【摘要】：通過HPLC檢測(cè),FSN002內(nèi)生真菌發(fā)酵液中主要含有3種待分離物質(zhì),這三種物質(zhì)分別是楸靈素(化合物1,RT 21 min,最大吸收波長282 nm),酸降解產(chǎn)物(化合物2,RT 24 min,最大吸收波長306 nm)和黃色降解產(chǎn)物(化合物3,RT 28 min,最大吸收波長362 nm)。研究發(fā)現(xiàn)楸靈素對(duì)肝癌、腦癌等具有一定的抵抗效果,且不會(huì)損傷正常細(xì)胞。為優(yōu)化楸靈素的HPLC檢測(cè)條件,用Na Cl對(duì)發(fā)酵液樣品進(jìn)行了預(yù)處理,使得楸靈素保留時(shí)間提前,峰寬變窄,峰形更加對(duì)稱。為分離純化與鑒定這3種物質(zhì),本課題采用了樹脂吸附,萃取分離,HPLC,LC-MS,NMR等研究手段,獲得以下研究結(jié)果:(1)大孔樹脂ADS-7較適合分離楸靈素。通過鹽水-水-甲醇-飽和鹽甲醇4步洗脫,將楸靈素濃縮純化到鹽甲醇溶液中供進(jìn)一步分離,同時(shí)親水性色素被除去。另外,采用聚酰胺、薄層層析和高效液相ODS制備柱制備相結(jié)合的方法對(duì)甲醇部分進(jìn)行分離制備,獲得色譜純度為91.54%的化合物3,通過核磁和LC-MS-MS數(shù)據(jù)分析,該物質(zhì)摩爾質(zhì)量496.21 g/mol,分子式C28H32O8,英文名稱為Trichodimerol,屬聚酮類化合物,其空間結(jié)構(gòu)對(duì)稱,與黃酮有許多性質(zhì)相似,可從紅樹林木霉菌和海洋微生物中獲得該物質(zhì),其具有抗菌、抗流感等作用。(2)通過向發(fā)酵液樣品中加入酸堿,調(diào)節(jié)電離平衡,改變其極性和油水兩相分配系數(shù),可以實(shí)現(xiàn)楸靈素的萃取分離與濃縮。通過考察溶劑種類、萃取溶劑與物料的體積比以及萃取體系的pH值,以HPLC為檢測(cè)手段,建立分離純化楸靈素的方法工藝。楸靈素在4中有機(jī)溶劑中的油水分配系數(shù)大小依次是:乙酸乙酯氯仿二氯甲烷甲苯;酸萃取時(shí)萃取劑體積過小,楸靈素存在降解,萃取過程中,隨著pH增大,楸靈素在油水兩相中分配比值減小,在pH 4.5發(fā)酵液-乙酸乙酯1:1和pH 9氫氧化鈉-乙酸乙酯1:3條件下進(jìn)行萃取反萃取,楸靈素的萃取收率達(dá)78.28%,對(duì)應(yīng)楸靈素色譜純度97.7%,這種萃取工藝對(duì)楸靈素的分離純化效果明顯。
【圖文】：

離心后對(duì)上層和下層分別取樣，加入等體測(cè)，進(jìn)樣體積 10 μL，每組設(shè)置 3 個(gè)重復(fù)。和與流動(dòng)相加鹽對(duì)楸靈素檢測(cè)的影響收集的發(fā)酵液，每組 1 mL，一組直接與甲醇 1:1 飽和處理 30 min 后，，再與甲醇 1:1 混合，這兩組樣檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，進(jìn)樣體積 10 μL；將 2.2.2 檢測(cè)/100 mL 的 NaCl 水溶液，對(duì)與甲醇 1:1 混合離心后10 μL。PLC 檢測(cè)楸靈素的影響

圖 2-3 NaCl 飽和處理時(shí)間對(duì)楸靈素 RT 的影響he impact of saturation processing time by NaCl on the RT o圖 2-4 NaCl 飽和處理時(shí)間對(duì)楸靈素檢 的影響 impact of saturation processing time by NaCl on the detectin
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R284.2

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本文編號(hào)：2603551