【摘要】：目的結合課題組前期采用基因芯片篩選阿霉素誘導的慢性腎小球腎炎(chronic glomerulonephritis,CGN)大鼠模型和芪藤消濁顆粒干預后的CGN大鼠模型的基因表達譜的研究基礎,本研究采用高通量測序(high through-put sequencing,HTS)技術檢測并比較CGN模型組、正常對照組和芪藤消濁顆粒干預后的大鼠腎組織中環(huán)狀RNA(circular RNA,circ RNA)的表達譜變化,探討CGN可能的發(fā)病機制及芪藤消濁顆粒的作用機理。方法雄性SD大鼠50只,隨機挑選10只作為正常組,其余大鼠分別于第1天和第14天尾靜脈注射阿霉素(adriamycin,ADR)。第1天注射阿霉素的劑量為4.0mg/kg,第14天注射阿霉素的劑量為3.5mg/kg,第21天將所有大鼠置于代謝籠中留取24小時尿液并檢測24小時尿蛋白總量。本研究中判斷模型成功的標準為24小時尿蛋白總量50mg/kg。隨后我們隨機挑選造模成功的模型大鼠30只并隨機分為模型組、芪藤消濁顆粒組(10.8g/kg)和陽性藥黃葵膠囊組(1.0g/kg),每組10只,芪藤消濁顆粒組和陽性藥黃葵膠囊組分別灌胃給予相應劑量的藥物,其余組給予等量的生理鹽水灌胃,每天1次,共30天。于末次給藥后,再次將所有大鼠置于代謝籠中留取24小時尿液并檢測24小時尿蛋白總量。實驗結束后,通過稱量各組大鼠的雙側腎臟重量除以相應大鼠體重計算腎臟臟器指數(shù);蘇木精-伊紅染色(HE)染色和電鏡觀察各組大鼠腎組織的病理學改變;高通量測序技術檢測各組大鼠腎皮質組織中circ RNA的表達譜;具有顯著意義的差異的環(huán)狀RNA的篩選標準為fold change(FC)2并且P0.05;基于mi Randa的專有mi RNA靶標預測軟件(http://www.microrna.org)預測模型組和對照組之間所有差異表達的circ RNAs靶向的mi RNAs,再用mi RTar Base預測潛在的mi RNAs靶向的m RNAs,進一步通過Cytoscape(http://cytoscape.github.io/)軟件構建circ RNA-mi RNA-m RNA ce RNA網絡;用clusterprofiler軟件對上面circ RNA-mi RNA-m RNA ce RNA網絡中的的mRNAs進行基因本體論(Gene Ontology,GO)和信號通路(Pathway)分析;隨機選擇4個顯著差異表達的circ RNAs,運用實時熒光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)在所有的對照組、模型組和芪藤消濁顆粒組大鼠中進行驗證。結果1.高通量測序的檢測結果:在9組樣本中共檢測出5363個環(huán)狀RNA,經過篩選標準:FC2并且P0.05過濾得到對照組和模型組中差異表達的circ RNAs有31個,其中模型組中上調的circ RNAs有14個、下調的circ RNAs有17個;這些circ RNAs廣泛分布于所有染色體上,包括Y染色體;模型組和芪藤消濁顆粒組中顯著差異表達circ RNAs有21個,將這21個circ RNAs與上面31個circ RNAs取交集得到由于復制阿霉素CGN模型而導致失調并被芪藤消濁顆粒逆轉的circ RNAs有4個。2.對于差異表達的circ RNAs的生物信息學分析結果:模型組與對照組之間顯著差異表達的31個circ RNA至少有4種潛在mi RNA的結合位點,超過83%的circ RNAs至少擁有23種潛在的mi RNA結合位點。進一步針對差異表達的circ RNAs的生物信息學分析結果顯示模型組和對照組中差異表達的circ RNAs潛在靶向的mi RNAs和m RNAs與CGN的發(fā)生發(fā)展關系密切;同樣地,被芪藤消濁顆粒逆轉的4個circ RNAs潛在靶向的mi RNAs和m RNAs也與CGN的發(fā)生發(fā)展關系密切。3.差異表達的circ RNA的q RT-PCR驗證結果:應用q RT-PCR在對照組和模型組中所有的大鼠上驗證在模型組中上調的2個circ RNAs:rno-circ RNA-689、rno-circ-RNA-3217和在模型組中下調的2個circ RNAs:rno-circ RNA-1327、rno-circ-RNA-5001,均與測序結果一致。另外,用q RT-PCR在對照組、模型組和芪藤消濁顆粒組所有的大鼠中驗證rno-circ RNA-213、rno-circ RNA-689rno-circ RNA-3217和rno-circ RNA-5001的表達情況,結果均與測序結果一致。結論1.circ RNAs在慢性腎小球腎炎發(fā)病過程中存在差異表達;2.芪藤消濁顆粒對慢性腎小球腎炎有一定的治療作用,其作用機理可能與調節(jié)差異表達的circ RNAs有關.
【圖文】：

圖 1 HE 染色觀察大鼠腎皮質組織的病理學改變（ⅹ200）Fig 1. HE-staining observation of pathological changes in rat renal cortex（ⅹ200）注：A：對照組；B：模型組；C：QTXZG 組；D：黃葵膠囊組；a：間質內炎性細胞浸潤；b：蛋白質管形；c:系膜細胞增生。透射電鏡下，正常組腎小球系膜細胞無增生，內皮細胞結構正常，足細胞足突結構清晰完整，呈杵樣并列排列于基底膜外側，基底膜結構完整，厚度均勻；模型組腎小球系膜基質增多，系膜區(qū)增寬， 足突節(jié)段性輕、中度融合，，系膜區(qū)可見云霧狀電子致密物質沉積，芪藤消濁顆粒組腎小球系膜細胞和系膜基質輕微增生，系膜區(qū)寬度與模型組相比明顯變窄，足突節(jié)段性輕度融合，少許云霧狀電子致密物沉積；黃葵膠囊組腎小球系膜細胞和系膜基質輕微增生，足突節(jié)段性輕度融合（圖 2）。

23圖 2. 電鏡觀察大鼠腎皮質組織的病理學改變（ⅹ3000）Fig 2. Electron microscopic observation of pathological changes in rat renal cortex（ⅹ3000）注：A：對照組；B：模型組；C：QTXZG 組；D：黃葵膠囊組；a：足突融合；b：系膜基質增多
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉文寶;;一種快速高質量植物總RNA提取方法介紹[J];山東蔬菜;2007年02期

2 靳偉;張瑞芝;常翠芳;;環(huán)狀RNA及其生物學功能概述[J];生物學教學;2018年12期

3 孫暢;張朝霞;;環(huán)狀RNA研究進展[J];國際檢驗醫(yī)學雜志;2019年02期

4 苗嘉峰;馬小艮;裴卓;趙榮國;李玉紅;;特定環(huán)狀RNA表達與衰老的關系研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2019年01期

5 郭岱昀;;RNA藥物的研發(fā)現(xiàn)狀[J];中國處方藥;2019年02期

6 張沛;高春林;夏正坤;;環(huán)形RNA與相關疾病研究進展[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2018年09期

7 李懷東;李昕澤;;小干擾RNA研究概況[J];世界最新醫(yī)學信息文摘;2019年35期

8 張碩;王非凡;劉洪臣;;環(huán)狀RNA調控骨髓間充質干細胞成骨分化的研究進展[J];口腔頜面修復學雜志;2019年05期

9 楊宗霖;王藝;馬田田;霍春月;劉曉;闞云超;李丹丹;;有翅和無翅豌豆蚜中翅型分化信號通路相關微小RNA及其靶基因的表達差異[J];昆蟲學報;2019年11期

10 鄭凌伶;戚益軍;屈良鵠;;走向國際科技前沿的中國RNA研究[J];中國科學:生命科學;2019年10期

相關會議論文 前10條

1 張暢斌;尹愛華;何天文;王波;鄧文喻;賴有行;;一種經濟便捷的手足口病原RNA提取方法[A];廣東省遺傳學會第九屆代表大會暨學術研討會論文及摘要匯編[C];2014年

2 李園園;陸俊梅;程松;崔振玲;;RNA恒溫擴增實時檢測技術鑒定鳥分枝桿菌和胞內分枝桿菌[A];第四屆中國臨床微生物學大會暨微生物學與免疫學論壇論文匯編[C];2013年

3 Jingrong Wang;Junping Kou;Hilda Yau;Wanrong Zong;Tongmeng Yan;Zhi-Hong Jiang;;Protective Effect and Sequences of RNA Fragments from Ginseng's Larger RNAs against Myocardial Ischemia Injury in Mice[A];中國化學會第十一屆全國天然有機化學學術會議論文集（第一冊）[C];2016年

4 郭曉強;張巧霞;黃衛(wèi)人;蔡志明;;長鏈非編碼RNA與腎細胞癌發(fā)生[A];遺傳多樣性：前沿與挑戰(zhàn)——中國的遺傳學研究（2013-2015）——2015中國遺傳學會大會論文摘要匯編[C];2015年

5 吳建軍;李勛;黃錦坤;楊倜;徐益勤;楊巧媛;蔣義國;;環(huán)境化學物暴露血液非編碼RNA標志物研究[A];中國毒理學會第七次全國毒理學大會暨第八屆湖北科技論壇論文集[C];2015年

6 李成云;梁戈玉;姚文卓;隋靜;申嫻;張艷秋;馬書梅;尹立紅;浦躍樸;;胃癌相關長鏈非編碼RNA的鑒定及腫瘤標志物的篩選研究[A];中國毒理學會第七次全國毒理學大會暨第八屆湖北科技論壇論文集[C];2015年

7 徐勇;張付全;張克讓;Yin Yao Shugart;;精神分裂癥中轉錄因子-微小RNA交互調控網絡的異常[A];中華醫(yī)學會第十三次全國精神醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2015年

8 韓艷華;陳紅印;張禮生;;RNA干擾技術在昆蟲滯育機制研究中的應用[A];植�？萍紕�(chuàng)新與農業(yè)精準扶貧——中國植物保護學會2016年學術年會論文集[C];2016年

9 王小利;吳佳海;舒健虹;牟瓊;;高羊茅光周期調控基因RNA干擾表達載體構建[A];中國草學會2013學術年會論文集[C];2013年

10 魏任雄;;長鏈非編碼RNA與男性不育的研究進展[A];中華中醫(yī)藥學會第十四次男科學術大會論文集[C];2014年

相關重要報紙文章 前10條

1 中科院上海生科院上海植物生理生態(tài)所 毛穎波;尋找小RNA世界里的另一道風景[N];科學時報;2011年

2 通訊員 黃艾嬌 記者 吳苡婷;RNA修飾調控的特殊功能被發(fā)現(xiàn)[N];上�？萍紙�;2020年

3 本報記者 沈則瑾;破解環(huán)形RNA之謎[N];經濟日報;2019年

4 記者 顏維琦;我科學家深度“解碼”環(huán)形RNA[N];光明日報;2019年

5 唐一塵;新“剪刀”能暫時編輯RNA[N];中國科學報;2019年

6 趙熙熙;實驗室“原始湯”生成RNA堿基[N];中國科學報;2019年

7 記者 黃辛;科學家實現(xiàn)活細胞RNA標記與無背景成像[N];中國科學報;2019年

8 記者 耿挺;RNA剪接基因編輯新方法[N];上�？萍紙�;2018年

9 記者 聶翠蓉;基因檢測“神探夏洛克”問世[N];科技日報;2017年

10 本報記者 聶翠蓉;讓RNA處理器在活細胞中“奔騰”[N];科技日報;2017年

相關博士學位論文 前10條

1 孫振;CRISPR/Cas9技術介導的RNA甲基轉移酶NSUN2基因敲除及其功能研究[D];揚州大學;2019年

2 桑奔;長非編碼RNA調控腫瘤細胞耐藥及衰老的機制研究[D];中國科學技術大學;2019年

3 劉戀;RNA差異甲基化與共甲基化模式分析方法研究[D];西北工業(yè)大學;2018年

4 郭巍;山楂屬植物中蘋果褪綠葉斑病毒小RNA解析及其靶基因功能的研究[D];沈陽農業(yè)大學;2019年

5 劉中天;TNRC6對哺乳動物細胞中RNA干擾和基因表達調控的影響[D];西北農林科技大學;2019年

6 王熵;siRNA的非對稱結構對RNA干擾的影響研究[D];湖南師范大學;2016年

7 盧梅華;革蘭氏陽性菌RNA降解關鍵酶的結構與功能研究[D];浙江大學;2019年

8 張楊;RNA互作文本挖掘工具開發(fā)及應用研究[D];電子科技大學;2019年

9 靳建軍;長非編碼RNA SYISL對肌肉生長發(fā)育的影響及其分子機制研究[D];華中農業(yè)大學;2018年

10 龔朵;CCDC80下調血管平滑肌細胞LPL表達對動脈粥樣硬化的影響及機制[D];南華大學;2019年

相關碩士學位論文 前10條

1 趙佳;玉米赤霉素響應的編碼RNA和長鏈非編碼RNA研究[D];揚州大學;2019年

2 喻景雯;基于概率模型的長非編碼RNA-疾病關聯(lián)關系預測方法研究[D];湘潭大學;2019年

3 羅準;環(huán)狀RNA circPTPRM對肝癌細胞生物學行為的影響及其臨床意義的研究[D];中國醫(yī)科大學;2019年

4 何俊豪;基于序列與結構特征的RNA中IRES元件預測研究[D];南京航空航天大學;2018年

5 趙菊平;RNA溫度感應器調控鼠疫耶爾森氏菌F1抗原表達機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

6 曾昭萍;第一部分 緬甸輸入性Ⅰ型和Ⅱ型登革病毒的全基因組序列測定和分子特征分析 第二部分 多瘤病毒SV40來源的環(huán)狀RNA的發(fā)現(xiàn)[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

7 樂張慧;LncRNA及RNA m6A甲基化在肢端型黑色素瘤中發(fā)病機制的初步研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

8 朱慧娟;長鏈非編碼RNA ENST00000444488.1調控血管平滑肌細胞遷移的作用機制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2019年

9 熊信果;光溫敏核不育水稻育性差異相關的小RNA分析[D];華中農業(yè)大學;2019年

10 楊真禎;非編碼RNA circRNA_100395結合miR-144-3p發(fā)揮抑制心肌纖維化的作用[D];華南理工大學;2019年

本文編號：2630737