【摘要】：目的:本文以魚腥草藥材為模型,通過研究其總蛋白質(zhì)、水溶性成分、揮發(fā)油成分分析魚腥草中甲基正壬酮生源代謝相關的成分體系,結(jié)合中藥超分子理論、分子連接性指數(shù)、成分質(zhì)控與生源代謝控制雙模式質(zhì)控方法,試圖創(chuàng)建一種適宜中藥特點的質(zhì)量評控體系,實現(xiàn)全面控制中藥的質(zhì)量的新思路與新模式。方法:首先采用Tris-HCL法提取魚腥草中總蛋白,用Bradford法建立標準蛋白的曲線,并測定魚腥草中不同部位蛋白質(zhì)的含量,SDS-PAGE電泳分析魚腥草中的蛋白質(zhì),為后續(xù)研究魚腥草中甲基正壬酮生源代謝相關酶系奠定基礎;然后提取魚腥草中的水溶性成分和揮發(fā)油成分,分別對其進行檢測分析,探究魚腥草中甲基正壬酮生源代謝相關成分體系,以GC/MS檢測出的自提取的魚腥草揮發(fā)油成分為指標,計算魚腥草揮發(fā)油成分的分子連接性指數(shù);最后以甲基正壬酮為配基,γ-縮水甘油醚氧丙基三甲氧基硅烷為硅烷偶聯(lián)劑,采用硅膠法制備甲基正壬酮親和介質(zhì)色譜,再用GC法、親和介質(zhì)法和孵育法釣取魚腥草蛋白質(zhì)中的甲基正壬酮生源代謝酶系,為魚腥草中其他成分的生源代謝節(jié)點研究及其后續(xù)研究奠定基礎。結(jié)果:Bradford法建立標準蛋白的曲線方程為Y=0.03535C+0.08445(R2=0.9995),測得野生新鮮魚腥草全株、葉、根和根莖中蛋白質(zhì)的含量依次為7.540μg·m L-1、8.757μg·m L-1、6.889μg·m L-1和5.889μg·m L-1,市場購買的魚腥草根莖中蛋白質(zhì)的含量為4.522μg·m L-1,SDS-PAGE電泳分析魚腥草中蛋白質(zhì)的分子量范圍在10-100 k Da。魚腥草水溶性成分指紋圖譜顯示其種類很多,且精密度、重復性、穩(wěn)定性實驗均良好,分離度也比較好;GC/MS檢測出的魚腥草揮發(fā)油成分有50種,含量前三的依次為甲基正壬酮、β-蒎烯和α-蒎烯,計算GC/MS檢測出的自提取的魚腥草揮發(fā)油成分的分子連接性指數(shù)數(shù)值范圍在2.480-12.822之間,其平均分子連接性指數(shù)數(shù)值為5.398,甲基正壬酮的分子連接性指數(shù)數(shù)值為5.265,魚腥草素(癸酰乙醛)的分子連接性指數(shù)數(shù)值為5.731,癸酰乙酸的分子連接性指數(shù)數(shù)值為5.639。魚腥草中甲基正壬酮生源代謝節(jié)點的研究中,GC法顯示,保留時間為15 min左右明顯的成分群峰為甲基正壬酮代謝相關的成分群;成功的制備了甲基正壬酮親和介質(zhì),并調(diào)取了魚腥草中甲基正壬酮的生源代謝酶系,其分子量大小為10 k Da。結(jié)論:野生新鮮魚腥草中蛋白質(zhì)的含量比市場購買的魚腥草根莖中的蛋白質(zhì)含量都高,且野生新鮮魚腥草中蛋白質(zhì)的含量高低依次為全株、葉、根、根莖,魚腥草中蛋白質(zhì)的分子量大多數(shù)都為大分子;魚腥草水溶性成分和揮發(fā)油成分中未檢測出魚腥草素和癸酰乙酸,可能是魚腥草素經(jīng)過氧化后生成癸酰乙酸,其再進一步降解生成甲基正壬酮,故檢測出來的魚腥草揮發(fā)油成分中甲基正壬酮的含量最高。魚腥草中甲基正壬酮的生源代謝酶的分子量大小為10 k Da左右,進而推斷魚腥草植物體中甲基正壬酮的代謝途徑為Decanoylacetaldehyde 3-Oxododecanoic acid=2-Undecanone+CO2,代謝酶為3- oxolaurate decarboxylase。
【圖文】：

表 2 魚腥草不同部位的蛋白含量測定（n=3）Table 2. Determination of protein content in different parts of H.cordata (n=3部位 吸光度 濃度/μg·mL全株 0.351 7.540葉 0.394 8.757根 0.328 6.889根莖 0.293 5.899根莖* 0.245 4.522E 電泳同部位蛋白質(zhì)的 SDS-PAGE 電泳分析見圖 2，編號 1-6 為新鮮野場購買的魚腥草根莖，，從左至右依次為：根-稀釋的根-根莖-稀釋-稀釋的根莖。

圖 3：魚腥草水溶性成分的 HPLC 圖譜（回流水提取法）Fig 3. The HPLC chromatographic fingerprint of water-solubility components in HCT圖 4：魚腥草水溶性成分的 HPLC 圖譜（超聲醇提法）Fig 4. The HPLC chromatographic fingerprint of water-solubility components in HCT4 小結(jié)通過對魚腥草水溶性成分的 HPLC 圖譜研究，魚腥草中化學成分出峰較多的 HPLC譜條件為：色譜柱 Welch Ultimate XB-C18 (4.6*250mm, 5μm)；流動相：A: 0.1%磷酸水
【學位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R284

【參考文獻】

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1 曾燕;郭蘭萍;王繼永;黃璐琦;田壯;焦連魁;鄧庭偉;;基于電子舌技術的不同來源黃芩藥材味覺信息分析及味覺信息與主要化學成分的相關性研究[J];中國現(xiàn)代中藥;2015年11期

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本文編號：2614909