本文關(guān)鍵詞：NOX2調(diào)控的Complexin Ⅱ在缺血性中風(fēng)后谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性中的作用及機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的：谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最高的興奮性氨基酸,盡管缺血性腦損傷的病理生理機(jī)制至今尚未完全明確,有足夠的證據(jù)證明谷氨酸介導(dǎo)的興奮性神經(jīng)毒性參與了這一損傷過(guò)程。作為一種神經(jīng)遞質(zhì),生理情況下谷氨酸通過(guò)SNARE復(fù)合體介導(dǎo)的方式由突觸前膜釋放至突觸間隙,SNAREs (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor-attachment protein receptor,可溶性N-己基順丁烯二酰亞胺敏感因子結(jié)合蛋白)是由突觸囊泡膜蛋白(vesicle-associated membrane protein, VAMP)、突觸膜蛋白(soluble N-ethylmaleimide sensitive factor attachment protein-25, SNAP25)口突觸融合蛋白-1(Syntaxin-1)組成的多元復(fù)合體。現(xiàn)已明確,突觸以鈣依賴性胞裂外排方式釋放神經(jīng)遞質(zhì)依賴于SNARE復(fù)合體的裝配過(guò)程,而這種裝配過(guò)程又受其結(jié)合蛋白的影響,其中Complexinsl的作用非常重要。但在Complexins調(diào)控下SNARE復(fù)合體介導(dǎo)的神經(jīng)遞質(zhì)釋放過(guò)程是否在缺血性腦損傷中發(fā)揮作用,目前國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見報(bào)道。由于目前尚未發(fā)現(xiàn)針對(duì)Complexins的特異性阻斷劑,我們通過(guò)研究Complexins及其介導(dǎo)的興奮性神經(jīng)毒性機(jī)制與引起腦缺血再灌注損傷的其他病理生理機(jī)制之間的關(guān)系來(lái)尋找干預(yù)Complexins通路的有效治療措施。眾所周知,自由基介導(dǎo)的氧化應(yīng)激途徑也是腦缺血再灌注損傷的重要病理生理機(jī)制,另有證據(jù)表明,在創(chuàng)傷性腦損傷模型中,抗氧化劑會(huì)逆轉(zhuǎn)Complexins的表達(dá)變化,據(jù)此我們推測(cè)在腦缺血再灌注損傷中,Comlexins-SNARE復(fù)合體介導(dǎo)的興奮性氨基酸谷氨酸釋放的機(jī)制有可能受氧化應(yīng)激機(jī)制調(diào)控。方法：采用大腦中動(dòng)脈阻塞法建立局灶性腦缺血及再灌注損傷模型,并通過(guò)細(xì)胞糖氧剝奪法建立腦皮層神經(jīng)細(xì)胞缺血及再灌注損傷模型,體內(nèi)外分別應(yīng)用基因敲低和RNA干擾等方法來(lái)研究SNARE復(fù)合體調(diào)控蛋白Complexins在缺血性腦損傷中的作用。通過(guò)行為學(xué)、形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)、高效液相熒光、免疫組織化學(xué)等方法,觀察腦缺血及再灌注損傷后Complexins的表達(dá)變化,并明確其對(duì)腦缺血再灌注損傷后SNARE復(fù)合體及谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性的影響。為了尋求對(duì)Complexins在缺血性腦損傷后作用的有效干預(yù)途徑,我們通過(guò)使用NOX2基因敲除動(dòng)物以及體外RNA干擾等方法研究了缺血性腦損傷后Complexins介導(dǎo)的興奮性神經(jīng)毒性機(jī)制受NADPH氧化酶NOX2催化亞基介導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)控。結(jié)果：與假手術(shù)對(duì)照組相比,缺血腦組織皮層半暗帶中Complexin Ⅰ和Complexin Ⅱ的表達(dá)均顯著升高。由于Complexin Ⅱ主要定位于興奮性神經(jīng)突觸,對(duì)于興奮性氨基酸谷氨酸的釋放具有更為重要的作用,本研究繼而使用攜有靶向Complexin-Ⅱ shRNA的慢病毒進(jìn)行體內(nèi)外基因敲低,進(jìn)一步明確了Complexin Ⅱ在缺血性腦損傷及SNARE復(fù)合體的裝配和谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性中的作用。體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果也驗(yàn)證了這一過(guò)程。進(jìn)一步利用NOX2基因敲除動(dòng)物以及體外RNA干擾等方法,我們發(fā)現(xiàn)NOX2基因缺失可以明顯減輕腦缺血再灌注損傷,并可以逆轉(zhuǎn)谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性及Complexin Ⅱ的表達(dá)。結(jié)論：本課題首次揭示了Complexins在缺血性腦損傷后谷氨酸介導(dǎo)的興奮性神經(jīng)毒性機(jī)制中的作用和分子生物學(xué)機(jī)制,有望為充實(shí)、完善缺血性腦損傷的病理生理學(xué)機(jī)制提供新的內(nèi)容,并首次證明了該作用受NADPH氧化酶NOX2介導(dǎo)的氧化應(yīng)激通路所調(diào)控,從而為臨床防治缺血性腦血管病提供新的靶點(diǎn)和思路,具有重要的理論意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：Complexins SNARE復(fù)合體 谷氨酸 腦缺血再灌注損傷 NADPH氧化酶
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-13
• 前言13-17
• 實(shí)驗(yàn)材料17-24
• 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 二、實(shí)驗(yàn)藥品和試劑17-19
• 三、藥品及試劑的配制方法19-22
• 四、基本儀器設(shè)備22-24
• 實(shí)驗(yàn)方法24-36
• 一、腦缺血再灌注損傷模型的制備24-26
• 二、實(shí)驗(yàn)步驟和觀察指標(biāo)26-34
• 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理34-36
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36-39
• 討論39-43
• 結(jié)論43-44
• 附錄44-65
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 致謝68-69
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文69-70
• 學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表70

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1 劉康;NOX2調(diào)控的Complexin Ⅱ在缺血性中風(fēng)后谷氨酸興奮性神經(jīng)毒性中的作用及機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：458482