本文關(guān)鍵詞：納米二氧化硅對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：納米材料是一類被定義為尺寸在100納米以下的材料。二氧化硅(Si O2)納米粒子因其具有眾多獨特的良好性質(zhì)而得到了更廣泛的生產(chǎn)。此外,納米二氧化硅能夠通過很多方式進入到水環(huán)境中,包括常規(guī)使用、直接排放、廢棄物排放等,所以評價納米材料對水生生物的毒性十分必要。為了闡明納米Si O2對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響,本課題以斑馬魚為模式生物,納米Si O2為研究對象,通過向水中添加懸浮納米Si O2,從形態(tài)上觀察其對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響;利用m RNA表達譜分析、實時定量RT-PCR和全胚原位雜交技術(shù)從基因表達水平揭示納米Si O2對斑馬魚作用的分子機制。本課題的開展,將明確納米材料對于水生生物的發(fā)育毒性,為納米Si O2的安全使用提供依據(jù)。形態(tài)學(xué)觀察與統(tǒng)計分析結(jié)果表明,納米Si O2可引起斑馬魚胚胎存活率下降、48hpf心率降低、24hpf自主運動頻率下降,其還可導(dǎo)致斑馬魚96hpf畸形,主要有圍心囊水腫、卵黃囊吸收延遲等�；蛐酒治霭l(fā)現(xiàn)納米Si O2可顯著抑制斑馬魚胚胎骨系統(tǒng)、體節(jié)形成發(fā)育相關(guān)基因col2a1a、col9a2和lect1的表達,促進破壞體節(jié)發(fā)育相關(guān)基因her12的表達。定量RT-PCR發(fā)現(xiàn)納米Si O2可顯著下調(diào)48hpf斑馬魚胚胎肝臟發(fā)育相關(guān)基因prox、wnt2bb、mypt1和心血管發(fā)育相關(guān)基因hand2、mef2a、nkx2.5、atp1a2a、flk-1的表達。全胚原位雜交實驗發(fā)現(xiàn)納米Si O2可引起48hpf斑馬魚胚胎心血管發(fā)育相關(guān)基因amhc和flk-1表達明顯減弱,導(dǎo)致原始心管從中線向左側(cè)轉(zhuǎn)移延遲,說明心臟發(fā)育延遲。此外,納米Si O2可影響斑馬魚胚胎原始紅系細胞和髓系細胞的發(fā)育,影響造血功能。納米Si O2可通過上調(diào)斑馬魚胚胎體內(nèi)凋亡相關(guān)基因bax和bid表達量和下調(diào)抗凋亡相關(guān)基因bcl-2和mcl-1b表達量,誘導(dǎo)斑馬魚胚胎細胞凋亡,且AO染色結(jié)果顯示凋亡主要集中在心臟區(qū)域。納米Si O2可促進內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)生的相關(guān)基因chop、bip、perk、e IF2α的表達,說明其可誘導(dǎo)斑馬魚胚胎產(chǎn)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。以上結(jié)果表明,納米Si O2可誘導(dǎo)斑馬魚發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,產(chǎn)生細胞凋亡,影響斑馬魚胚胎心血管、肝臟及體節(jié)等器官的發(fā)育。
【關(guān)鍵詞】：納米二氧化硅 基因芯片 心血管發(fā)育 斑馬魚胚胎
【學(xué)位授予單位】：哈爾濱工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114;TB383.1
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 第1章 緒論9-20
• 1.1 課題研究背景及目的意義9
• 1.2 納米材料的研究概述9-11
• 1.2.1 納米材料9-11
• 1.2.2 納米SiO_211
• 1.3 納米材料的暴露和毒性11-17
• 1.3.1 納米材料的暴露11-12
• 1.3.2 納米材料的毒性12-16
• 1.3.3 納米SiO_2 的生物毒性16-17
• 1.4 課題的主要研究內(nèi)容17-20
• 第2章 實驗材料與方法20-29
• 2.1 實驗材料與試劑20-21
• 2.1.1 實驗材料20
• 2.1.2 實驗試劑20-21
• 2.2 實驗儀器21-22
• 2.3 實驗方法22-29
• 2.3.1 實驗樣品的準(zhǔn)備22-23
• 2.3.2 mRNA表達譜芯片分析23
• 2.3.3 總RNA的提取23
• 2.3.4 反轉(zhuǎn)錄23-24
• 2.3.5 熒光定量RT-PCR24-25
• 2.3.6 半定量PCR25
• 2.3.7 全胚原位雜交25-27
• 2.3.8 吖啶橙染色27
• 2.3.9 蘇丹黑染色27
• 2.3.10 固藍染色27-28
• 2.3.11 納米SiO_2 的表征28
• 2.3.12 結(jié)果的統(tǒng)計分析及處理28-29
• 第3章 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響29-40
• 3.1 引言29
• 3.2 納米SiO_2 的表征分析29-30
• 3.2.1 納米SiO_2 的粒徑及Zeta電位檢測29-30
• 3.2.2 納米SiO_2 的電鏡觀察30
• 3.3 熒光顯微鏡觀察分析納米SiO_2 進入斑馬魚胚胎體內(nèi)30-31
• 3.4 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響31-38
• 3.4.1 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎存活率的影響32-33
• 3.4.2 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎孵化率的影響33-34
• 3.4.3 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎心率的影響34-35
• 3.4.4 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎自主運動頻率的影響35
• 3.4.5 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎畸形率及組織器官的影響35-38
• 3.5 本章討論38-39
• 3.6 本章小結(jié)39-40
• 第4章 納米SiO_2 對斑馬魚胚胎發(fā)育的基因表達影響40-54
• 4.1 引言40
• 4.2 表達譜分析納米SiO_2 對斑馬魚胚胎發(fā)育的基因表達影響40-48
• 4.2.1 納米SiO_2 對斑馬魚體節(jié)發(fā)育相關(guān)基因的表達影響43-44
• 4.2.2 納米SiO_2 對斑馬魚肝臟發(fā)育相關(guān)基因的表達影響44-45
• 4.2.3 納米SiO_2 對斑馬魚心血管發(fā)育相關(guān)基因的表達影響45-48
• 4.3 納米SiO_2 對斑馬魚凋亡相關(guān)基因的表達影響48-50
• 4.4 納米SiO_2 對斑馬魚內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)基因的表達影響50-51
• 4.5 本章討論51-53
• 4.6 本章小結(jié)53-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-62
• 附錄一62-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文及其他成果64-66
• 致謝66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：納米二氧化硅對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：484451