目的:確證血液特異性mRNA分子存在人群多態(tài)性,并可利用這種多態(tài)性進行混合斑個體識別。方法:本課題利用復合擴增技術(multiplex PCR)和單堿基延伸技術(SNaPshot)對血液特異性mRNA分子上的SNP位點進行檢測。構建針對5個血液特異性基因的16個SNP位點的檢測試劑盒方法如下:(1)通過文獻尋找血液特異性mRNA分子,同時利用NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫尋找這些基因上的SNP位點。(2)對篩選出的SNP位點利用Primer3軟件設計引物。(3)對每對設計好的引物進行引物特異性和體液特異性檢測。(4)將所有引物進行復合擴增,并調(diào)整復合擴增體系。(5)利用SNaPshot技術檢測16個血液特異性SNP位點,得出分型結果。(6)對構建好的體系進行應用性驗證并計算法醫(yī)學參數(shù),包括人群多態(tài)性,和對混合斑檢測能力的驗證。結果:1、成功構建了基于毛細管電泳平臺(CE)利用SNaPshot技術檢測16個血液特異性SNP位點的檢測試劑盒。2、對山西人群進行多態(tài)性統(tǒng)計,這一體系的個體識別能力達到0.99929。3、利用該檢測體系對混合斑進行分析,在進行血液供者占比為1%的極度不平衡混合斑檢測...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖116個血液特異性mRNA分型檢測結果

山西醫(yī)科大學碩士學位論文12圖116個血液特異性mRNA分型檢測結果圖中藍色峰代表鳥嘌呤（G）；綠色代表腺嘌呤（A）；黑色代表胞嘧啶（C）；紅色代表胸腺嘧啶（T）。圖片展示的是5ng血液模板所獲得的分型結果。3討論許多混合斑樣本由多人多種體液構成，且這種檢材往往伴隨著極度不平衡混....

圖1陰道分泌液，唾液，精液，皮膚特異性檢測結果

山西醫(yī)科大學碩士學位論文222.5混合斑檢測結果很多在案發(fā)現(xiàn)場發(fā)現(xiàn)的檢材是混合斑檢材，我們這一課題的目的也在于解決多人構成的混合斑和極度不平衡混合斑問題。因此我們制作了兩種體液構成的極度不平衡混合斑樣本和多人多種體液構成的極度不平衡混合斑樣本。對于前者，我們將血液RNA分別與唾液....

圖2月經(jīng)血特異性檢測結果

山西醫(yī)科大學碩士學位論文23圖2月經(jīng)血特異性檢測結果利用本體系對5ng月經(jīng)血模板進行檢測電泳結果圖�？蓹z測到大部分靜脈血特異性SNP位點，但大部分峰的峰高低于500RFU。圖3靈敏度檢測結果上圖表示1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測分型結果圖，下圖表示0.1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測結果圖....

圖3靈敏度檢測結果

山西醫(yī)科大學碩士學位論文23圖2月經(jīng)血特異性檢測結果利用本體系對5ng月經(jīng)血模板進行檢測電泳結果圖�？蓹z測到大部分靜脈血特異性SNP位點，但大部分峰的峰高低于500RFU。圖3靈敏度檢測結果上圖表示1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測分型結果圖，下圖表示0.1ngRNA模板經(jīng)電泳檢測結果圖....

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