目的探討活性氧(reactive oxidative species, ROS)介導(dǎo)的線粒體損傷在鎘(cadmium, Cd)暴露誘導(dǎo)肝L02細(xì)胞凋亡和DNA損傷中的作用。方法以肝L02細(xì)胞為研究對象,利用0～90μmol/L的Cd處理細(xì)胞24 h,采用噻唑蘭法檢測Cd暴露對細(xì)胞生存率的影響;以0、20和40μmol/L的Cd染毒細(xì)胞24 h,分別采用克隆形成實驗、流式細(xì)胞術(shù)、彗星實驗、2′,7′-二氯熒光黃雙乙酸鹽非標(biāo)記性氧化敏感的熒光探針、線粒體紅色熒光探針(Mitotracker Red CMXRos)和10-N-壬基-吖啶橙等熒光探針標(biāo)記、線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)、ATP測定試劑盒以及Western Blot等方法,檢測Cd暴露對細(xì)胞克隆形成能力、細(xì)胞凋亡、DNA損傷、ROS水平、線粒體形態(tài)、線粒體膜電位(mitochondrial membrane potential, MMP/Δψm)、線粒體質(zhì)量、ATP含量及相關(guān)蛋白的影響;利用90μmol/L抗氧化劑維生素C預(yù)處理細(xì)胞1 h后給予40μmol/L Cd處理細(xì)胞24 h,檢測ROS水平、Δψm、線粒體質(zhì)量、ATP...

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【部分圖文】：

MitoTrackerRedCMXRos熒光探針標(biāo)記的結(jié)果顯示,Cd能夠誘導(dǎo)線粒體發(fā)生明顯的顆粒狀改變,且隨Cd處理劑量的增高,該現(xiàn)象更為顯著(圖4);對WesternBlot結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析,如表3所示,胞漿cytc的蛋白水平隨Cd處理劑量的增高而增高,伴隨線粒體cyt....

由表3可見,隨Cd處理濃度的增高,相對熒光強(qiáng)度(紅光/綠光)顯著降低,提示Cd可劑量依賴性降低線粒體膜電位。NAO熒光法檢測結(jié)果顯示,隨Cd暴露劑量的增高,線粒體質(zhì)量顯著降低;且ATP的檢測結(jié)果也表明,Cd引起細(xì)胞內(nèi)ATP含量呈劑量依賴性降低,提示線粒體ATP的生成在Cd暴露的....

Cd作為一種具有強(qiáng)生物毒性的重金屬污染物,不僅能夠?qū)C(jī)體的生殖、免疫及神經(jīng)系統(tǒng)造成不同程度的損傷,還可破壞肝臟及腎臟的結(jié)構(gòu)和功能�，F(xiàn)有的研究結(jié)果表明,Cd通過線粒體途徑和死亡受體途徑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡是其發(fā)揮生物毒性的主要原因,Cd可降低Bcl-2的表達(dá)和Δψm,促進(jìn)凋亡誘導(dǎo)因子的釋....

圖5鎘暴露誘導(dǎo)肝L02細(xì)胞內(nèi)活性氧自由基大量蓄積表4維生素C預(yù)處理對鎘暴露細(xì)胞線粒體功能的影響(xˉ±s)分組蛋白表達(dá)改變線粒體膜電位(紅/綠)線粒體質(zhì)量/%ATP/%胞漿細(xì)胞色素c線粒體細(xì)胞色素c對照組1.00±0.131.00±0.132.9....

本文編號：4009689