食源性疾病是全球最重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一,導(dǎo)致食源性疾病的有病原微生物、寄生蟲(chóng)及其代謝產(chǎn)物、天然毒素以及化學(xué)性有毒有害物質(zhì)等等。微生物引起的食源性疾病是全球食品安全面臨的最重要挑戰(zhàn)之一。在發(fā)達(dá)國(guó)家70%～80%的細(xì)菌性食物中毒是由沙門(mén)氏菌引起的,在我國(guó)甚至達(dá)到90%;引起沙門(mén)氏菌中毒的食品中,蛋類、奶類等動(dòng)物性產(chǎn)品約占90%,沙門(mén)氏菌生存能力較強(qiáng),可在乳制品中生存幾個(gè)月。單增李斯特菌廣泛存在于自然界中,且在冷藏溫度4℃下依然能夠生長(zhǎng),引起單增李斯特菌食物中毒的食品主要有:奶及奶制品、肉制品、水產(chǎn)品、蔬菜及水果,其中以乳制品最為常見(jiàn),單增李斯特菌能夠給高風(fēng)險(xiǎn)人群帶來(lái)嚴(yán)重的感染性疾病。志賀氏菌又稱痢疾桿菌,是引起人類細(xì)菌性痢疾中最為常見(jiàn)的食源性致病菌,該菌也是食品衛(wèi)生相關(guān)法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)中要求必須檢測(cè)的項(xiàng)目之一。本文以牛奶中常見(jiàn)的食源性致病菌單增李斯特菌、沙門(mén)氏菌和志賀氏菌為目標(biāo)菌種,利用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)和高分辨率熔解曲線技術(shù)建立了多重LAMP檢測(cè)體系和多重HAND-HRM檢測(cè)體系,結(jié)果如下:1.針對(duì)單增李斯特菌溶血素蛋白（hly）基因、沙門(mén)氏菌侵襲蛋白A（invA）基因和志賀氏菌侵襲性質(zhì)�？�... 

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 緒論
    第一節(jié) 食源性疾病
    第二節(jié) 三種食源性致病菌
        一、單增李斯特菌
            1. 單增李斯特菌概述
            2. 單增李斯特菌的危害
        二、沙門(mén)氏菌
            1. 沙門(mén)氏菌概述
            2. 沙門(mén)氏菌的危害
        三、志賀氏菌
            1. 志賀氏菌的分類
            2. 志賀氏菌的危害
    第三節(jié) 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)技術(shù)
    第四節(jié) 高分辨率熔解曲線(HRM)技術(shù)
        一、HRM技術(shù)的原理
        二、飽和熒光染料
        三、HRM技術(shù)的特點(diǎn)
    第五節(jié) 同源加尾系統(tǒng)
    第六節(jié) 研究?jī)?nèi)容與意義
        一、研究?jī)?nèi)容
            1. 多重環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)體系的建立
            2. 基于HAND系統(tǒng)的高分辨率熔解曲線檢測(cè)方法的建立
        二、研究意義
第二章 多重LAMP檢測(cè)體系的建立
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        一、材料
        二、試劑與儀器
        三、培養(yǎng)基
            1. 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
            2. 3%NaCl營(yíng)養(yǎng)瓊脂
            3. 胰蛋白胨大豆酵母浸膏(TSA-YE)培養(yǎng)基
    第二節(jié) 方法
        一、細(xì)菌基因組DNA的提取
        二、引物設(shè)計(jì)與合成
        三、LAMP反應(yīng)體系及優(yōu)化
        四、多重LAMP反應(yīng)體系的優(yōu)化
        五、多重LAMP反應(yīng)的特異性及靈敏度檢測(cè)
        六、LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序
        七、多重LAMP體系對(duì)模擬污染牛奶的檢測(cè)
        八、多重LAMP體系對(duì)實(shí)際牛奶樣品的檢測(cè)
    第三節(jié) 結(jié)果
        一、引物設(shè)計(jì)
            1. 單增李斯特菌引物設(shè)計(jì)
            2. 沙門(mén)氏菌引物設(shè)計(jì)
            3. 志賀氏菌引物設(shè)計(jì)
        二、最佳引物篩選
        三、單重LAMP反應(yīng)體系及優(yōu)化
            1. 鎂離子濃度
            2. 甜菜堿濃度
            3. 引物濃度的多重體系優(yōu)化
        四、多重LAMP反應(yīng)的特異性檢測(cè)結(jié)果
        五、多重LAMP反應(yīng)的靈敏度檢測(cè)結(jié)果
        六、LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果
        七、模擬污染牛奶模型中多重LAMP靈敏度檢測(cè)
        八、實(shí)際牛奶樣品的多重LAMP檢測(cè)結(jié)果
    第四節(jié) 討論
    第五節(jié) 本章小結(jié)
第三章 基于HAND系統(tǒng)的多重高分辨率熔解曲線檢測(cè)系統(tǒng)的建立
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        一、材料
        二、試劑與儀器
        三、培養(yǎng)基
    第二節(jié) 方法
        一、細(xì)菌基因組DNA的提取
        二、引物設(shè)計(jì)與合成
        三、基于HAND系統(tǒng)單重反應(yīng)體系及優(yōu)化
        四、多重HAND-HRM反應(yīng)體系的優(yōu)化
        五、多重HAND-HRM體系的特異性檢測(cè)
        六、多重HAND-HRM體系的靈敏度檢測(cè)
        七、評(píng)估不同模板濃度對(duì)多重HAND-HRM體系檢測(cè)的影響
        八、多重HAND-HRM體系穩(wěn)定性檢測(cè)
        九、多重HAND-HRM體系擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序
        十、多重HAND-HRM體系對(duì)模擬污染牛奶的檢測(cè)
        十一、多重HAND-HRM體系對(duì)實(shí)際牛奶樣品的檢測(cè)
    第三節(jié) 結(jié)果
        一、引物設(shè)計(jì)結(jié)果
            1. 單增李斯特菌引物
            2. 沙門(mén)氏菌引物
            3. 志賀氏菌引物
        二、基于HAND系統(tǒng)單重反應(yīng)體系及優(yōu)化
            1. 引物篩選
            2. 退火溫度優(yōu)化
        三、多重HAND-HRM反應(yīng)體系的優(yōu)化
        四、多重HAND-HRM體系的特異性檢測(cè)結(jié)果
        五、多重HAND-HRM體系的靈敏度檢測(cè)結(jié)果
        六、不同模板濃度對(duì)多重HAND-HRM體系檢測(cè)影響的評(píng)估結(jié)果
        七、多重HAND-HRM體系穩(wěn)定性檢測(cè)結(jié)果
        八、多重HAND-HRM體系擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序
        九、多重HAND-HRM體系對(duì)模擬污染牛奶的檢測(cè)
        十、實(shí)際牛奶樣品的多重HAND-HRM檢測(cè)結(jié)果
    第四節(jié) 討論
    第五節(jié) 本章小結(jié)
第四章 結(jié)論與展望
    第一節(jié) 結(jié)論
    第二節(jié) 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]應(yīng)用特異性免疫磁珠快速檢測(cè)單增李斯特菌[D]. 聞一鳴.暨南大學(xué) 2013
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[3]雞源鮑氏志賀氏菌及其脂多糖對(duì)雛雞的致病性研究[D]. 潘國(guó)民.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3694549