【摘要】：當(dāng)歸(Angelica sinensis),一種多年生草本植物,在中國分布廣泛,是中國傳統(tǒng)的名貴中藥材,國內(nèi)外研究已表明當(dāng)歸具有活血補(bǔ)血、抗氧化、抗炎、抗腫瘤等生物活性,其臨床應(yīng)用價值極高。植物中的內(nèi)生真菌分布廣、種類多,許多藥用植物內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物具有很高的生物活性,胞外多糖是由微生物細(xì)胞產(chǎn)生并分泌到培養(yǎng)基中的一種多糖,研究當(dāng)歸內(nèi)生真菌胞外多糖的基本特性將對當(dāng)歸在醫(yī)藥業(yè)的應(yīng)用提供一定的依據(jù)。本文從當(dāng)歸中分離得到內(nèi)生真菌,采用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化了當(dāng)歸內(nèi)生真菌產(chǎn)胞外多糖的培養(yǎng)基組分,用響應(yīng)面法優(yōu)化了當(dāng)歸內(nèi)生真菌產(chǎn)胞外多糖的發(fā)酵條件,對當(dāng)歸內(nèi)生真菌產(chǎn)胞外多糖進(jìn)行了分離純化,并研究了其抗氧化活性。主要研究結(jié)果如下:1.從當(dāng)歸的根中分離得到了內(nèi)生真菌F1,從菌落形態(tài)、顯微特征和系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)構(gòu)等方面分析,最終鑒定其為鏈格孢屬內(nèi)生真菌(Alternaria.tenuissima)。2.采用單因素試驗(yàn)結(jié)合正交試驗(yàn)的方法,以胞外多糖產(chǎn)量為指標(biāo),優(yōu)化了當(dāng)歸鏈格孢屬F1內(nèi)生真菌產(chǎn)胞外多糖的培養(yǎng)基組分。結(jié)果顯示,各因素對當(dāng)歸鏈格孢屬F1內(nèi)生真菌產(chǎn)胞外多糖含量的影響程度依次為:甘露糖酵母提取物鎂離子VC。優(yōu)化得到了當(dāng)歸內(nèi)生真菌超胞外多糖的最佳培養(yǎng)基配方:甘露糖8%、酵母提取物2%、鎂離子0.04%、VC 0.005%。在優(yōu)化的培養(yǎng)基配方下,胞外多糖平均含量為2.5657mg/mL,接近于預(yù)測值,表明優(yōu)化得到的最佳培養(yǎng)基配方有效可行。3.采用單因素試驗(yàn)結(jié)合響應(yīng)面試驗(yàn)的方法,以胞外多糖產(chǎn)量為響應(yīng)值,優(yōu)化了當(dāng)歸內(nèi)生真菌鏈格孢屬F1產(chǎn)胞外多糖的發(fā)酵條件。結(jié)果表明,各因素對當(dāng)歸內(nèi)生真菌鏈格孢屬F1產(chǎn)胞外多糖含量的影響程度依次為:發(fā)酵溫度pH接種量發(fā)酵時間。優(yōu)化得到的當(dāng)歸內(nèi)生真菌產(chǎn)胞外多糖的最佳發(fā)酵條件為:發(fā)酵溫度30℃,發(fā)酵時間5天,初始pH=7,接種量3%。在此優(yōu)化條件下,胞外多糖產(chǎn)量為3.32mg/mL,該值與預(yù)測值接近,表明該優(yōu)化發(fā)酵工藝合理、可行。4.對當(dāng)歸內(nèi)生真菌鏈格孢屬F1產(chǎn)胞外多糖進(jìn)行了分離純化,并測定了其胞外多糖的基本特性。用DEAE-52纖維素柱層析和Sephadex G-100凝膠柱層析法對胞外多糖進(jìn)行純化,純化后的胞外多糖為非還原糖,呈黃色粉末,室溫下能溶于水,不溶于乙醇,不含淀粉。用高效液相色譜聯(lián)用多角度激光散射(HPSEC-MALLS)測得胞外多糖的重均分子量(Mw)和數(shù)均分子量(Mn)分別為為3.246×104 g/mol和2.012×104 g/mol。使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)測得純化后的胞外多糖主要由5種不同的單糖組成,分別為D-半乳糖醛酸、鼠李糖、D-甘露糖、葡萄糖和D-半乳糖。紅外光譜(FT-IR)掃描結(jié)果顯示該胞外多糖是一種具有吡喃糖分析結(jié)構(gòu)的糖蛋白。掃描電鏡(SEM)結(jié)果顯示,該胞外多糖表面粗糙,呈現(xiàn)多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。熱重分析和差式掃描量熱分析(TGA/DSC)結(jié)果顯示,該胞外多糖熱穩(wěn)定性好,AH=51.92 J/g。5.抗氧化活性測定結(jié)果顯示,當(dāng)歸內(nèi)生真菌鏈格孢屬F1產(chǎn)胞外多糖具有很強(qiáng)的羥自由基清除活性、超氧陰離子清除活性和還原力,抗氧化活性較強(qiáng)。
【圖文】：

２．３．２當(dāng)歸內(nèi)生真菌的分子生物學(xué)鑒定結(jié)果逡逑從當(dāng)歸的根中分離得到了標(biāo)記為Ｆ１的內(nèi)生真菌，通過觀察菌落、菌絲和分逡逑生孢子基本特征可以識別其形態(tài)類型。內(nèi)生真菌Ｆ１的菌落特征見圖２－１Ａ。菌株逡逑Ｆ１的早期菌落呈白色、粘稠狀，然后其菌落逐漸聚集到中心，顏色變深，呈橄欖逡逑綠、近圓形、褶皺狀，邊緣整齊。內(nèi)生真菌Ｆ１的微觀顯微特征描述見２－１Ｂ。菌逡逑株Ｆ１具有酵母樣細(xì)胞和菌絲形態(tài)，分生孢子大量產(chǎn)生，且頂端有很短的次生分逡逑生孢子團(tuán)。結(jié)合以上結(jié)論，Ｆ１菌株的所有表形即微觀特征都與鏈格孢屬（．逡逑的十分相似，故初步鑒定其為鏈格孢屬內(nèi)生真菌。逡逑分子生物學(xué)鑒定結(jié)果見圖１Ｃ。通過基于測序結(jié)果將Ｆ１的ＩＴＳ序列在ＮＣＢＩ數(shù)逡逑據(jù)庫中進(jìn)行ＢＬＡＳＴ比對后，收集同源性比較高的比對序列，通過鄰接法構(gòu)建系逡逑統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)果表明Ｆ１與鏈格孢屬（Ａ／ｔｅｒｗａｒｆａ．邐的親緣關(guān)系最近（同逡逑１０逡逑

碳源邐破源濃度逡逑圖３．２碳源對胞外多糖產(chǎn)量的影響（Ａ，碳源；Ｂ；甘露糖濃度）逡逑Ｐｉｇ．邋３．２邋Ｔｈｅ邋ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃａｒｂｏｎ邋ｓｏｕｒｃｅｓ邋ｏｎ邋ＥＰＳ邋ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ逡逑菌株生長過程中，碳源是為菌株提高碳素來源的物質(zhì)，同時，碳也是構(gòu)成細(xì)逡逑胞成分的主要物質(zhì)［５６］。一般來說，，糖類是菌株生長良好的碳源和能源物質(zhì)，但不逡逑＇同菌株對不同糖類物質(zhì)的的吸收利用也是千差萬別。逡逑不同碳源對胞外多糖產(chǎn)量的影響見圖３．２Ａ�？梢钥闯觯桑蓺w鏈格孢屬Ｆ１內(nèi)逡逑生真菌可利用多種碳源發(fā)酵產(chǎn)生胞外多糖，各糖類物質(zhì)作為為碳源時，按多糖含逡逑量從氋到低的排列順序?yàn)椋焊事短�、木糖、葡萄糖和半乳糖。結(jié)果表明，甘露糖逡逑作為碳源時，有利于當(dāng)歸鏈格孢屬Ｆ１內(nèi)生真菌的利用和多糖積累。故確定最佳逡逑碳源為甘露糖。逡逑１６逡逑
【學(xué)位授予單位】：蘭州理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：TQ920.6;R284

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王洪凱,張?zhí)煊?張猛;鏈格孢屬真菌分類研究進(jìn)展[J];山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2001年03期

2 陳偉群,林祥發(fā),張?zhí)煊?假格鏈格孢屬一新種[J];菌物系統(tǒng);1997年02期

3 李多川;張?zhí)煊?沈瑞清;;陜西省鏈格孢屬的種[J];陜西農(nóng)業(yè)科學(xué);1992年04期

4 張?zhí)煊?中國菊科植物上鏈格孢屬真菌的種[J];云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2002年04期

5 黃偉;馮作山;白羽嘉;張培嶺;鄭峰;;采后果實(shí)鏈格孢屬真菌病害防治方法研究進(jìn)展[J];食品與機(jī)械;2016年03期

6 常雪艷;馮致;;小口棗黑斑病病原分離鑒定——鏈格孢屬的初步研究[J];甘肅農(nóng)業(yè);2016年19期

7 唐嵐;江厚利;王義勛;陳京元;鄭京津;;鏈格孢屬真菌分類研究進(jìn)展[J];湖北林業(yè)科技;2013年04期

8 嚴(yán)清平;袁善奎;王曉軍;姜輝;;5種鏈格孢屬植物病原真菌對10種殺菌劑的敏感性比較[J];植物保護(hù);2008年02期

9 劉迪;于丹;吳軍凱;關(guān)貴彬;都曉偉;;藥用植物鏈格孢屬真菌病害及其防治的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐;2018年01期

10 沈瑞清;商鴻生;查仙芳;南寧麗;王寬倉;;鏈格孢屬一新種[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年03期

相關(guān)會議論文 前9條

1 張?zhí)煊?;生于小麥葉斑上的鏈格孢屬真菌[A];中國植物病理學(xué)會第七屆代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2002年

2 褚建君;;上海市水葫蘆的生物防治[A];生物入侵與生態(tài)安全——“第一屆全國生物入侵學(xué)術(shù)研討會”論文摘要集[C];2007年

3 肖健;張強(qiáng);高錦明;;一株苦楝內(nèi)生鏈格孢屬真菌的化學(xué)成分[A];中國化學(xué)會第9屆天然有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

4 盧志軍;徐帥;胡學(xué)軍;蔡樂;席昕;吳學(xué)宏;;北京地區(qū)16個生菜品種種傳真菌的初步研究[A];植物病理學(xué)研究進(jìn)展——中國植物病理學(xué)會第十二屆青年學(xué)術(shù)研討會論文選編[C];2015年

5 盧志軍;徐帥;蔡樂;胡學(xué)軍;席昕;吳學(xué)宏;;北京地區(qū)10個快菜品種種傳真菌的初步研究[A];植物病理學(xué)研究進(jìn)展——中國植物病理學(xué)會第十二屆青年學(xué)術(shù)研討會論文選編[C];2015年

6 楊萌萌;武佳寧;洪霓;王國平;;鏈格孢菌株HBL-14中攜帶真菌病毒的研究[A];中國植物病理學(xué)會2018年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2018年

7 陳敏;陳美蘭;楊立;林淑芳;黃璐琦;;ITS序列分析法檢測種子健康度的初步探討[A];第二屆全國種子科學(xué)與技術(shù)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2011年

8 鄭麗屏;張雨青;;桑樹內(nèi)生真菌抗病原真菌活性的研究[A];生態(tài)文明建設(shè)中的植物學(xué)：現(xiàn)在與未來——中國植物學(xué)會第十五屆會員代表大會暨八十周年學(xué)術(shù)年會論文集——第4分會場：資源植物學(xué)[C];2013年

9 方銀;任子旭;陳成;金超;賈俊強(qiáng);桂仲爭;;桑椹主要致腐菌的篩選與鑒定[A];中國蠶學(xué)會第八屆青年學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2014年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 柯繼;為食品安全提供有效技術(shù)支撐[N];中國食品安全報;2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 孫霞;鏈格孢屬真菌現(xiàn)代分類方法研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李亮（lormoua KIATOUKOSIN）;內(nèi)生真菌鏈格孢屬F1產(chǎn)胞外多糖培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件的優(yōu)化及多糖特性的研究[D];蘭州理工大學(xué);2019年

2 郭潤婷;主要蔬菜鏈格孢病原菌的鑒定與新病害研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2018年

3 姚亮亮;黑龍江省鏈格孢屬病原菌遺傳多樣性及殺菌劑抗藥性分析[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

4 謝紅艷;我國部分區(qū)域鏈格孢屬（Alternaria Nees）真菌的資源調(diào)查與形態(tài)和分子鑒定研究[D];貴州大學(xué);2006年

5 梁艷;內(nèi)蒙古中西部針葉樹內(nèi)生真菌的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 王葉;棗果實(shí)病原真菌的鑒定及鏈格孢屬病原真菌多樣性研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 王洪濤;內(nèi)蒙古中西部柳樹內(nèi)生真菌的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

8 白紅霞;內(nèi)蒙古中西部楊樹內(nèi)生真菌的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

9 李明雙;羊草內(nèi)生真菌多樣性研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 李朋華;部分鏈格孢屬真菌的形態(tài)學(xué)及多基因鑒定[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

本文編號：2601351