造模后,與空白組進行對照,濕困脾胃證大鼠肝臟中NKCC1的蛋白表達上調,NKCC1的含量升高,mRNA的含量降低,NKCC1磷酸化活性降低。與濕困脾胃證大鼠比較,經恢復后肝臟中NKCC1的蛋白表達出現(xiàn)下調,NKCC1的含量會降低,mRNA的含量升高,NKCC1磷酸化活性升高,與自然恢復組比較,平胃散高劑量組肝臟中NKCC1的蛋白表達有上調趨勢,平胃散中、低劑量組肝臟中NKCC1的蛋白表達有下調趨勢,不同劑量中藥組NKCC1的含量升高,mRNA的含量升高,平胃散高、中、劑量組肝臟中NKCC1磷酸化活性有降低趨勢,低劑量中藥組肝臟中NKCC1磷酸化活性有升高趨勢。(3)水通道蛋白免疫表達含量、mRNA的含量、磷酸化活性變化前期實驗發(fā)現(xiàn),濕阻中焦后,肝臟中水通道蛋白1和水通道蛋白4的免疫表達增強,含量,mRNA的含量及磷酸化活性都降低,服用不同劑量的中藥平胃散后,水通道蛋白1和水通道蛋白4的免疫表達降低,含量,mRNA的含量及磷酸化活性都升高。實驗結論:濕阻中焦證不僅會影響大鼠腎素、血管緊張素、醛固酮、內皮素、血管升壓素、心房鈉尿肽和利鉀尿肽等水液代謝激素;還會導致水轉運蛋白肝臟表現(xiàn)異常,SGLT1、NKCC1、AQP1、AQP4免疫表達上調,GLUT2免疫表達下調;SGLT1、GLUT2、AQP1、AQP4含量會降低,NKCC1含量升高;肝臟SGLT1、GLUT2、NKCC1、AQP1、AQP4中mRNA的含量減少;SGLT1、GLUT2、NKCC1、AQP1、AQP4磷酸化水平降低;葡萄糖升高,ATP減少,鈉鉀泵的活力降低。這可能會是濕阻中焦發(fā)生的重要機制。平胃散能通過增強代謝率,進而增強鈉鉀泵活力。通過調節(jié)血清中水液代謝調節(jié)激素的平衡,調節(jié)尿量使細胞內外電解質達到平衡。同時通過調節(jié)肝臟水轉運蛋白表達、含量和磷酸化活性,平衡細胞內外的離子,從而使人體的整個水液代謝趨于平衡。
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學 2018 屆碩士學位論文65附件附錄 1：附圖1 濕阻中焦證模型大鼠圖 1 自制大鼠造模箱 圖 2 在造模箱內造模的大鼠圖 3 在造模箱內造模前的大鼠 圖 4 在造模箱內造模后的大鼠2 免疫組化病理圖片2.1 SGLT1 在肝臟的分布

在造模箱內造模的大鼠
【學位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

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本文編號：2638801