【摘要】：目的:非酒精性脂肪性肝病作為一種常見的代謝性疾病,嚴(yán)重威脅著人類的生命健康。自噬(autophagy)通過“自我清除”的方式,雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹細胞內(nèi)產(chǎn)生的一些損壞性蛋白或細胞器后,然后將其送入酵母和植物體內(nèi)的液泡中或動物體內(nèi)的溶酶體中進行進一步的降解,從而得到循環(huán)利用的一個過程,對于維持細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要作用。姜黃素是從草本植物姜黃中提取的天然色素,也是其活性成分。非酒精性脂肪性肝病變性肝細胞存在自噬現(xiàn)象,且自噬在脂肪酸誘導(dǎo)肝細胞損傷過程中可能發(fā)揮保護作用,姜黃素又能夠誘導(dǎo)許多腫瘤細胞發(fā)生自噬。因此,探討姜黃素是否通過誘導(dǎo)變性肝細胞自噬,進而清除非酒精性脂肪性肝病肝細胞內(nèi)脂肪聚集,達到保護肝細胞作用,為臨床應(yīng)用姜黃素治療非酒精性脂肪肝提供新的依據(jù)。方法:應(yīng)用高脂飲食復(fù)制NAFLD小鼠模型,觀察姜黃素對NAFLD小鼠模型肝組織病理的影響及小鼠肝組織中LC3-Ⅱ蛋白水平。應(yīng)用10%醫(yī)用脂肪乳復(fù)制NAFLD細胞模型通過油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂滴變化,Western blot檢測細胞中自噬泡標(biāo)志分子LC3-Ⅱ蛋白質(zhì)表達的影響,吖啶橙染色后在熒光顯微鏡下觀察不同濃度不同時間姜黃素干預(yù)后自噬細胞變化以及電鏡下觀察自噬小體的變化,明確姜黃素對非酒精性脂肪肝細胞自噬作用的影響。結(jié)果:與NAFLD模型組相比,姜黃素處理組NAFLD小鼠肝組織肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常,無明顯纖維化形成,輕度肝細胞脂肪變性及少量炎癥細胞浸潤;與NAFLD模型組相比,姜黃素組中肝臟組織內(nèi)自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表達明顯上調(diào)。不同濃度姜黃素干預(yù)脂肪細胞,光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果表明50μmol/L姜黃素對脂肪細胞抑制明顯,且50μmol/L的姜黃素作用于L-02細胞6 h,12 h后會導(dǎo)致細胞內(nèi)LC3的表達量明顯上調(diào),而24 h組肝細胞LC3表達沒有繼續(xù)增加,說明姜黃素主要促進脂肪變性L-02細胞早期發(fā)生自噬;吖啶橙染色后在熒光顯微鏡下觀察,不同濃度姜黃素干預(yù)后,自噬細胞染色質(zhì)濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒,自噬發(fā)生時間主要集中在6 h,12 h,說明姜黃素誘導(dǎo)早期細胞自噬。結(jié)論:姜黃素可能成為非酒精性脂肪肝病的有效防治藥物,其作用機制與促進細胞自噬有關(guān)。
【圖文】：

第3章 實驗結(jié)果3.1 姜黃素對 NAFLD 小鼠模型肝組織病理的影響① 對照組：可觀察到肝組織的生理結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉及匯管區(qū)的結(jié)構(gòu)好且無脂肪變性、壞死及明顯的炎癥細胞浸潤情況，未見纖維間隔的形成。② NAFLD模型組：可觀察到肝細胞偏腫大，，且部分呈現(xiàn)氣球樣變，細胞核周圍可以觀察到較多大小不等的脂肪滴，肝細胞發(fā)生嚴(yán)重的脂肪變性；肝竇擴大纖維間隔形成，部分有假小葉形成；可觀察到有大量炎細胞的浸潤。③ 姜黃素組：可觀察到輕度的肝細胞脂肪變性及少量炎癥細胞的浸潤；肝小的結(jié)構(gòu)基本正常，且無明顯的纖維化形成。

圖 2 姜黃素對肝組織 LC3-Ⅱ蛋白質(zhì)表達的影響（Control 正常對照組, Model 模型組, Curcumin 姜黃素組）02 細胞油紅 O 染色生長期的 L-02 細胞，在 10%醫(yī)用脂肪乳注射液和 10%胎牛血-1640 完全培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)，孵育細胞 24 h，48 h，油紅鏡下觀察。正常肝細胞胞核圓形，邊緣清晰，胞漿內(nèi)未見明顯肪乳誘導(dǎo)的脂肪變性肝細胞，細胞腫大，胞漿內(nèi)可見紅色脂滴ol/L 姜黃素處理脂肪變性肝細胞 24 h，48 h，胞漿內(nèi)可見紅色 3）
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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