本文關(guān)鍵詞：microRNA在氯乙烯致大鼠DNA損傷和細(xì)胞周期改變中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:通過檢測亞慢性染毒氯乙烯(VCM)對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞細(xì)胞周期時(shí)相分布的影響和大鼠外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷情況,探討氯乙烯致癌過程中G1/S期監(jiān)測點(diǎn)功能變化以及致DNA損傷的劑量-反應(yīng)關(guān)系;檢測相關(guān)大鼠肝臟mi RNAs表達(dá)水平改變,探討mi RNAs在VCM致細(xì)胞周期改變中的作用,從分子水平探討氯乙烯致肝臟腫瘤的發(fā)病機(jī)制。方法:選用96只健康雄性SD大鼠,按體重隨機(jī)分成4組,每組24只,分別為對(duì)照組、VCM低劑量(5mg/kg)、中劑量(25mg/kg)和高劑量(125mg/kg)三個(gè)劑量組。采用腹腔注射染毒,隔日染毒,每周3次。在染毒6、8、12周后分別隨機(jī)處死8只大鼠。1.VCM致肝細(xì)胞遺傳毒性的研究:應(yīng)用彗星實(shí)驗(yàn)研究外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷水平;應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)研究肝細(xì)胞細(xì)胞周期的改變。2.肝細(xì)胞mi R-199a-3p、mi R-221、mi R-222的表達(dá)水平:處死大鼠取其肝臟,提取total RNA并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測肝臟組織中上述mi RNA的表達(dá)量,采用2-△△Ct法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。結(jié)果:1.大鼠一般情況、體重變化及肝體比大鼠在染毒期間一般情況和進(jìn)食均未見異常,各個(gè)組均未出現(xiàn)明顯中毒癥狀。各組動(dòng)物體重均呈正常的增長趨勢,且差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。8周和12周染毒結(jié)束時(shí),各染毒組大鼠的肝體比均低于對(duì)照組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.彗星實(shí)驗(yàn)研究外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷水平VCM染毒8周后,高劑量組(125mg/kg)淋巴細(xì)胞尾部DNA含量百分比明顯高于對(duì)照組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。VCM染毒12周后,與對(duì)照組相比,Olive尾距和尾長各劑量組都明顯增高(P0.05);中劑量組(25 mg/kg)尾部DNA含量百分比低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠肝臟細(xì)胞周期分布變化VCM染毒6周后,各染毒組大鼠肝細(xì)胞G1期百分比隨劑量的增加而呈上升趨勢,其中高劑量組(125mg/kg)的G1期分布百分比明顯高于對(duì)照組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。VCM染毒8周后,低劑量組(5mg/kg)G1期分布百分比低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);低劑量組S期分布百分比高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。VCM染毒12周后,S期分布百分比隨劑量的升高而呈上升趨勢,高劑量組(125mg/kg)S期分布百分比明顯高于對(duì)照組,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測大鼠肝細(xì)胞mi R-199a-3p、mi R-221、mi R-222的表達(dá)情況VCM染毒6周后,大鼠肝臟組織mi RNA-221和mi RNA-222相對(duì)表達(dá)水平都隨著VCM染毒劑量的增加而呈下降的趨勢,高劑量組mi RNA-221和mi RNA-222相對(duì)表達(dá)量均明顯低于對(duì)照組(P0.05);與對(duì)照組相比,中劑量和高劑量mi RNA-199a-3p相對(duì)表達(dá)量均降低(P0.05)。VCM染毒8周后,低劑量組mi RNA-221和mi RNA-222相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);各個(gè)劑量組mi RNA-199a-3p相對(duì)表達(dá)量隨著VCM染毒劑量的增加而呈現(xiàn)上升的趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。VCM染毒12周后,大鼠肝臟mi RNA-221相對(duì)表達(dá)量隨著VCM染毒劑量的增加而呈上升的趨勢,低劑量組mi RNA-221相對(duì)表達(dá)量低于對(duì)照相(P0.05);mi RNA-222相對(duì)表達(dá)量隨著VCM染毒劑量的增加而呈上升的趨勢,但與對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);mi RNA-199a-3p相對(duì)表達(dá)量隨著VCM染毒劑量的增加而呈上升的趨勢,低劑量組和中劑量組的mi RNA-199a-3p相對(duì)表達(dá)量均低于對(duì)照組(P0.05)。5.大鼠肝臟細(xì)胞周期與mi R-199a-3p、mi R-221、mi R-222表達(dá)水平的相關(guān)分析VCM染毒6周后,大鼠肝臟細(xì)胞mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表達(dá)水平與G1期分布百分比呈負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為0.6、0.44、0.51,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。VCM染毒8周后,大鼠肝臟細(xì)胞mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表達(dá)水平與G1期和S期分布百分比均未呈現(xiàn)相關(guān)關(guān)系(P0.05)。VCM染毒12周后,大鼠肝臟細(xì)胞mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表達(dá)水平與G1期分布百分比未呈現(xiàn)相關(guān)關(guān)系(P0.05)。大鼠肝臟細(xì)胞mi RNA-221的表達(dá)水平與S期分布百分比呈現(xiàn)相關(guān)關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.41,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表達(dá)水平與S期分布百分比未呈現(xiàn)相關(guān)關(guān)系(P0.05)。結(jié)論:1.在本實(shí)驗(yàn)條件下,VCM染毒可導(dǎo)致大鼠外周血淋巴細(xì)胞DNA損傷。2.VCM染毒可能影響大鼠肝臟細(xì)胞G1/S關(guān)卡功能,早期發(fā)生G1期阻滯現(xiàn)象,中、后期發(fā)生G1期阻滯現(xiàn)象消失,并出現(xiàn)S期阻滯現(xiàn)象。3.mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的低表達(dá)與VCM染毒前期致大鼠肝細(xì)胞周期G1阻滯有關(guān);而后期mi RNA-221表達(dá)上調(diào)可能與VCM致大鼠肝臟細(xì)胞后期G1期阻滯消失而S期阻滯出現(xiàn)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：氯乙烯 DNA損傷 細(xì)胞周期 G1/S關(guān)卡 microRNA表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 氯乙烯對(duì)大鼠DNA損傷情況及肝臟細(xì)胞周期的影響15-30
• 1 材料與方法15-20
• 1.1 主要儀器設(shè)備及試劑15-16
• 1.2 試劑配備16-17
• 1.3 動(dòng)物選擇及飼養(yǎng)17
• 1.4 動(dòng)物分組及染毒17
• 1.5 動(dòng)物標(biāo)本采集17
• 1.6 彗星試驗(yàn)17-18
• 1.7 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期18-19
• 1.8 統(tǒng)計(jì)分析19-20
• 2 結(jié)果20-27
• 2.1 大鼠的一般情況及體重變化20-21
• 2.2 VCM對(duì)大鼠外周淋巴血DNA損傷情況21-23
• 2.3 大鼠的細(xì)胞周期分布變化23-27
• 3 討論27-29
• 4 結(jié)論29-30
• 第二部分 氯乙烯對(duì)大鼠肝細(xì)胞microRNA表達(dá)的影響30-46
• 1 材料與方法30-36
• 1.1 主要儀器和試劑30-31
• 1.2 主要試劑的配備31-32
• 1.3 熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)32-35
• 1.4 統(tǒng)計(jì)分析35-36
• 2 結(jié)果36-42
• 2.1 RNA質(zhì)量檢測結(jié)果36
• 2.2 大鼠肝細(xì)胞G1/S關(guān)卡相關(guān)miRNA熒光定量PCR擴(kuò)增曲線和溶解曲線36-37
• 2.3 肝臟細(xì)胞周期G1/S關(guān)卡相關(guān)基因miRNA的表達(dá)情況及相關(guān)系數(shù)37-42
• 3 討論42-45
• 4 結(jié)論45-46
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 綜述49-55
• 參考文獻(xiàn)53-55
• 致謝55-56
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果56-57
• 個(gè)人簡介57

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 劉琴;付漢江;鄭曉飛;;microRNA與細(xì)胞周期調(diào)控[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2008年05期

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  本文關(guān)鍵詞：microRNA在氯乙烯致大鼠DNA損傷和細(xì)胞周期改變中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：332747