本文關(guān)鍵詞：高氣壓對海馬神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的影響及其機(jī)制

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【摘要】： 氧在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起著重要作用，直接與體內(nèi)物質(zhì)、氣體能量代謝密切相關(guān)，氧供過多、氧分壓過高會(huì)對神經(jīng)元產(chǎn)生毒性作用。在過高的氧壓下,高壓氧作為一種神經(jīng)毒性因子發(fā)揮作用，可導(dǎo)致驚厥。目前國內(nèi)外的研究主要集中于高壓氧對神經(jīng)元損害作用的調(diào)控及其機(jī)理，但有關(guān)高壓氧對膠質(zhì)細(xì)胞作用的研究甚少，為了進(jìn)一步深入研究高壓氧對海馬神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的影響及其機(jī)制，減少其毒性作用，以及探討單純高氣壓暴露對神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的影響，開展了此項(xiàng)研究。 本研究應(yīng)用新生Sprague-Dawley大鼠(24h)進(jìn)行海馬神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞的原代培養(yǎng)。通過采用新型鈣離子熒光指示劑Fluo-3/AM、激光掃描共聚焦顯微鏡以及計(jì)算機(jī)圖像自動(dòng)分析系統(tǒng)，定量檢測海馬神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞在不同壓力高氣壓、高壓氧暴露時(shí)[Ca2+]i的變化；采用神經(jīng)元特異性烯醇化酶免疫組織化學(xué)染色，對所培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元進(jìn)行純度鑒定，并通過MTT法測定細(xì)胞的存活率；利用硝酸還原酶法測定NO含量的變化; 采用RT-PCR法測定海馬組織在不同壓力高氣壓、高壓氧暴露后不同時(shí)期nNOS、iNOS mRNA的表達(dá)，并根據(jù)3H-精氨酸轉(zhuǎn)化生成3H-瓜氨酸的原理，測定cNOS和iNOS的活性。獲得了以下主要結(jié)果： 1. 單純高氣壓作用而氧分壓與常壓條件下一致時(shí)，在壓力低于0.5MPa時(shí)，對海馬神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞[Ca2+]i、NO的含量未見明顯影響，也未見對海馬nNOS、iNOS的表達(dá)及cNOS、iNOS活性的影響。說明高氣壓本身這一物理過程對海馬正常生理功能在0.5MPa以內(nèi)時(shí)，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的作用。 2. 0.3MPaHBO暴露30min后，，大鼠海馬神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞存活率、[Ca2+]i、NO的含量以及海馬nNOS、iNOS mRNA的表達(dá)、cNOS、iNOS的活性均未見明顯變化；暴露60min后，大鼠海馬神經(jīng)元存活率下降，[Ca2+]i、NO的含量升高；暴露后4h，大鼠海馬cNOS的活性升高，而iNOS活性未見明顯變化。 0.5MPaHBO暴露后，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)(除暴露30min后，iNOS表達(dá)未見明顯變化)，海馬神經(jīng)細(xì)胞各項(xiàng)指標(biāo)均有變化，并與暴露時(shí)間相關(guān)，暴露時(shí)間越久，毒性作用也越強(qiáng)；膠質(zhì)細(xì)胞也發(fā)生變化，存活率下降，[Ca2+]i、NO的含量升高，海馬 WP=7 3. nNOS、iNOS的表達(dá)及cNOS、iNOS活性明顯增強(qiáng)。 4. NOS抑制劑L-NNA可對抗HBO使NO生成過多而引起的神經(jīng)毒性作用，保護(hù)細(xì)胞，提高細(xì)胞存活率。 5. Fluo-3作為第三代熒光探針，具有更多的優(yōu)越性，不影響細(xì)胞活性，可使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更精確可靠。 6. 通過對高氣壓(0.5MPa)和HBO(0.5MPa)環(huán)境條件對大鼠海馬神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞影響的研究，為神經(jīng)細(xì)胞功能在特殊高氣壓、高氧壓異常環(huán)境下的變化提供了新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為深入開展該領(lǐng)域的研究打下一定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：高壓氧 高氣壓 細(xì)胞培養(yǎng) 一氧化氮 一氧化氮合酶 激光掃描共聚焦顯微鏡
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R85
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-12
• 第一部分 高氣壓和高壓氧暴露對大鼠海馬神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞[Ca2+]i的影響12-41
• 實(shí)驗(yàn)一高氣壓和高壓氧暴露對大鼠海馬神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞存活率的影響12-27
• 材料12-14
• 方法14-17
• 結(jié)果17-22
• 討論22-24
• 小結(jié)24-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 實(shí)驗(yàn)二高氣壓和高壓氧暴露對大鼠海馬神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞[Ca2+]i及NO含量的影響27-41
• 材料27-29
• 方法29-30
• 結(jié)果30-36
• 討論36-38
• 小結(jié)38-39
• 參考文獻(xiàn)39-41
• 第二部分 高氣壓及高壓氧暴露對大鼠海馬NOS基因表達(dá)及活性變化的影響41-66
• 實(shí)驗(yàn)一高氣壓及高壓氧暴露對大鼠海馬nNOS和iNOS基因表達(dá)的影響41-57
• 材料41-42
• 方法42-45
• 結(jié)果45-52
• 討論52-54
• 小結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-57
• 實(shí)驗(yàn)二高氣壓及高壓氧對大鼠海馬cNOS及iNOS活性的影響57-66
• 材料57-58
• 方法58-60
• 結(jié)果60-62
• 討論62-64
• 小結(jié)64-65
• 參考文獻(xiàn)65-66
• 結(jié)論66-67
• 致謝67-68
• 綜述一氧化氮與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病及其神經(jīng)毒性作用機(jī)制68-85

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本文編號(hào)：558129