【摘要】：目的:本研究為國家自然科學基金項目組成部分旨在通過動物實驗探討蠲脈Ⅰ號溫陽拆方、蠲脈Ⅰ號全方、金匱腎氣丸對家兔ASO模型的防治作用,并通過進一步研究探討溫陽方藥對ASO模型家兔血清鈣離子、血管組織細胞內(nèi)鈣離子濃度及鈣調(diào)節(jié)蛋白的調(diào)節(jié)作用。初步驗證鄧柏楊教授根據(jù)異病同治原則,在現(xiàn)有大量文獻研究和自身前期研究的基礎(chǔ)上提出的,ASO發(fā)病機制與老年腎陽虛血管細胞內(nèi)鈣超載相關(guān)的假說。方法:選用新西蘭大白兔35只,隨機分為正常對照組、模型組、蠲脈Ⅰ號溫陽拆方組、蠲脈Ⅰ號全方組、金匱腎氣丸組,每組7只。采用單純高脂喂養(yǎng)實驗家兔12周復(fù)制ASO模型,并在模型復(fù)制期間同步給藥。12周后根據(jù)彩色多普勒腹主動脈血管照影及腹主動脈HE染色病理切片檢測判斷模型制備情況。實驗開始與結(jié)束時各采血一次檢測血脂四項、血流變及血清鈣離子等血液指標。模型制備成功后,麻醉下無菌操作截取2-3cm腹主動脈,分為兩份,一份做石蠟切片HE染色鏡下觀察血管組織機構(gòu)形態(tài)學變化,一份液氮速凍qPCR檢測各組血管組織中CAM(鈣調(diào)蛋白)基因mRNA的相對表達量。每組隨機抽取3只家兔腹主動脈血管組織用預(yù)冷的PBS溶液迅速清洗干凈精細剪將血管組織剪成肉糜,消化細胞懸液加入flo-4-am熒光探針進行流式細胞儀檢測熒光強度及細胞內(nèi)鈣離子陽性比例。結(jié)果:12周后血管超聲照影結(jié)果顯示,正常對照組家兔腹主動脈內(nèi)經(jīng)正常管壁光滑未見明確斑塊回聲。模型組家兔腹主動脈內(nèi)膜局部欠光滑,可見多個強回聲斑塊附著。腹主動脈病理切片檢測顯示,模型組有明顯的斑塊形成管腔縮窄;各組血液指標檢測結(jié)果:1、實驗前正常對照組、模型組、蠲脈Ⅰ號溫陽拆方組、蠲脈Ⅰ號全方組、金匱腎氣丸組五組血脂指標總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)濃度無差異(p0.05);血流變指標全血低切粘度、高切粘度、血漿粘度以及紅細胞壓積,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);血清鈣離子濃度對比無差異(P0.05);2、模型制備成功后各組血液指標比較(1)模型組及各藥物治療組與正常對照組比較均是TC、LDL-C濃度明顯升高(P0.05),TG、HDL-C濃度無明顯差異(P0.05);血流變指標全血低切粘度、高切粘度、血漿粘度以及紅細胞壓積,均不同程度升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);血清鈣離子濃度對比無差異(P0.05);(2)各藥物治療組與模型組對比,TC、TG、LDL-C和HDL-C濃度無明顯差異(p0.05);血流變指標全血低切粘度、高切粘度、血漿粘度以及紅細胞壓積,差異無統(tǒng)計學意(P0.05);血清鈣離子濃度對比無差異(P0.05);3、各組腹主動脈病理切片HE染色結(jié)果顯示(1)正常對照組血管組織內(nèi)膜表面光滑,完整,內(nèi)皮細胞排列整齊無隆起,中膜平滑肌細胞環(huán)裝排列,整齊;(2)模型組與各藥物治療組均有不同程度的內(nèi)皮損傷斑塊形成,模型組血管組織形態(tài)最差,全方組基本正常,拆方組與金匱腎氣丸組血管組織形態(tài)較差但優(yōu)于模型組;4、qPCR檢測各組血管組織中cam(鈣調(diào)蛋白)基因mRNA的相對表達量結(jié)果顯示各組之間無明顯差異(P0.05);5、細胞流式檢測結(jié)果顯示(1)模型組與正常對照組比較細胞內(nèi)鈣離子濃度降低差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)(2)模型組與各藥物治療組比較,鈣離子濃度低于各藥物治療組(P0.05)。結(jié)論:1、采用單純高脂喂養(yǎng)家兔12周制備成功制備ASO動物模型。2、實驗后除正常對照組外,模型組及藥物治療組均患有高脂血癥且血液處在高粘狀態(tài),藥物在防治ASO疾病中對家兔血液脂質(zhì)及血液黏度水平的影響不明顯,可能是因在喂藥過程中同時高脂喂養(yǎng)干擾了藥物療效。3、通過血管組織形態(tài)學變化對比,溫陽拆方能夠降低斑塊形成風險保護血管結(jié)構(gòu)的完整性防止病變。其效果可能是溫陽法能夠促進鈣離子內(nèi)流,提高并維持血管組織細胞內(nèi)鈣離子濃度產(chǎn)生。而模型組血管組織細胞內(nèi)鈣離子濃度低,說明ASO的發(fā)病機制可能是血管組織細胞內(nèi)鈣離子的“空載”而非“超載”。4、采用經(jīng)典溫腎助陽方劑金匱腎氣丸以方測癥,其起到一定的防治作用,但效果不如蠲脈Ⅰ號溫陽拆方,高脂誘導的ASO動物模型可能為陽虛證。
【圖文】：

正常對照組與模型組家兔血管彩超結(jié)果

正常對照組與模型組家兔血管組織病理切片HE染色結(jié)果
【學位授予單位】：廣西中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2630150