本文關(guān)鍵詞：硫酸鎳對體外培養(yǎng)的大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成酶和氧化應激的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的觀察硫酸鎳(NiSO4)致體外培養(yǎng)的大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的變化,從睪酮合成酶和氧化應激角度探討其可能機制。 方法采用膠原酶消化、Percoll梯度密度離心和差速貼壁法體外分離和純化大鼠睪丸間質(zhì)細胞,并用3p-HSD染色法對細胞純度進行鑒定。體外培養(yǎng)的睪丸間質(zhì)細胞分別用0、250、500和1000μmol/L NiSO4及1IU/m1人絨毛膜促性腺激素(hCG)處理6、12和24h。用酶聯(lián)免疫吸附法檢測培養(yǎng)上清液中睪酮(T)濃度。實時熒光定量PCR技術(shù)檢測睪丸間質(zhì)細胞類固醇合成快速調(diào)節(jié)蛋白(StAR)、細胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)、3β-羥類固醇脫氫酶(3β-HSD)和類固醇17α-羥化酶(P450c17) mRNA的表達水平。流式細胞儀檢測睪丸間質(zhì)細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,分光光度法檢測細胞抑制羥自由基能力(Anti-OH),酶聯(lián)免疫吸附法檢測細胞內(nèi)8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的含量。 結(jié)果(1)3β-HSD法鑒定結(jié)果顯示,體外純化的大鼠睪丸間質(zhì)細胞胞漿呈深藍色,其純度可達90%以上。(2)睪酮測定結(jié)果顯示：相同處理濃度,與0h組比較,hCG和NiSO4Oμmol/L同時處理睪丸間質(zhì)細胞24h后培養(yǎng)上清液中T濃度明顯升高(P0.01),hCG和NiSO41000μmol/L同時處理間質(zhì)細胞24h后培養(yǎng)上清液中T濃度明顯降低(P0.01)。相同處理時間,與對照組比較,hCG和NiSO4各濃度同時處理間質(zhì)細胞24h后,NiSO4各濃度組培養(yǎng)上清液中T濃度明顯降低(P0.01)。(3)實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示：hCG和NiSO4同時處理睪丸間質(zhì)細胞24h后,與0h組比較,NiSO40μmol/L處理組間質(zhì)細胞StAR mRNA表達量明顯升高(P0.01), NiSO4250μmol/L處理組間質(zhì)細胞P450scc、3p-HSD和P450c17mRNA表達量均明顯降低(P0.01),而NiSO4500μmol/L和1000μmol/L處理組間質(zhì)細胞StAR、P450scc、3β-HSD和P450c17mRNA表達量均明顯降低(P0.01)。hCG和NiSO4同時處理睪丸間質(zhì)細胞24h后,與對照組比較,NiSO4各濃度組StAR、P450scc、3β-HSD和P450c17mRNA表達量均明顯降低(P0.01)。(4)細胞內(nèi)ROS含量測定結(jié)果顯示：相同處理濃度,與0h組比較,NiSO4250μmol/L組處理12h后大鼠睪丸間質(zhì)細胞ROS水平增高(P 0.05); NiSO4500和1000μmol/L處理睪丸間質(zhì)細胞6、12和24h后,間質(zhì)細胞內(nèi)ROS水平均明顯增高(P0.05)。相同處理時間,與對照組比較,硫酸鎳處理6h后,NiSO4500和1000μmol/L處理組細胞內(nèi)ROS水平明顯增加(P0.05)；硫酸鎳處理12h后,NiSO4500和1000μmol/L處理組細胞內(nèi)ROS水平明顯增高(P0.05)；硫酸鎳處理24h后,NiSO4各濃度組均使細胞內(nèi)ROS水平明顯增高(P0.01)。(5)間質(zhì)細胞Anti-OH水平測定結(jié)果顯示：相同處理濃度,與0h組比較,NiSO4250μmol/L處理12h和24h后間質(zhì)細胞Anti-·OH水平降低(P0.01); NiSO4500和1000μmol/L分別處理6、12和24h后間質(zhì)細胞Anti-OH水平均降低(P0.05)。相同處理時間,與對照組比較,硫酸鎳處理6h后,NiSO4500和1000μmol/L組間質(zhì)細胞Anti-'OH水平降低(P0.05)；硫酸鎳處理12h和24h后,NiSO4各濃度組間質(zhì)細胞Anti-·OH水平均降低(P0.01)。(6)8-OHdG測定結(jié)果顯示：相同處理濃度,與0h組比較,NiSO4500和1000μmol/L分別處理12和24h后細胞內(nèi)8-OHdG含量均增加(P0.01)。相同處理時間,與對照組比較,硫酸鎳處理12和24h后,NiSO4500和1000μmol/L組細胞內(nèi)8-OHdG含量均顯著增加(P0.05)。 結(jié)論硫酸鎳誘導的體外培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌量降低可能與其引起的間質(zhì)細胞睪酮合成酶基因表達下調(diào)及DNA氧化損傷有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：硫酸鎳 睪丸間質(zhì)細胞 睪酮 睪酮合成酶 氧化應激
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-18
• 1 鎳的一般毒作用概述9-13
• 1.1 人體鎳暴露途徑9
• 1.2 鎳在細胞內(nèi)分布9-10
• 1.3 鎳的生物學作用10
• 1.4 鎳的一般毒作用10-11
• 1.5 鎳的毒作用機制11-13
• 2 鎳的雄性生殖毒性13-16
• 2.1 鎳對雄性生殖內(nèi)分泌的影響13-14
• 2.2 鎳對睪丸的影響14
• 2.3 鎳對精子的影響14-15
• 2.4 鎳對睪丸間質(zhì)細胞的影響15-16
• 3 自由基及DNA氧化損傷16-17
• 4 研究目的及意義17-18
• 第二章 硫酸鎳對體外培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成的影響18-30
• 1 材料與方法18-21
• 1.1 材料18-19
• 1.2 方法19-21
• 1.3 統(tǒng)計學處理21
• 2 結(jié)果21-26
• 2.1 大鼠睪丸間質(zhì)細胞的差速貼壁培養(yǎng)純化及鑒定21-23
• 2.2 大鼠睪丸間質(zhì)細胞的形態(tài)學特征23
• 2.3 硫酸鎳對大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮分泌的影響23-24
• 2.4 硫酸鎳對體外培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成酶基因表達的影響24-26
• 3 討論26-30
• 第三章 硫酸鎳對體外培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞氧化應激的影響30-37
• 1 材料與方法30-31
• 1.1 材料30
• 1.2 方法30-31
• 1.3 統(tǒng)計學處理31
• 2 結(jié)果31-33
• 2.1 硫酸鎳對大鼠睪丸間質(zhì)細胞ROS水平的影響31-32
• 2.2 硫酸鎳對大鼠睪丸間質(zhì)細胞Anti-HO的影響32
• 2.3 硫酸鎳對大鼠睪丸間質(zhì)細胞8-OHdG含量的影響32-33
• 3 討論33-37
• 參考文獻37-43
• 在學期間研究成果43-44
• 附錄44-45
• 致謝45

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 鄭菁;張志剛;孫應彪;蘇莉;夏胡;李成云;張瑞;李晉;;硫酸鎳對體外培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞超微結(jié)構(gòu)的影響[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2012年01期

2 LIU Qing;GU Jian Hong;YUAN Yan;LIU Xue Zhong;WANG Ya Jun;WANG Han Dong;LIU Zong Ping;WANG Zong Yuan;BIAN Jian Chun;;Effect of Cadmium on Rat Leydig Cell Testosterone Production and DNA Integrity in vitro[J];Biomedical and Environmental Sciences;2013年09期

3 關(guān)聰會;張志剛;孫應彪;孔德萬;李成云;趙秋燕;;硫酸鎳對體外培養(yǎng)大鼠睪丸間質(zhì)細胞毒作用的實驗研究[J];毒理學雜志;2011年04期

4 張志剛;孫應彪;關(guān)聰會;李成云;張瑞;孔德萬;趙秋燕;;硫酸鎳誘導體外大鼠睪丸間質(zhì)細胞凋亡及其對c-kit和caspase-3基因表達的影響[J];毒理學雜志;2011年05期

  本文關(guān)鍵詞：硫酸鎳對體外培養(yǎng)的大鼠睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成酶和氧化應激的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：333063