【摘要】：胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。晚期胃癌主要的治療手段仍已化療為主,然而在治療過程中往往會產生耐藥性。有報道指出,從中藥丹參(Salvia miltiorrhiza)中分離得到的二萜類產物丹參酮(Tanshinones)顯示出多種抗癌活性,尤為突出的是其在不同癌癥中能夠逆轉癌細胞耐藥性。因此,本研究旨在探究丹參植物中活性成分含量最高的丹參酮ⅡA(Tanshinone ⅡA,TAN ⅡA)是否能夠逆轉胃癌細胞對廣譜性抗癌藥物多柔比星(Doxorubicin,DOX)的耐藥性。目的:觀察TAN ⅡA是否可以逆轉對DOX耐藥的胃癌細胞耐藥性,并探究其潛在的分子機制。方法:基于DOX的IC_(50),鑒定了對DOX較為敏感的胃癌細胞SNU-719和SNU-610,以及對DOX相對耐藥的胃癌細胞SNU-638,SNU-668,SNU-216和SNU-620(內源性耐藥);通過選擇性藥物濃度逐步增加法,挑選兩種DOX敏感性胃癌細胞SNU-719和SNU-610作為母本細胞,分別建立了對DOX耐藥胃癌細胞SNU-719R和SNU-610R(獲得性耐藥);利用DOX和DOX+TAN ⅡA兩種不同方式處理細胞,通過流式細胞術分析細胞周期分布、細胞凋亡情況以及藥物外排情況;結合Real-time PCR檢測相關藥物外排轉運蛋白的mRNA表達;利用Western blot法分析研究細胞中各種相關蛋白質的表達水平;通過ELISA來測定凋亡相關蛋白酶的活性等。結果:(1)TAN ⅡA與DOX聯(lián)合用藥后,TAN ⅡA能夠逆轉胃癌細胞對DOX產生的耐藥性;(2)在由多藥耐藥相關蛋白1(Multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)過表達介導產生的DOX耐藥中,使用TAN ⅡA與DOX聯(lián)合用藥可以引起MRP1的下調,從而逆轉胃癌細胞對DOX的耐藥;(3)TAN ⅡA的存在能夠引起對DOX耐藥的胃癌細胞中細胞周期G2/M期發(fā)生阻滯;(4)在使用TAN ⅡA與DOX共處理細胞后,我們通過實驗檢測到促凋亡蛋白p53和Bax的上調,抗凋亡蛋白Bcl-2的下調,佐以流式分析不同藥物處理后細胞的凋亡情況,證明了TAN ⅡA能夠引起胃癌耐藥細胞中細胞凋亡水平的增加;(5)當DOX和TAN ⅡA共處理后引起了胃癌耐藥細胞中自噬相關蛋白LC3B-Ⅱ的顯著上調以及p62的下調,因此表明TAN ⅡA能夠激活自噬信號,誘導胃癌耐藥細胞的自噬性細胞死亡,最終達到逆轉耐藥的目的。結論:TAN ⅡA可以逆轉對DOX耐藥的胃癌細胞耐藥性,是一種能夠參與胃癌聯(lián)合用藥治療的潛在試劑。
【學位授予單位】：皖南醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2635976