【摘要】：研究目的:探討疏肝健脾法治療肝郁脾虛型慢性乙型肝炎的優(yōu)越性,并通過蛋白酪氨酸激酶(Janus Kinase,JAK)-信號轉導子和轉錄激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信號轉導通路,進一步闡明其可能作用機制,為推廣臨床應用疏肝健脾法治療慢性乙型肝炎提供理論依據(jù)與數(shù)據(jù)支持。研究方法:1、制備人體血清:選取40名健康志愿者以及80名符合納入標準的肝郁脾虛型慢性乙型肝炎患者。將患者隨機分成中藥組和西藥組,每組各40名,分別給予疏肝健脾法中藥復方和恩替卡韋治療,連續(xù)用藥14天。靜脈采血10ml,低溫高速離心10min,制成人體含藥血清及正常血清,-20℃凍存待用。2、細胞體外培養(yǎng):HepG2.2.15細胞株用完全培養(yǎng)基,置于37℃,5%CO2細胞孵育箱內常規(guī)培養(yǎng)。分組后給予相應實驗血清培養(yǎng)。3、采用噻唑藍(methyl thiazolylium,MTT)比色法檢測各組血清干預HepG2.2.15細胞48h、96h、144h后的生長情況。4、采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測各組血清干預HepG2.2.15細胞48h、96h、144h后HBsAg分泌情況。5、采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)檢測各組血清干預 HepG2.2.15 細胞 48h、96h、144h 后 JAK2 mRNA、STAT3 mRNA 的相對表達水平。結果:1、用MTT法檢測各組血清干預HepG2.2.15細胞不同時間后細胞生長情況,結果顯示:與細胞對照組相比,各實驗血清組均能促進細胞生長增殖(P0.01),西藥血清組與10%、20%中藥血清組兩兩相比,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2、用ELISA法檢測各組血清干預HepG2.2.15細胞不同時間后細胞分泌HBsAg情況,結果顯示:在48h、96h、144h時,西藥血清組與中藥血清組差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);但144h時,10%中藥血清組與20%中藥血清組相比,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。3、用qPCR法檢測各組血清干預HepG2.2.15細胞不同時間后JAK2mRNA的相對表達水平,結果顯示:與細胞對照組相比,健康血清組上調JAK2mRNA表達水平(P0.05),其余各組含藥血清隨著干預時間延長,均抑制JAK2mRNA相對表達,20%中藥血清組更能明顯下調JAK2mRNA表達水平(P0.01)。4、用qPCR法檢測各組血清干預HepG2.2.15細胞不同時間后STAT3 mRNA的相對表達水平,結果顯示:與細胞對照組相比較,健康血清組調控STAT3 mRNA表達作用無明顯差異(P0.05),而西藥血清組、10%中藥血清及20%中藥血清組均不同程度下調STAT3mRNA表達(P0.05),尤其20%中藥血清組下調STAT3mRNA作用最明顯(P0.01)。結論:1、疏肝健脾法含藥血清能夠相對抑制HepG2.2.15細胞增殖,并與時間正相關。2、疏肝健脾法含藥血清能持續(xù)、穩(wěn)定抑制HepG2.2.15細胞分泌HBsAg,具有一定抗HBV作用,其效果較西藥恩替卡韋明顯。3、疏肝健脾法含藥血清明顯降低HepG2.2.15細胞內JAK2,STAT3mRNA相對表達水平。4、疏肝健脾法含藥血清抗HBV作用機制可能與下調細胞內JAK2,STAT3mRNA的表達,阻斷JAK2-STAT3信號轉導通路有關。
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圖２－１邋ＨｅｐＧ２．２．１５細胞生長曲線逡逑４．２邋ＥＬＩＳＡ法檢測ＨｅｐＧ２．２．１５細胞分化ＨＢｓＡｇ的情況逡逑結果顯示（見表２－３、圖２－２）：在４}、９化時，四組人體化清分別與細胞對照組兩逡逑兩分析對比，均有統(tǒng)計學差異（尸＜０．０５）；西藥血清組與１０％、２０％中藥血清組相比有逡逑顯著差異（尸＜０．０１），同時，西藥血清組抑制率明顯高于健康血清組（尸＜０．０５）邋；邋２０％逡逑中藥血清組對ＨＢｓＡｇ的抑制率高于１０％中藥血清組，二者對比具有顯著統(tǒng)計學差異（尸逡逑＜０．０１）。１４他時，西藥血清組分別與其他血清組比較，差異有統(tǒng)計學意義（；＾＜０．０５）；逡逑但１０％中藥血清組與２０％中藥血清組相比，，差異無統(tǒng)計學意義（Ｐ＞０．０５）。在不同時逡逑間節(jié)點，各組實驗血清均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５細胞分泌ＨＢｓＡｇ，差異具有統(tǒng)計學意義（尸逡逑＜０．０５）。由此表明，疏肝健脾法含藥血清與恩替卡韋均能抑制ＨｅｐＧ２．２．１５細胞表達逡逑ＨＢｓＡｇ

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本文編號：2638017