【摘要】：研究背景:腹膜透析是終末期腎臟病(End-stage renal disease,ESRD)患者進(jìn)行腎臟替代治療(renal replacement therapy,RRT)的主要方式之一。研究發(fā)現(xiàn)腹透患者體內(nèi)的慢性炎癥誘導(dǎo)的腹膜間皮細(xì)胞發(fā)生上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是引起腹膜纖維化、腹膜結(jié)構(gòu)和功能改變的重要原因,最終將導(dǎo)致腹膜透析技術(shù)失敗、患者退出治療。大腸桿菌等革蘭陰性菌感染引起的腹透相關(guān)性腹膜炎在我國南方地區(qū)十分常見。苦參堿具有抑菌、抗炎和抗纖維化等多種藥理作用,本課題組前期實驗研究發(fā)現(xiàn)苦參堿還可以抑制大腸桿菌生物膜形成。然而,苦參堿對炎癥狀態(tài)下的腹膜間皮細(xì)胞發(fā)生EMT的作用研究尚不清楚,因此本實驗用大腸桿菌細(xì)胞壁主要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的腹膜間皮細(xì)胞EMT模型,結(jié)合相關(guān)EMT標(biāo)志物、miRNAs,探討苦參堿對HPMC發(fā)生EMT的作用。目的:采用LPS誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞(human peritoneal mesothelium cell,HPMC)發(fā)生EMT的體外模型,通過細(xì)胞水平的研究探討苦參堿對HPMCs發(fā)生EMT的作用,同時研究miR-29b、miR-129-5p表達(dá)水平的變化。方法:MTT法及細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察測定LPS、苦參堿對HPMCs生長活性影響,探究用LPS誘導(dǎo)HPMCs發(fā)生EMT模型的適宜濃度以及苦參堿對LPS誘導(dǎo)HPMCs發(fā)生EMT模型作用的有效濃度。劃痕實驗顯微鏡下觀察空白組、LPS組、LPS+苦參堿中劑量組3組0h、8h、16h、24h HPMCs遷移能力的變化。實時熒光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR)測24h空白組、LPS組、LPS+低劑量苦參堿組、LPS+中劑量苦參堿組、LPS+高劑量苦參堿組5組HPMCs上皮細(xì)胞標(biāo)志物鈣粘附蛋白E(E-cadherin)、間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物α-平滑肌肌動蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)、miR-29b、miR-129-5p的表達(dá)水平。蛋白免疫印跡分析(western blot analysis)測72h空白組、LPS組、LPS+低劑量苦參堿組、LPS+中劑量苦參堿組、LPS+高劑量苦參堿組5組HPMCs E-cadherin、α-SMA的蛋白含量的變化。結(jié)果:MTT實驗發(fā)現(xiàn)0.1g/l~2.0g/l苦參堿對HPMCs生長活性不影響。0.5ug/ml~20ug/ml LPS對HPMC生長活性不影響。同時參照文獻(xiàn)選擇LPS誘導(dǎo)濃度:10ug/ml,苦參堿干預(yù)濃度:0.2g/l(低劑量),0.4g/l(中劑量),0.6g/l(高劑量)。顯微鏡下觀察LPS、LPS+0.6g/l苦參堿刺激HPMCs 72h后細(xì)胞生長狀態(tài)與空白組相比不受影響。劃痕實驗顯示LPS處理增強(qiáng)了HPMCs的遷移能力,苦參堿可抑制LPS誘導(dǎo)的HPMCs遷移能力增強(qiáng)。10ug/ml LPS可誘導(dǎo)HPMCs發(fā)生EMT,表現(xiàn)為E-cadherin表達(dá)量較空白對照組下降、α-SMA表達(dá)量上升�？鄥A可抑制LPS誘導(dǎo)的HPMCs EMT,表現(xiàn)為E-cadherin表達(dá)回升,α-SMA表達(dá)下降,呈濃度相關(guān)性。LPS可誘導(dǎo)HPMCs miR-29b、miR-129-5p表達(dá)水平降低,苦參堿干預(yù)可提升HPMCs miR-29b、miR-129-5p表達(dá)水平,呈濃度相關(guān)性。結(jié)論:LPS可誘導(dǎo)HPMCs發(fā)生EMT,減少HPMCs miR-29b、miR-129-5p表達(dá)�？鄥A可抑制LPS誘導(dǎo)HPMCs發(fā)生的EMT,使HPMCs miR-29b、miR-129-5p表達(dá)回升。
【圖文】：

究生學(xué)位論文 苦參堿對脂多糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞發(fā)生上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化胞劃痕修復(fù)實驗結(jié)果劃痕后 8 h LPS組較對照組及LPS+苦參堿組細(xì)胞缺口變小。劃組細(xì)胞劃痕的缺口逐漸縮小，而對照組及 LPS+苦參堿組細(xì)胞劃較寬。劃痕后 24h 后 LPS 組細(xì)胞劃痕的缺口消失，而對照組堿組細(xì)胞劃痕的缺口仍有明顯缺口。見圖 3

碩士研究生學(xué)位論文 苦參堿對脂多糖誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞發(fā)生上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化3.4 LPS 誘導(dǎo)及不同濃度苦參堿作用 HPMCs 后 E-cadα-SMA 的 mRNA 表達(dá)結(jié)果10ug/ml 的 LPS 誘導(dǎo)處理 HPMC 24h 后,細(xì)胞的 E-cadherin 的 達(dá)水平降低，α-SMA 的 mRNA 表達(dá)水平升高，，與空白對照組相比統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同時予 10ug/ml LPS 及苦參堿(0.2g/l,0.4g/l,0預(yù), 細(xì)胞與LPS組相比E-cadherin的mRNA表達(dá)水平回升，α-SMA表達(dá)水平降低，且呈濃度相關(guān)性(P<0.05)。見圖 4-3
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 龐麗莎;趙湘;;Wnt/β-catenin信號通路調(diào)控間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化參與腹膜纖維化[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2016年02期

2 王保蘭;鄭玉龍;;EMT、TGF-β_1、Ang Ⅱ與器官纖維化發(fā)生機(jī)制的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年22期

3 劉小榮;;預(yù)防腹膜透析相關(guān)性腹膜炎[J];中華實用兒科臨床雜志;2015年22期

4 陳續(xù)紅;劉虹;;腹膜透析腹膜失功能的防治[J];中國血液凈化;2015年09期

5 郭鵬;董棟棟;王進(jìn);許建發(fā);馮和林;;轉(zhuǎn)錄因子在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中分子機(jī)制研究進(jìn)展[J];臨床與病理雜志;2015年03期

6 孫亦兵;王瑩;溫紅梅;;不同殘余腎功能對行腹膜透析尿毒癥患者微炎癥狀態(tài)的影響[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年05期

7 趙向陽;姚萍;張玲;;丹參對腹膜纖維化的作用及機(jī)制的研究[J];中國傷殘醫(yī)學(xué);2013年03期

8 黃海華;;腹膜透析與血液透析患者生存質(zhì)量的對比分析[J];武漢大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2012年06期

9 梁俐;廖蘊(yùn)華;王成玉;鄒龍濤;;苦參聯(lián)合左氧氟沙星對腹膜透析管大腸桿菌生物被膜的影響[J];實用醫(yī)學(xué)雜志;2012年10期

10 李屹;張麗楠;楊磊;;苦參堿藥理作用研究進(jìn)展[J];實用中醫(yī)藥雜志;2012年05期

本文編號：2626736