【摘要】：原發(fā)性痛經(jīng)(Dysmenorrhea,PD)發(fā)病率高,臨床流行病學調查統(tǒng)計與不孕以及婦科腫瘤關系密切。針對臨床常見任脈寒凝血瘀證候,中醫(yī)溫經(jīng)活血治療有優(yōu)勢。溫經(jīng)湯為治療痛經(jīng)任脈寒凝血瘀證的經(jīng)典方劑,前期發(fā)現(xiàn)解偶聯(lián)蛋白4和relaxin2機能異常參與發(fā)病,本研究在此基礎上,通過離體和整體動物模型,選擇增強任脈局部產熱分子效應或/和任脈局部抗血小板聚集效應的單體分子作為機制陽性藥,選擇非任脈歸經(jīng)的溫里藥或/和活血藥,替代任脈歸經(jīng)的溫里藥或/和活血藥,反證寒凝血瘀證“寒凝任脈”的主導病機,確認溫經(jīng)湯“離體實驗抗子宮痙攣,在體藥效為產熱抗凝”的允許作用,尋找發(fā)育致病藥效的靶點信號途徑。實驗一吳茱萸堿舒張PLCβ-IP3/DAG子宮痙攣模型目的:觀察吳茱萸堿(Evo)對大鼠離體子宮平滑肌的舒張作用及其可能機制。方法:以PGF2α誘導大鼠離體子宮平滑肌收縮,生物機能實驗系統(tǒng)觀察Evo舒張離體子宮平滑肌的作用以及辣椒素受體阻斷劑capsazepine,磷脂酶Cβ阻斷劑U73122和鈣調蛋白阻斷劑W-7對吳茱萸堿作用的影響,Prism-5.01非線型可變斜率回歸計算半效濃度。結果:Evo對PGF2α(EC50=9.60×10-11 mol·L-1)收縮離體子宮平滑肌舒張作用的半效濃度 9.56×10-9mol·L-1。半抑制濃度的 capsazepine(6.30×10-11 mol·L-1),U73122(2.57×10-11 mol·L-1)和 W-7(5.65×10-13 mol·L-1)預舒張離體子宮平滑肌后,Evo EC50 降低,量效曲線左移。EC50從小到大為:W-7-Evo(8.88×10-15mol·L-1)capsazepine-Evo(7.35×10-13mo1·L-1)U73122-Evo(1.95×10-12 mol·L-1)。W-7增敏 Evo 舒張子宮約 106倍,capsazepine增敏約104倍,U73122增敏約103倍。結論:Evo可通過阻斷PLCβ-IP3/DAG通路上TRPV1,PLCβ和CaM舒張子宮平滑肌,根據(jù)其靶點效應比較推理,推測其結合位點為信號通路中CaM下游蛋白。實驗二溫經(jīng)湯溫化任脈治療原發(fā)性痛經(jīng)藥效目的:探討溫經(jīng)湯溫化任脈治療原發(fā)性痛經(jīng)的藥效。方法:大鼠序貫實施肩胛骨間棕色脂肪切除,d3-d76高脂飼料喂養(yǎng),d21-d76灌胃己烯雌酚以復制寒凝血瘀證原發(fā)性痛經(jīng)大鼠模型。以維A酸(ATRA)為溫任陽性藥,辣椒素(Cap)為任脈活血陽性藥,d41-d76每天灌胃吳茱萸堿(Evo)、溫經(jīng)湯(WJD)、山茱萸替代吳茱萸溫經(jīng)湯(SDW)、丹參替代川芎溫經(jīng)湯(DDW)。d69以PGF2α誘導宮腔壓力升高,d77稱量子宮重量計算臟器系數(shù),HE染色計算子宮肌層與內膜體積比;Masson染色計算子宮內膜、子宮及子宮頸膠原纖維構成比,取血分離血漿檢測丙酮酸(PA)、游離脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC);催乳素(PRL),促卵泡素(FSH),黃體生成素(LH),雌二醇(E2),孕酮(P)含量。以對照組,模型組,WJD組和Evo組為共用組,①溫化寒凝藥效分析增加ATRA組、SDW組;②活血止疼藥效分析加Cap組、DDW;③非任脈溫里和/或活血藥替代后藥效降低相對值用(ATRT/SDW)和/或(Cap/DDW)表示。數(shù)據(jù)進行效能轉換后,t檢驗比較組間差別,P0.05為有顯著性意義。結果:①溫化寒凝藥效:與ATRA比較:WJD組,SDW組,Evo組(P0.05)子宮系數(shù)降低;WJD 組,SDW 組,Evo 組(P0.05)FFA 升高;WJD 組(P0.05),SDW 組,Evo 組(P0.01)宮內壓降低降低;WJD組(P0.05),SDW組,Evo組子宮內膜構成比降低;WJD 組(P0.01),SDW 組,Evo 組(P0.01)血漿 LH 降低;WJD組(P0.05),SDW 組,Evo組血漿E2降低;WJD組(P0.05),SDW組(P0.05),Evo組血漿P升高。②活血止疼藥效:與Cap組比較:WJD組,DDW組,Evo組(P0.05)子宮系數(shù)降低;WJD組,DDW組,Evo組(P0.01)FFA降低;WJD組,DDW組,Evo組(P0.01)宮內壓降低降低;WJD組(P0.05),DDW組,Evo組子宮內膜構成比降低;WJD組(P0.01),DDW組,Evo組(P0.05)血漿 LH 降低;WJD 組(P0.05),DDW 組,Evo 組血漿 E2 降低;WJD 組,DDW組,Evo組血漿P升高。③溫化寒凝/活血止疼:ATRT/SDW相比于Cap/DDW:FFA(P0.01),宮腔壓力(P0.05),肌層膠原體積比(P0.05),宮頸膠原體積比(P0.01),血漿促卵泡素(P0.05),血漿催乳素(P0.05),血漿E2(P0.05)的ATRT/SDW高于Cap/DDW。結論:原發(fā)性痛經(jīng)寒凝血瘀證的主導病機為任脈之寒,兼顧病機為寒致任脈之瘀。溫經(jīng)湯通過調節(jié)脂質代謝,性激素軸水平(溫化寒凝),通過降低宮內壓,改善內膜增生(活血止疼)治療痛經(jīng)。實驗三溫經(jīng)湯溫化任脈治療原發(fā)性痛經(jīng)藥理目的:探討溫經(jīng)湯治療原發(fā)性痛經(jīng)寒凝血瘀證模型大鼠的作用機制。方法:動物造模,分組給藥同實驗二。d77取子宮,采用Elisa測血漿relaxin2含量,免疫組化、實時定量RT-PCR和Western blot法檢測子宮組織內UCP4,relaxin2的表達水平。數(shù)據(jù)分析同實驗二。結果:①溫化寒凝藥理:與ATRT比:WJD組UCP4原位表達升高,SDW組與Evo組UCP4原位表達降低;WJD組(P0.05)與Evo組(P0.05)UCP4基因表達升高,SDW組(P0.01)UCP4基因表達降低;WJD組UCP4蛋白表達升高,SDW(P0.05)組與Evo組UCP4蛋白表達降低;WJD組,SDW組,Evo組relaxin2血漿含量升高;WJD組relaxin2原位表達升高,SDW組(P0.01)與Evo組(P0.01)relaxin2原位表達降低;WJD 組,SDW 組,Evo 組 relaxin2 基因表達升高;WJD 組(P0.01)與 Evo 組 relaxin2蛋白表達升高,SDW組(P0.01)relaxin2蛋白表達降低。②活血止疼藥理:與Cap組比較:WJD組與Evo組UCP4原位表達升高,DDW組UCP4原位表達降低;WJD組(P0.05)與Evo組UCP4基因表達升高,DDW組UCP4基因表達降低;WJD組UCP4蛋白表達升高,DDW組與Evo組UCP4蛋白表達降低;WJD組,DDW組,Evo組relaxin2血漿含量升高;WJD組(P0.01)relaxin2原位表達升高,DDW組(P0.01)與Evo組(P0.01)relaxin2原位表達降低;WJD組,Evo組relaxin2基因表達升高,DDW組relaxin2基因表達降低;WJD組(P0.01)與Evo組relaxin2蛋白表達升高,DDW組relaxin2蛋白表達降低。③溫化寒凝/活血止疼:ATRT/SDW相比于Cap/DDW:UCP4原位表達(P0.05),基因表達(P0.05),蛋白表達(P0.05),relaxin2血漿含量(P0.05),基因表達(P0.05),蛋白表達(P0.05)ATRT/SDW 高于 Cap/DDW。結論:原發(fā)性痛經(jīng)寒凝血瘀證的主導病機為任脈之寒,兼顧病機為寒致任脈之瘀。溫經(jīng)湯通過提高UCP4代償產熱(溫化寒凝),通過提高松弛素水平加快局部血流(活血止疼)防治痛經(jīng)。
【圖文】：

邐Ｌｏｇ［ＰＧＦ２ｌ，（ｍｏｌ－Ｌ邋＇）｜邐！逡逑圖１－１邋ＰＧＦ２ａ誘導的離體大鼠子宮收縮（１邋ｇ邋ｌＯｍｉｎ）逡逑表１－１邋ＰＧＦ２ａ誘導的離體子宮平滑肌張力（［±ｓ，ｎ，＝８）逡逑Ｌｏｇ［ｍｏｌＬ－１］邐ＡＡＵＣ邋ｐｏｔｅｎｃｙ逡逑－１２．１８邐２５．４０±８．２８邐０．００逡逑－１１．６８邐４８．３３±邋１６．９３邐０．０３逡逑？１１．１８邐６１．４９±２２．１４邐０．０６逡逑－１０．６８邐１４１．４７±４０．９１邐０．２０逡逑－１０．１８邐２６７．１６±７０．１０邐０．４３逡逑－９．６８邐４０３．０７土９９．１３邐０．６７逡逑－９．１８邐４８５．９Ｕ１０６．８９邐０．８２逡逑－８．６８邐５４１．６７±１２０．７８邐０．９２逡逑－８．１８邐５８６．４４士邋１３４．６５邋１．００逡逑ｌ．Ｏ－ｉ邋ＥＤ５0＝９．６０＊１０＊ｎ；Ｒ２＝０．９９８７邐？逡逑ａ９５［７．６３ｘ邋ｌ0－ｎ－１．２１ｘ邋ｌ0－１０］逡逑＾邋0邋８＿邋Ｙ＝－０．０１９８＋１．０３０８／［１邋＋邋１０（－８－＾＊８２７６ｎ）］逡逑馨。．６－邐／逡逑Ｉ０＇４＇邐／逡逑０．２－邋／逡逑ｏ．ｏ－ｌ邐ｒ＾—＼邐１邐１邐１邐１逡逑－１３邐－１２邐－１１邐－１０邐－９邐－８邐－７逡逑ＰＧＦ２ｉｌ［Ｌｏｇ（ｍ0Ｉ－邋Ｌ－＇）］逡逑圖１－２邋ＰＧＦ２ａ誘導大鼠離體子宮平滑肌張力變化逡逑２．２阻斷劑Ｗ－７ＪＪ７３１２２和ｃａｐｓａｚｅｐｉｎｅ對離體子宮平滑肌的舒張作用（表１－２；圖逡逑１－３）逡逑ＣａＭ阻斷劑Ｗ－７

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【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2604064