本文關鍵詞：殼聚糖對神經毒物二氯二丁基錫誘導PC12細胞損傷的保護作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:二氯二丁基錫(DBT)作為化工原料被廣泛應用于殺蟲劑和塑料穩(wěn)定劑,是一種神經高毒性化合物。殼聚糖(CS)是天然無毒的多聚糖,具有抗菌、抗真菌、抗癌、抗糖尿病、抗炎、抗氧化和神經保護等多種生物活性。本論文旨在通過體外實驗研究CS對DBT誘導大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤(PC12)細胞損傷的保護作用以及其潛在的作用機制。方法:本文首先采用MTT法、乳酸脫氫酶(LDH)釋放實驗及形態(tài)學觀察研究CS對DBT損傷后PC12細胞的保護作用。經AO/EB熒光染色法和Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞的凋亡,流式細胞術測定細胞內活性氧(ROS)水平及線粒體膜電位(MMP)。采用實時熒光定量PCR技術測定凋亡相關蛋白m RNA的表達量,并通過western blotting進一步檢測Bcl-2、Bax、caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表達水平。結果:CS預處理可以濃度依賴性增加DBT所引起的PC12細胞活力下降,減少DBT誘導LDH的釋放和形態(tài)學的改變。與DBT處理組相比,CS能夠明顯減少細胞的凋亡和胞內ROS的產生,部分恢復MMP。實時熒光定量PCR實驗表明,DBT導致Bcl-2和Bcl-xL的m RNA表達水平降低,同時增加Bad、Bax、cytochome-c、Apaf-1、caspase-9和caspase-3的m RNA水平,而采用CS預處理可以逆轉上述基因表達的改變。在蛋白水平上,CS可以明顯上調DBT所致Bcl-2/Bax比值的下降,同時降低DBT誘導的caspase-9和cleaved caspase-3的高表達。結論:CS預處理能夠保護DBT誘導的PC12細胞凋亡,且這種保護作用可能是通過ROS介導的線粒體凋亡途徑。
【關鍵詞】：殼聚糖 二氯二丁基錫 神經保護 PC12細胞 線粒體凋亡途徑
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 常用縮寫詞中英文對照表10-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-19
• 1.1 細胞來源13
• 1.2 主要試劑13
• 1.3 主要儀器13-14
• 1.4 母液的配置14
• 1.5 MTT法測定細胞活力14-15
• 1.6 LDH釋放實驗15
• 1.7 形態(tài)學觀察15
• 1.8 吖啶橙 (AO) /溴化乙錠 (EB) 熒光染色法15
• 1.9 Annexin V-FITC/PI雙染法15-16
• 1.10 ROS含量的測定16
• 1.11 線粒體膜電位檢測16
• 1.12 實時熒光定量PCR檢測16-17
• 1.13 蛋白印記 (Western blotting)17
• 1.14 統(tǒng)計分析17-19
• 2 結果19-29
• 2.1 CS對PC12細胞的毒性作用19
• 2.2 CS對DBT誘導PC12毒性的保護作用19-21
• 2.3 CS對DBT誘導細胞凋亡的保護作用21-22
• 2.4 CS能降低DBT誘導PC12細胞ROS的產生和MMP的去極化22-24
• 2.5 CS對DBT誘導凋亡相關基因表達變化的影響24-28
• 2.6 CS對DBT誘導凋亡相關蛋白表達變化的影響28-29
• 3 討論29-32
• 4 結論32-33
• 參考文獻33-39
• 綜述39-49
• 參考文獻43-49
• 致謝49-50
• 在學期間參與的科研課題與研究成果50-51
• 個人簡歷51

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本文編號：375065