【摘要】：流行性感冒(簡(jiǎn)稱(chēng)流感)的爆發(fā)流行已經(jīng)成為了對(duì)公共健康的嚴(yán)峻考驗(yàn),其頻繁變異引起的新突發(fā)人禽流感,更時(shí)常伴隨著較高的致病致死率,為人類(lèi)社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)和危害。流感病毒感染宿主后,除了病毒的復(fù)制增殖會(huì)對(duì)機(jī)體組織帶來(lái)直接傷害,感染后往往會(huì)誘發(fā)過(guò)度的免疫炎癥反應(yīng),造成宿主機(jī)體的二次傷害,目前常用的抗流感抗炎治療藥物已經(jīng)面臨著耐藥率高、副作用大的困擾。在長(zhǎng)期的臨床應(yīng)用中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)中藥對(duì)流感起著良好的治療作用,目前從傳統(tǒng)中藥中發(fā)掘可行的新型抗病毒藥物已經(jīng)成為了當(dāng)下重要的研究方向。傳統(tǒng)中藥臭靈丹,作為我國(guó)具有民族以及地方特色的民間常用中草藥,在既往的基礎(chǔ)或臨床研究中已被證實(shí)對(duì)時(shí)行感冒具有一定的防治作用,然而對(duì)于其中有效的活性成分尚未完全明確。在前期通過(guò)對(duì)其進(jìn)行活性追蹤研究已發(fā)現(xiàn)臭靈丹中的總黃酮、倍半萜類(lèi)等組分具有抑制流感病毒及其介導(dǎo)炎癥相關(guān)通路的激活。目的:1.通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)明確臭靈丹總黃酮部位的抗流感和調(diào)節(jié)炎癥的效果,再逐一探索從臭靈丹總黃酮成分分離所得的單體化合物抗流感及其介導(dǎo)炎癥的藥效,通過(guò)研究臭靈丹黃酮類(lèi)化合物對(duì)流感病毒感染宿主所引起的相關(guān)信號(hào)通路以及細(xì)胞因子、趨化因子變化的調(diào)節(jié)作用,探索臭靈丹黃酮類(lèi)化合物治療流感的藥理機(jī)制。2.根據(jù)前期活性追蹤成果已證實(shí)臭靈丹倍半萜成分有著確切的抗流感效果,本研究希望通過(guò)其與不同化學(xué)藥物的聯(lián)合用藥進(jìn)行抗病毒治療,尋找可以與其產(chǎn)生協(xié)同作用的化學(xué)藥物,為臭靈丹可以更精準(zhǔn)服務(wù)于臨床治療展開(kāi)了探索。方法:1.通過(guò)運(yùn)用液相色譜法從臭靈丹總黃酮成分中分離出多個(gè)黃酮化合物單體并對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。2.進(jìn)行體內(nèi)抗流感病毒及其介導(dǎo)炎癥的藥效實(shí)驗(yàn),明確總黃酮部位的抗流感抗炎效果,將總黃酮藥物,分高、低劑量組(200mg/kg·d、100mg/kg·d),和陽(yáng)性藥物磷酸奧司他韋(60mg/kg·d)預(yù)防給藥1天后,繼續(xù)對(duì)流感感染小鼠給藥治療5天,分別觀察小鼠體重變化、死亡保護(hù)、肺病毒滴度、肺病理變化情況等指標(biāo)明確總黃酮部位的體內(nèi)抗流感效果。3.對(duì)于分離所得黃酮類(lèi)化合物,采用噻唑藍(lán)染色法(MTT法)、細(xì)胞病變抑制法(CPE,Cytopathic Effect)分別觀察各個(gè)化合物的細(xì)胞毒性以及體外對(duì)流感病毒的抑制作用。4.利用蛋白免疫印跡技術(shù)檢測(cè)黃酮化合物對(duì)流感病毒感染相關(guān)的宿主細(xì)胞信號(hào)通路影響,包括p38/MAPK,NF-κB,STAT-3等,以實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)各黃酮化合物對(duì)流感病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞因子及趨化因子信使RNA表達(dá)水平的影響。5.通過(guò)聯(lián)合用藥的方法對(duì)已明確具有抗病毒藥效的臭靈丹倍半萜類(lèi)成分進(jìn)行應(yīng)用探索,研究其聯(lián)合不同類(lèi)型的抗病毒化學(xué)藥物在體外治療不同亞型的流感病毒所起的藥效作用。成果:1.從總黃酮中分離得到6個(gè)黃酮類(lèi)單體化合物,并分別鑒定出其各自的結(jié)構(gòu)分別為5,6-二羥基-3,7,4'-三甲氧基黃酮、蔓荊子黃素、5,4'-二羥基-6,7,-二甲氧基黃酮、5-羥基-3,6,7,3',4'-五甲氧基黃酮、5,4'-二羥基-3,6,7-三甲氧基黃酮以及5,4'-二羥基-3,5,7,4'-四甲氧基黃酮。2.臭靈丹總黃酮部位的體內(nèi)藥效結(jié)果:臭靈丹總黃酮對(duì)感染甲型流感病毒FM1株小鼠具有一定的炎癥調(diào)節(jié)作用,藥物組(200、100mg/kg·d))可有效降低流感病毒感染小鼠的肺指數(shù),與病毒組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;肺組織病理結(jié)果顯示臭靈丹總黃酮高劑量治療組(200mg/kg ·d)的肺組織病理炎癥性改變較病毒組有一定程度的減輕(P0.05),總黃酮治療組對(duì)流感病毒感染小鼠肺泡灌洗液中的IL-6、IP-10等炎癥因子也能起到調(diào)節(jié)作用,與病毒組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。但臭靈丹總黃酮治療組并不能改善病毒感染引起的小鼠體重下降,對(duì)流感感染小鼠也沒(méi)有死亡保護(hù)作用,對(duì)肺病毒滴度測(cè)定提示該藥物無(wú)直接抑制流感病毒在小鼠體內(nèi)的復(fù)制X椫匙饔，

本文編號(hào)：2623076