本文關(guān)鍵詞：雷帕霉素在輻射引起的小鼠造血系統(tǒng)損傷中的保護(hù)作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討雷帕霉素(Rapamycin,Rap)預(yù)處理對(duì)電離輻射引起的小鼠造血系統(tǒng)損傷是否有保護(hù)作用。方法:(1)將C57BL/6小鼠分為未輻射組和輻射處理組,每組又分對(duì)照組和雷帕霉素預(yù)處理組。輻射組小鼠接受60Coγ射線5 Gy輻射,雷帕霉素預(yù)處理組小鼠輻射處理前腹腔注射雷帕霉素4 mg/kg,隔天注射一次,共五次。取未輻射組和輻射各處理組小鼠外周血,通過(guò)全血分析儀檢測(cè)各時(shí)間段(第0.5,1,2,3,5,7,15,30,40,70,100天)小鼠外周血白細(xì)胞(WBC),淋巴細(xì)胞(LYM),紅細(xì)胞(RBC),血小板(PLT)和血紅蛋白(HGB)的變化,分析輻射處理和雷帕霉素處理對(duì)外周血各指標(biāo)的影響,并分析輻射后外周血各指標(biāo)變化趨勢(shì)。(2)取未輻射組和輻射后第6和12小時(shí)的小鼠股骨和脛骨骨髓單個(gè)核細(xì)胞,通過(guò)流式細(xì)胞分析儀和Western Blotting檢測(cè)對(duì)照組和雷帕霉素處理組單個(gè)核細(xì)胞損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX聚集,并通過(guò)Western Blotting檢測(cè)損傷修復(fù)途徑-同源末端修復(fù)(HR)和非同源末端連接修復(fù)(NHEJ)關(guān)鍵蛋白R(shí)ad50和DNA Lig4表達(dá)量的變化。(3)取輻射處理后30天的骨髓細(xì)胞,低滲處理獲得染色體,分析對(duì)照組和雷帕霉素處理組細(xì)胞染色體形態(tài)變化。(4)取未輻射和輻射后(第1,5,15,30天)的對(duì)照組和雷帕霉素處理組小鼠胸骨,HE染色觀察骨髓腔內(nèi)的有核細(xì)胞分布及有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞比例,血管結(jié)構(gòu)的變化。(5)取輻射后第15天的對(duì)照組和雷帕霉素組小鼠肝組織,HE染色觀察肝結(jié)構(gòu)的變化,并取脾臟,用Tellyesniczky固定液處理觀察全脾臟表面結(jié)節(jié)數(shù),分析內(nèi)源性集落生成能力差異。(6)取5 Gy輻射后4小時(shí)內(nèi)的對(duì)照組和雷帕霉素組小鼠骨髓細(xì)胞,尾靜脈注射至10 Gy致死劑量照射處理的受體小鼠,分析中位生存時(shí)間差異。(7)將對(duì)照組和不同濃度雷帕霉素(1mg/Kg,4 mg/Kg,8 mg/Kg)預(yù)處理組小鼠8.5 Gy劑量輻射處理后,比較30天內(nèi)小鼠中位生存時(shí)間差異。結(jié)果:(1)未輻射組:雷帕霉素處理組小鼠外周血白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞數(shù)降低,紅細(xì)胞及血紅蛋白升高,血小板無(wú)變化。輻射組:雷帕霉素預(yù)處理組,短期內(nèi)可以減緩輻射誘發(fā)的小鼠外周血紅細(xì)胞、血小板下降,增強(qiáng)白細(xì)胞輻射后的長(zhǎng)期恢復(fù)。(2)未輻射組:雷帕霉素處理和對(duì)照組損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX不表達(dá),同時(shí)對(duì)損傷修復(fù)蛋白R(shí)ad50和DNA Lig4的表達(dá)無(wú)影響。輻射后:雷帕霉素預(yù)處理組損傷標(biāo)志蛋白γ-H2AX水平降低,輻射后6 h組雷帕霉素預(yù)處理組損傷修復(fù)蛋白R(shí)ad50和DNA Lig4水平升高。(3)輻射處理后30天,對(duì)照組小鼠骨髓細(xì)胞染色體形態(tài)觀察到染色體異�，F(xiàn)象(染色體斷裂和染色體間隙),而雷帕霉素處理組無(wú)染色體異常出現(xiàn)。(4)輻射前和輻射后不同時(shí)間段小鼠胸骨HE染色發(fā)現(xiàn),未輻射組,雷帕霉素處理不影響有核細(xì)胞與成熟紅細(xì)胞比例,靜脈結(jié)構(gòu)完整,紅細(xì)胞有序分布靜脈竇內(nèi);輻射處理后,對(duì)照組和雷帕霉素處理組在輻射后短期內(nèi)均出現(xiàn)有核細(xì)胞減少,紅細(xì)胞增多,靜脈結(jié)構(gòu)消失,紅細(xì)胞紊亂分布,輻射后15天開始,有核細(xì)胞逐漸恢復(fù),紅細(xì)胞減少,靜脈結(jié)構(gòu)重現(xiàn),但在對(duì)照組有核細(xì)胞恢復(fù)速度明顯慢于雷帕霉素處理組,并且對(duì)照組出現(xiàn)紅細(xì)胞惡性增殖的現(xiàn)象。(5)未輻射組,雷帕霉素處理不影響肝組織的結(jié)構(gòu);輻射處理后第15天,對(duì)照組小鼠出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞水腫現(xiàn)象,而雷帕霉素處理組肝細(xì)胞水腫程度明顯輕于對(duì)照組;對(duì)第15天的脾臟表面集落計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn),雷帕霉素處理組脾集落明顯高于對(duì)照組。(6)將輻射后對(duì)照組和雷帕霉素處理組的小鼠骨髓細(xì)胞對(duì)致死劑量輻射小鼠立即進(jìn)行骨髓移植,觀察小鼠存活時(shí)間,結(jié)果表明,雷帕霉素預(yù)處理可一定程度延緩致死劑量輻射小鼠的死亡時(shí)間。(7)對(duì)照組與不同濃度雷帕霉素處理組小鼠30天存活曲線表明,當(dāng)腹腔注射濃度為4mg/Kg時(shí),能延緩致死劑量照射引起的小鼠死亡。結(jié)論:(1)輻射前雷帕霉素預(yù)處理可以有效的減輕輻射對(duì)造血系統(tǒng)的損傷,有利于外周血象和骨髓象的恢復(fù)。(2)輻射前雷帕霉素預(yù)處理通過(guò)抑制損傷修復(fù)蛋白下調(diào),降低基因組損傷來(lái)介導(dǎo)輻射損傷防護(hù)作用。(3)雷帕霉素預(yù)處理對(duì)髓外造血器官也有保護(hù)作用,可減輕輻射引起的肝細(xì)胞水樣變性,增強(qiáng)內(nèi)源性脾集落生成能力。(4)雷帕霉素預(yù)處理后輻射小鼠骨髓細(xì)胞移植至致死劑量輻射小鼠,可適當(dāng)延緩小鼠死亡時(shí)間。
【關(guān)鍵詞】：雷帕霉素 電離輻射 造血系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-18
• 一、材料13-15
• 1、主要試劑13-14
• 2、主要儀器14
• 3、藥物和試劑配制14
• 4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物14-15
• 二、方法15-18
• 1、實(shí)驗(yàn)小鼠處理與分組15
• 2、小鼠外周血象測(cè)定15-16
• 5、骨髓細(xì)胞核型分析16
• 6、蛋白質(zhì)免疫印跡16-17
• 7、脾集落檢測(cè)17
• 8、小鼠組織HE染色17
• 9、骨髓移植17
• 10、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析17-18
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-29
• 一、雷帕霉素預(yù)處理減少輻射引起的小鼠外周血細(xì)胞損傷18-20
• 二、雷帕霉素預(yù)處理降低輻射引起的小鼠骨髓細(xì)胞基因組損傷20-22
• 三、雷帕霉素預(yù)處理減少輻射引起的小鼠骨髓損傷22-25
• 四、雷帕霉素預(yù)處理減少輻射引起的小鼠肝和脾損傷25-27
• 五、雷帕霉素預(yù)處理骨髓移植延長(zhǎng)致死劑量輻射小鼠死亡時(shí)間27-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-38
• 綜述：輻射損傷與輻射防護(hù)38-58
• 參考文獻(xiàn)49-58
• 碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文58-59
• 附錄59-60
• 中英文縮略詞匯表60-61
• 致謝61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 田生禮;邴文貴;李健超;;人參多糖對(duì)X射線照射小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變和造血干、祖細(xì)胞的影響[J];白求恩醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1992年03期

2 趙紅光,王志成,杜翔,呂U

本文編號(hào)：281782