【摘要】：糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常見的微血管并發(fā)癥,是成年人最主要的致盲疾病之一。中醫(yī)藥在改善視力,延緩DR的發(fā)生、發(fā)展,促使發(fā)生病理變化的眼底改善以及改善患者全身整體狀況,提高患者生活質(zhì)量方面有其獨特的優(yōu)勢,顯示出治療DR的廣闊前景。本課題組前期大量臨床及藥理研究表明,由地黃、丹參、葛根、人參組成的補腎活血方具有顯著防治DR作用。課題組前期對該方防治DR藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機制開展了部分研究,但對其體內(nèi)外化學(xué)成分的系統(tǒng)描述及作用機制的深入研究尚顯不足。為此,本文基于UPLC-Q-Exactive四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對補腎活血方體內(nèi)外化學(xué)成分進行系統(tǒng)分析,從大鼠組織細胞水平及代謝組學(xué)角度對其作用機制開展了初步研究:1.補腎活血方體內(nèi)外化學(xué)成分分析1)對補腎活血方體外化學(xué)成分進行研究,建立化學(xué)組分庫。利用UPLC-Q-Exactive高分辨質(zhì)譜儀聯(lián)用技術(shù),采用正、負離子監(jiān)測模式、全掃描及自動觸發(fā)二級質(zhì)譜掃描功能,對補腎活血方化學(xué)成分進行快速識別及鑒定。通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)、對照品比對,共鑒定出86個(其中正離子模式下10個)化合物,主要化學(xué)成分包括異黃酮類、酚酸類、人參皂苷類及少量的環(huán)烯醚萜類化合物。2)對補腎活血方入血移行成分進行初步研究。通過前期建立的UPLC-Q-Exactive分析方法及主要化學(xué)成分鑒定結(jié)果,對比補腎活血方、空白血清及給藥血清圖譜,對各個峰進行鑒別分析,確定28個(其中正離子模式下2個)化合物為補腎活血方入血原型成分。2.補腎活血方治療DR作用機制初步研究1)從大鼠組織細胞水平開展其作用機制研究:采用高脂飼料誘導(dǎo)聯(lián)合注射低劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制備大鼠糖尿病視網(wǎng)膜病變模型,運用免疫組化染色結(jié)合圖像分析測定大鼠視網(wǎng)膜中血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor,HIF-1α)蛋白的表達。結(jié)果顯示,與空白組相比,模型組大鼠視網(wǎng)膜中積累了大量的VEGF、HIF-1α蛋白,其光密度急劇增加,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。與模型組相比,給藥組大鼠視網(wǎng)膜中兩者的積累量顯著減少(P0.05),表明補腎活血方對DR具有一定的治療作用,通過直接抑制VEGF高表達或/和通過抑制HIF-1α的高表達而抑制VEGF mRNA轉(zhuǎn)錄,進而降低VEGF蛋白的高表達可能是其治療DR的重要作用機制之一。2)基于代謝組學(xué)開展其作用機制研究:收集造模和補腎活血方治療過程中大鼠尿液,運用UPLC-Q-Exactive分析方法,建立大鼠尿液代謝指紋圖譜,結(jié)合多種分析方法,對尿液中所有代謝產(chǎn)物進行研究,找到與DR模型有關(guān)的9個潛在生物標(biāo)志物,分別為苯乙酰甘氨酸、3-甲基二氧吲哚、馬尿酸、硫酸對甲酚、對甲酚硫酸葡萄糖苷酸、苯乳酸、膽酸、5-L-谷氨酰-�；撬峒耙粋�未知成分。經(jīng)補腎活血方治療后,除苯乳酸和未知成分含量水平未被改善,其余成分含量水平均有所回調(diào)。對其進行深入研究發(fā)現(xiàn),補腎活血方通過改善潛在生物標(biāo)志物參與的腸道菌群代謝、脂質(zhì)代謝、色氨酸代謝等通路紊亂可能是治療DR的重要作用機制之一。上述研究結(jié)果為補腎活血方體內(nèi)過程分析和藥效物質(zhì)研究奠定了基礎(chǔ),為深入探討補腎活血方防治DR的作用機制提供實驗依據(jù),亦為中藥復(fù)方的系統(tǒng)研究提供了新的思路。
【圖文】：

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文（one-way ANOVA），數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）表示。3.3 結(jié)果與結(jié)論3.3.1 大鼠一般狀態(tài)觀察空白組大鼠飲食正常，精神狀態(tài)良好，大便干結(jié)，尿量較少，體重隨月齡大逐漸增加。模型組，飲水量顯著增加，模型建立期間體重增長緩慢，精神萎靡毛色黯淡、微微發(fā)黃，毛質(zhì)粗糙，易脫落。隨著病情加重，體重逐漸降低，并現(xiàn)斷尾，給予 STZ14 周后，出現(xiàn)肉眼可見的晶狀體渾濁。見圖 3.1。

成都中醫(yī)藥大學(xué) 2018 屆碩士學(xué)位論文（one-way ANOVA），數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）表示。3.3 結(jié)果與結(jié)論3.3.1 大鼠一般狀態(tài)觀察空白組大鼠飲食正常，精神狀態(tài)良好，大便干結(jié)，，尿量較少，體重隨月齡大逐漸增加。模型組，飲水量顯著增加，模型建立期間體重增長緩慢，精神萎靡毛色黯淡、微微發(fā)黃，毛質(zhì)粗糙，易脫落。隨著病情加重，體重逐漸降低，并現(xiàn)斷尾，給予 STZ14 周后，出現(xiàn)肉眼可見的晶狀體渾濁。見圖 3.1。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

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本文編號：2602058