本文關(guān)鍵詞：DMT1和鈣離子通道在星型膠質(zhì)細(xì)胞和脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞鉛吸收中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景： 鉛是最常見(jiàn)的環(huán)境重金屬污染物之一，在大氣、水、土壤中廣泛存在。鉛可通過(guò)呼吸道、消化道和皮膚等途徑進(jìn)入人體，吸收入血后，經(jīng)過(guò)血液循環(huán)分布到各組織，可造成全身幾乎所有系統(tǒng)和器官的損害，而其中又以中樞神經(jīng)毒性作用最為受到關(guān)注。鉛的神經(jīng)毒性機(jī)制目前尚不完全清楚，而其在大腦中的轉(zhuǎn)運(yùn)和分布規(guī)律、不同組織對(duì)鉛的親和性共同影響著鉛的毒性效應(yīng)，因此，鉛的轉(zhuǎn)運(yùn)和分布規(guī)律及機(jī)制是深入揭示鉛神經(jīng)毒性機(jī)制的研究基礎(chǔ)和重要線索。 關(guān)于鉛在大腦中轉(zhuǎn)運(yùn)分布規(guī)律和機(jī)制目前所知甚少。以往研究發(fā)現(xiàn)：二價(jià)金屬轉(zhuǎn)運(yùn)體1（divalent metal transporter1, DMT1）、鈣離子通道、細(xì)胞內(nèi)吞作用、陰離子交換等均可能參與了細(xì)胞的鉛轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程。但是，不同的暴露方式下，不同器官和不同類型細(xì)胞中，鉛的轉(zhuǎn)運(yùn)方式存在很大不同，導(dǎo)致鉛在不同組織、細(xì)胞吸收和分布的巨大差異。因此，研究鉛在不同類型神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的差異及其特點(diǎn)，，闡明相關(guān)的重要分子機(jī)制，并在此基礎(chǔ)上探討可能的防治措施，是預(yù)防醫(yī)學(xué)亟待解決的重要課題。 研究目的： 本研究以SD大鼠、大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系C6細(xì)胞、大鼠脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞系Z310細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探討DMT1和鈣離子通道在星型膠質(zhì)細(xì)胞和脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞鉛吸收過(guò)程中的不同作用，為闡明鉛在大腦不同類型神經(jīng)細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制、分布規(guī)律提供研究基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。 研究方法： 1.建立亞慢性鉛暴露大鼠模型：21d初斷乳雄性SD大鼠，體重65±15g。鉛暴露組飲水法給予100ppm醋酸鉛，對(duì)照組飲水給予100ppm醋酸鈉，無(wú)限制飲用8周。 2.建立鉛染毒細(xì)胞模型：大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞系C6細(xì)胞、大鼠永生化脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞系Z310細(xì)胞、原代星型膠質(zhì)細(xì)胞分別體外培養(yǎng)，鉛處理組細(xì)胞培養(yǎng)液中加入5μM醋酸鉛溶液。 3.采用原子吸收分光光度法檢測(cè)大鼠血液，大腦海馬、脈絡(luò)叢及C6細(xì)胞、Z310細(xì)胞中鉛含量，采用免疫熒光組化方法檢測(cè)海馬、脈絡(luò)叢及C6細(xì)胞、Z310細(xì)胞中DMT1的表達(dá)水平及鉛暴露對(duì)其表達(dá)水平的影響。 4.采用Western blot、Real-time RT-PCR方法檢測(cè)鉛暴露對(duì)C6細(xì)胞、Z310細(xì)胞DMT1蛋白與mRNA表達(dá)水平的影響。 5.采用鈣熒光探針Fluo-3/AM標(biāo)記技術(shù)，激光掃描共聚焦顯微鏡觀察鉛對(duì)細(xì)胞鈣離子吸收的影響。 研究結(jié)果： 1.鉛暴露后，大鼠血液、腦脊液、大腦組織中的鉛水平一致性增高。 2.鉛對(duì)DMT1表達(dá)水平的影響：（1）免疫熒光染色結(jié)果顯示：SD大鼠海馬和脈絡(luò)叢組織中DMT1均有較豐富的表達(dá)，低劑量慢性鉛暴露并未顯著影響DMT1的表達(dá)水平，C6細(xì)胞和Z310細(xì)胞中DMT1表達(dá)水平不同，Z310細(xì)胞DMT1表達(dá)熒光強(qiáng)度顯著強(qiáng)于C6細(xì)胞（；2）Western-blot、RT-PCR結(jié)果顯示：鉛對(duì)上述兩種細(xì)胞DMT1蛋白和mRNA表達(dá)水平均未產(chǎn)生顯著影響。 3. DMT1在脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞鉛吸收中的作用：（1）原子吸收分光光度法結(jié)果顯示：DMT1siRNA干涉后，C6細(xì)胞和Z310細(xì)胞鉛吸收均顯著降低，與C6細(xì)胞相比，Z310細(xì)胞鉛吸收的降低幅度更加顯著；（2）使用鐵螯合劑DFO使細(xì)胞處于缺鐵狀態(tài)，兩種細(xì)胞鉛吸收量出現(xiàn)不同程度增加；而補(bǔ)鐵24h后，Z310細(xì)胞鉛吸收量顯著降低，C6細(xì)胞鉛吸收水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。在細(xì)胞培養(yǎng)體系中同時(shí)加入等量鉛與鐵時(shí)，兩種細(xì)胞鉛吸收水平均顯著降低。 4.激光共聚焦顯微鏡結(jié)果顯示：（1）對(duì)照組加入鈣離子激動(dòng)劑Bay K8644后，C6細(xì)胞中鈣熒光強(qiáng)度增高，之后逐漸減弱。與對(duì)照組相比，鉛預(yù)處理組C6細(xì)胞加入Bay K8644后，細(xì)胞內(nèi)鈣的熒光強(qiáng)度同樣增高，其峰值強(qiáng)度與對(duì)照組相近，但之后減弱的速度顯著加快；（2）而在鉛與Bay K8644同時(shí)加入的情況下，細(xì)胞內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度的峰值比對(duì)照組顯著減弱，出現(xiàn)峰值的時(shí)間后移；（3）Z310細(xì)胞對(duì)照組加入Bay K8644后，細(xì)胞中鈣熒光強(qiáng)度同樣出現(xiàn)增強(qiáng)現(xiàn)象，但顯著弱于C6細(xì)胞，之后逐漸減弱至對(duì)照組水平。與對(duì)照組相比，鉛預(yù)處理組Z310細(xì)胞加入Bay K8644后，細(xì)胞內(nèi)鈣的熒光強(qiáng)度僅出現(xiàn)輕微增高；（4）而在鉛與Bay K8644同時(shí)加入的情況下，Z310細(xì)胞內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度的峰值與對(duì)照組接近，但之后減弱的速度慢于對(duì)照組。 5.鈣離子通道在脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞和星型膠質(zhì)細(xì)胞鉛吸收中的作用：（1）鈣離子通道激動(dòng)劑處理可引起C6細(xì)胞鉛吸收水平顯著增加，而Z310細(xì)胞無(wú)顯著變化；（2）鈣離子通道抑制劑處理后，C6細(xì)胞鉛吸收水平顯著降低，Z310細(xì)胞無(wú)顯著變化。（3）CaCl2預(yù)處理未引起兩種細(xì)胞鉛吸收水平的顯著變化；CaCl2與鉛同時(shí)處理細(xì)胞時(shí)，1mmol/L CaCl2處理組細(xì)胞鉛吸收量并未發(fā)生顯著改變，而10mmol/L CaCl2處理后，兩種細(xì)胞鉛吸收量均顯著增加。 研究結(jié)論 1. DMT1和鈣離子通道在C6細(xì)胞和Z310細(xì)胞鉛轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中所起的作用不完全一致：C6細(xì)胞的鉛轉(zhuǎn)運(yùn)以鈣離子通道為主，而Z310細(xì)胞的鉛轉(zhuǎn)運(yùn)以DMT1為主。 2.補(bǔ)鐵能夠減少細(xì)胞的鉛吸收量，尤其是鐵和鉛同時(shí)存在的情況下，可以顯著減少細(xì)胞的鉛吸收，表現(xiàn)出一定的保護(hù)作用，其機(jī)制可能與細(xì)胞鐵水平通過(guò)負(fù)反饋影響DMT1表達(dá)水平，以及鐵和鉛離子之間的競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用有關(guān)。 3.細(xì)胞鉛吸收過(guò)程中，鈣的水平對(duì)鉛吸收無(wú)顯著影響；共存情況下與鈣離子對(duì)鉛離子吸收也無(wú)明顯競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用。
【關(guān)鍵詞】：鉛 C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞 永生化脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞 DMT1 鈣離子通道
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-12
• 前言12-15
• 文獻(xiàn)回顧15-30
• 實(shí)驗(yàn)一 鉛暴露大鼠模型的建立30-39
• 1 材料30-32
• 2 方法32-34
• 3 結(jié)果34-37
• 4 討論37-39
• 實(shí)驗(yàn)二 DMT1 在 C6 細(xì)胞和 Z310 細(xì)胞鉛轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用39-56
• 1 材料39-42
• 2 方法42-47
• 3 結(jié)果47-54
• 4 討論54-56
• 實(shí)驗(yàn)三 鈣離子通道對(duì) C6 細(xì)胞和 Z310 細(xì)胞鉛轉(zhuǎn)運(yùn)的影響56-64
• 1 材料56-57
• 2 方法57-58
• 3 結(jié)果58-62
• 4 討論62-64
• 小結(jié)64-65
• 參考文獻(xiàn)65-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果76-77
• 致謝77

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 王磊;蔡景霞;;星形膠質(zhì)細(xì)胞存在L-型鈣通道的新證據(jù)[J];動(dòng)物學(xué)研究;2007年05期

2 徐兆發(fā),李雪飛,李北利,李晶;脈絡(luò)叢對(duì)鉛的屏障作用及其病理形態(tài)學(xué)觀察[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2002年02期

3 王福O

本文編號(hào)：391399