本文關(guān)鍵詞：基于心臟組織的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析AEE治療大鼠血栓的調(diào)控機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：AEE是由阿司匹林和丁香酚兩種分子前體合成的一種新酯化物。研究表明AEE在抗血栓和抗炎方面比阿司匹林副作用小、毒性低,在治療和預(yù)防各種血栓性疾病中發(fā)揮著非常顯著的作用,但尚未對(duì)AEE抗血栓的作用機(jī)制及其靶基因進(jìn)行研究。本研究利用腹腔注射角叉菜膠建立wistar大鼠血栓模型,將實(shí)驗(yàn)大鼠分為6組,每組7只,包括10、15、20、25mg/kg和30mg/kg角叉菜膠劑量誘導(dǎo)血栓組,對(duì)照組注射2m L生理鹽水。在6、12、18h和24h測(cè)量血栓黑尾長(zhǎng)度,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析劑量和時(shí)間對(duì)血栓黑尾長(zhǎng)度和血栓黑尾比率的影響,通過(guò)病理學(xué)觀察和血細(xì)胞形態(tài)觀察確立貼近臨床研究和病理學(xué)研究的血栓模型;利用AEE、阿司匹林、丁香酚、羧甲基纖維素鈉、阿司匹林和丁香酚藥物對(duì)血栓模型大鼠口服給藥7天,解剖大鼠獲得心臟組織,提取組織總RNA進(jìn)行基因表達(dá)譜芯片分析,統(tǒng)計(jì)不同藥物對(duì)心臟組織的差異表達(dá)基因,并且做不同藥物與血栓模型組、正常組和藥物溶劑組對(duì)比的維恩圖分析。對(duì)基因表達(dá)譜芯片結(jié)果做聚類分析和信號(hào)通路分析,篩選在心臟組織中藥物共同參與的信號(hào)通路,同時(shí)確定該信號(hào)通路中重要的差異表達(dá)基因,并且結(jié)合qRT-PCR對(duì)不同藥物處理組、正常組和模型組的差異表達(dá)基因進(jìn)行分析和驗(yàn)證。研究獲得的主要結(jié)果如下:1.基于病理學(xué)和血細(xì)胞觀察進(jìn)行藥物誘導(dǎo)血栓模型建立的劑量和時(shí)間研究,發(fā)現(xiàn)在環(huán)境溫度18±2℃時(shí)用角叉菜膠腹腔注射誘導(dǎo)血栓形成,6 h時(shí)血栓誘導(dǎo)率達(dá)100%。統(tǒng)計(jì)分析表明,相同劑量下,時(shí)間對(duì)血栓黑尾長(zhǎng)度的影響不顯著(P0.05),而在相同時(shí)間情況下劑量對(duì)其影響顯著(P0.05);20 mg/kg角叉菜膠劑量較其它劑量在尾長(zhǎng)度和黑尾比率方面均顯著(P0.05),24 h時(shí)血栓黑尾比率為78.45%,該劑量下大鼠腸系膜無(wú)病變產(chǎn)生,腹腔內(nèi)無(wú)積水,同時(shí)血細(xì)胞發(fā)生明顯凝集并形成血栓。結(jié)果表明,20 mg/kg角叉菜膠腹腔注射可以建立安全的、貼近臨床研究的血栓模型,為血栓類疾病和新藥研究可提供合格的動(dòng)物病理模型。2.統(tǒng)計(jì)基因表達(dá)譜芯片各藥物處理組的差異基因數(shù)目和對(duì)差異基因做多重對(duì)比的維恩圖分析,發(fā)現(xiàn)中劑量AEE及阿司匹林和丁香酚聯(lián)合用藥組與模型組比較差異表達(dá)基因數(shù)目分別為7076和9988,同時(shí)與正常組比較差異表達(dá)基因數(shù)目分別為7593和8728,是所有藥物組中差異基因數(shù)目最多的;AEE差異表達(dá)基因數(shù)目高于阿司匹林和丁香酚。維恩圖對(duì)不同藥物處理組進(jìn)行對(duì)比分析發(fā)現(xiàn),中劑量AEE及阿司匹林和丁香酚聯(lián)合用藥組與模型組比較共同差異表達(dá)基因數(shù)目為4610,與正常組比較共同差異表達(dá)基因數(shù)目為4266,在所有藥物處理組中差異基因數(shù)目最多;所有AEE劑量組共同差異表達(dá)基因數(shù)目高于阿司匹林和丁香酚。3.對(duì)AEE與其它藥物處理組基因表達(dá)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行多重聚類和KEGG Pathway分析篩選信號(hào)通路和靶基因,并用qRT-PCR進(jìn)行驗(yàn)證分析。通過(guò)聚類分析發(fā)現(xiàn)AEE主要影響蛋白質(zhì)、脂類、炎癥介質(zhì)和離子反應(yīng)相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程、細(xì)胞組分和分子功能發(fā)揮抗血栓作用;KEGG Pathway分析發(fā)現(xiàn)AEE主要通過(guò)影響補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)信號(hào)通路發(fā)揮其抗血栓作用。對(duì)補(bǔ)體和凝血級(jí)聯(lián)信號(hào)通路分析篩選出5個(gè)靶基因,分別是Fga、Fgb、F2、Serpinc1和Plaur基因;qRT-PCR分析5個(gè)靶基因,發(fā)現(xiàn)AEE在抗血栓過(guò)程中Fga、Fgb、F2和Serpinc1基因下調(diào),Plaur基因上調(diào)與芯片結(jié)果基本一致。結(jié)果表明AEE不僅具有與前體藥物一樣的抗血小板作用,同時(shí)還特異性的發(fā)揮其溶栓作用。對(duì)血栓形成后引起的細(xì)胞癌變與腫瘤有治療作用,在抗血栓治療中達(dá)到標(biāo)本兼治的效果。
【關(guān)鍵詞】：血栓模型 AEE 基因表達(dá)譜芯片 差異表達(dá)基因 信號(hào)通路 qRT-PCR
【學(xué)位授予單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 摘要2-4
• Summary4-7
• 縮略語(yǔ)表7-13
• 第一章 文獻(xiàn)綜述13-27
• 1.1 凝血和抗凝血機(jī)制概述13-19
• 1.1.1 血栓形成研究13-16
• 1.1.1.2 凝集系統(tǒng)13-14
• 1.1.1.3 血小板激活和聚集14-15
• 1.1.1.4 血液流動(dòng)條件的改變15-16
• 1.1.2 抗凝血研究16-19
• 1.1.2.1 抑制組織因子16
• 1.1.2.2 抑制凝血途徑16
• 1.1.2.3 抗血小板聚集16
• 1.1.2.4 抑制血小板膜受體16-17
• 1.1.2.5 核苷酸系統(tǒng)上的影響17
• 1.1.2.6 抑制血小板顆粒分泌17-18
• 1.1.2.7 影響花生四烯酸系統(tǒng)18
• 1.1.2.8 纖維蛋白溶解18-19
• 1.2 AEE研究概述19-21
• 1.2.1 AEE的藥理學(xué)作用19-21
• 1.2.1.1 抗炎作用19-20
• 1.2.1.2 抗血小板凝集作用20
• 1.2.1.3 鎮(zhèn)痛作用20
• 1.3.1.4 解熱作用20
• 1.3.1.5 抗氧化作用20-21
• 1.2.2 毒性研究21
• 1.3 基因芯片研究概述21-24
• 1.3.1 基因芯片的應(yīng)用22-23
• 1.3.1.1 藥物篩選和新藥開發(fā)22
• 1.3.1.2 疾病診斷22
• 1.3.1.3 環(huán)境保護(hù)22-23
• 1.3.2 基因芯片的研究領(lǐng)域23-24
• 1.3.2.1 基因表達(dá)檢測(cè)23
• 1.3.2.2 尋找新基因23
• 1.3.2.3 DNA測(cè)序23-24
• 1.3.2.4 核酸突變的檢測(cè)及SNP分析24
• 1.4 研究的目的和意義24-25
• 1.5 技術(shù)路線25-27
• 1.5.1 血栓模型25-26
• 1.5.2 信號(hào)通路和靶基因分析26-27
• 第二章 wistar大鼠血栓模型的建立和研究27-34
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料27-28
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物27
• 2.1.2 試劑和儀器27-28
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法28-29
• 2.2.1 藥物劑量28
• 2.2.2 腹腔注射28
• 2.2.3 病理學(xué)觀察28
• 2.2.4 細(xì)胞形態(tài)觀察28-29
• 2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析29
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-32
• 2.3.1 血栓29
• 2.3.2 血栓黑尾長(zhǎng)度分析29-30
• 2.3.3 血栓黑尾比率分析30-31
• 2.3.4 病理學(xué)分析31-32
• 2.3.5 血細(xì)胞形態(tài)觀察32
• 2.4 討論32-34
• 第三章 心臟組織基因表達(dá)譜分析34-48
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料34
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物34
• 3.1.2 組織樣品34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與儀器34
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法34-39
• 3.3.1 血栓模型34
• 3.3.2 藥物劑量和分組34-35
• 3.3.3 制備基因表達(dá)譜芯片35-38
• 3.3.3.1 Total RNA提取35-36
• 3.3.3.2 Total RNA的純化36
• 3.3.3.3 RNA濃度測(cè)定36
• 3.3.3.4 cDNA合成36-37
• 3.3.3.5 cDNA熒光標(biāo)記37
• 3.3.3.6 cDNA樣品片段化37-38
• 3.3.3.7 芯片雜交和洗滌38
• 3.3.3.8 芯片掃描38
• 3.3.4 芯片生物信息學(xué)分析38-39
• 3.3.4.1 差異基因篩選和分析38
• 3.3.4.2 維恩圖分析38-39
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-46
• 3.4.1 血栓形成39
• 3.4.2 RNA質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果39-40
• 3.4.3 心臟組織基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)結(jié)果40-43
• 3.4.3.1 治療組與正常組基因表達(dá)譜結(jié)果分析40-41
• 3.4.3.2 治療組與模型組基因表達(dá)譜結(jié)果分析41-42
• 3.4.3.3 治療組與CMC-Na藥物溶劑組基因表達(dá)譜結(jié)果分析42
• 3.4.3.4 CMC-Na藥物溶劑基因表達(dá)圖結(jié)果分析42-43
• 3.4.3.5 模型組和正常組基因表達(dá)譜結(jié)果分析43
• 3.4.4 藥物抗血栓作用的相關(guān)性分析43-46
• 3.4.4.1AEE對(duì)血栓基因表達(dá)的影響43
• 3.4.4.2 AEE、阿司匹林和丁香酚對(duì)血栓基因表達(dá)的影響43-44
• 3.4.4.3 AEE、阿司匹林和丁香酚與聯(lián)合用藥對(duì)血栓基因表達(dá)的影響44-46
• 3.5 討論46-48
• 第四章 AEE抗血栓作用信號(hào)通路和靶基因分析48-81
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料48
• 4.1.1 動(dòng)物材料48
• 4.1.2 軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)48
• 4.2 試劑和儀器48
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法48-51
• 4.3.1 表達(dá)差異基因的篩選和分析48
• 4.3.2 qRT-PCR分析48-51
• 4.3.2.1 Total RNA的提取49
• 4.3.2.2 mRNA的檢測(cè)和分析49-50
• 4.3.2.3 引物的設(shè)計(jì)與合成50
• 4.3.2.4 Total RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)50-51
• 4.3.2.5 qRT-PCR反應(yīng)51
• 4.3.2.6 統(tǒng)計(jì)分析51
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-77
• 4.4.1 mRNA凝膠電泳分析51-52
• 4.4.2 大鼠基因表達(dá)譜芯片分析52-73
• 4.4.2.1 細(xì)胞組分分析52-57
• 4.4.2.2 生物學(xué)過(guò)程分析57-63
• 4.4.2.3 分子功能分析63-67
• 4.4.2.4 差異表達(dá)基因Pathway分析67-72
• 4.4.2.5 凝血級(jí)聯(lián)信號(hào)通路和靶基因72-73
• 4.4.3 qRT-PCR分析73-77
• 4.5 討論77-81
• 4.5.1 AEE抗血栓作用的基因表達(dá)譜分析77-78
• 4.5.2 Fga和Fgb基因研究78
• 4.5.3 Serpinc1基因研究78-79
• 4.5.4 Plaur基因研究79
• 4.5.5 F2基因研究79-81
• 第五章 結(jié)論81-82
• 參考文獻(xiàn)82-92
• 致謝92-93
• 作者簡(jiǎn)介93-94
• 導(dǎo)師簡(jiǎn)介94-96

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：基于心臟組織的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析AEE治療大鼠血栓的調(diào)控機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：304455