抗生素因具有良好的抑菌、殺菌作用被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)領(lǐng)域。然而,被使用的抗生素高達(dá)75%被人體或動(dòng)物排出體外進(jìn)入環(huán)境,短時(shí)期內(nèi)環(huán)境中抗生素難以降解導(dǎo)致大量的抗生素殘留,使環(huán)境中的很多微生物產(chǎn)生耐藥性,甚至引發(fā)了超級(jí)細(xì)菌的產(chǎn)生。除抗生素外,一些金屬抗菌劑也被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域,相較于抗生素環(huán)境中的金屬更難降解,不斷地累積致使金屬耐藥菌株產(chǎn)生。為了增強(qiáng)抑菌效果,醫(yī)藥或農(nóng)業(yè)領(lǐng)域會(huì)聯(lián)合應(yīng)用抗生素與金屬藥劑,可能催生抗生素與金屬聯(lián)合抗性細(xì)菌的出現(xiàn)。城市污水河道受人為活動(dòng)的影響,可能作為抗性細(xì)菌的儲(chǔ)庫(kù),給人類健康帶來(lái)巨大威脅,研究河道中指示細(xì)菌的抗性分布情況,對(duì)于評(píng)估水環(huán)境受抗性細(xì)菌污染情況及潛在傳播風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。本研究以中國(guó)寒區(qū)城市污水河道污泥為研究對(duì)象,首先解析腸桿菌科細(xì)菌組成,然后以腸桿菌科細(xì)菌的代表菌種大腸桿菌（Escherichia coli）為指示菌,研究了 17種抗生素和4種金屬的耐藥情況,并檢測(cè)了相應(yīng)的19種抗性相關(guān)基因及整合酶基因。研究結(jié)果如下:（1）在城市河道淤泥樣品中,共分離出455株腸桿菌,鑒定結(jié)果顯示包括Escherichia、Citrobacter... 

【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１采樣點(diǎn)位置圖??２．２．２實(shí)驗(yàn)藥品與試劑???—?藥品名稱?來(lái)源??蛋白胨?北京奧星生物技術(shù)有限責(zé)任公司??

育樹(shù)分析??取在０的片段處顯色的ＰＣＲ產(chǎn)物，郵寄至哈爾濱擎科生物公司進(jìn)行測(cè)序，待序列??返回后進(jìn)行Ｇｅｎｂａｎｋ數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)。利用Ｍｅｇａ?６．０軟件對(duì)所獲得的序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。??２．３結(jié)果與分析??２．３．１腸桿菌科細(xì)菌的分離結(jié)果??２０１８年６月，利用紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂（ＶＲＢＧ）從哈爾濱市馬家溝河４個(gè)樣點(diǎn)屮??共分離出４５５株腸桿菌，分別是Ｓ１?１３８株，Ｓ２?１４７株，Ｓ３?９２株，Ｓ４?７８株。具體實(shí)驗(yàn)??結(jié)果如下：??河道污泥經(jīng)稀釋，在紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂上生長(zhǎng)情況如圖２－２所示，可發(fā)現(xiàn)菌落呈??現(xiàn)出深紫紅色，多分布于培養(yǎng)基表面和培養(yǎng)基中層，腸桿菌的微好氧和厭氧生活習(xí)性決??定了其在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)分布情況。??圖２－２紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂對(duì)腸桿菌的分離結(jié)果。ａ：?稀釋液：ｂ：?１（＾稀釋液。??挑取上述平板上的深紫紅色菌落，作劃線純化，獲得純化Ｕ的菌落。閣２－３顯示的??－１１．??

?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???是分離的代表性菌落，將劃線分離后的腸桿菌進(jìn)行液體培養(yǎng)，并用甘油冷凍法存于－??８０?°Ｃ冰箱待用。??圖２－３腸桿菌平板劃線純化結(jié)果??２．３．２?￡．?ｃｏ／／篩選結(jié)果??利用ＴＢＸ培養(yǎng)基顯色、吲哚試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)從４５５株腸桿菌共篩選出１１０株￡??亡必，在四個(gè)樣點(diǎn)的分布為３１２９株，８２?３０株，８３〗７株，５４?３４株。??２．３．２．１?ＴＢＸ培養(yǎng)基顯色??挑�。玻玻鄙系陌咨溆冢颍幔囵B(yǎng)基上進(jìn)行劃線處理，生長(zhǎng)情況如圖２－４所示，??經(jīng)觀察，可發(fā)現(xiàn)圖２－４－ａ上菌落呈藍(lán)色，圖２－４－ｂ上菌落呈白色，￡．ｃｏ／／中的ｐ－葡萄糖苷??酶（Ｐ－葡萄糖苷酶基因編碼）可分解培養(yǎng)基中的Ｘ－葡萄糖苷酸（Ｘ－ｇｌｕｃ）產(chǎn)生深藍(lán)色物??質(zhì)５－溴－４－靛藍(lán)，可判斷藍(lán)色菌落可能為尺ｃｏ／／，需進(jìn)一步的吲哚試驗(yàn)和氧化酶試驗(yàn)驗(yàn)證。??ｉｐ?ｎ??ｗ?Ｉ??，．￡／?，ｒｉ??圖２－４?ＴＢＸ培養(yǎng)基顯色結(jié)果??２＿３．２．２吲哚試驗(yàn)??挑�。玻玻玻鄙系乃{(lán)色菌落于含有蛋白胨水培養(yǎng)液的螺紋管中，３７?°Ｃ培養(yǎng)２４?ｈ后，??進(jìn)行吲哚試驗(yàn)驗(yàn)證，結(jié)果如圖２－５所示，可發(fā)現(xiàn)菌液上的乙醚層呈現(xiàn)出玫瑰紅色，Ｅ??ｃｏ／ｆ所產(chǎn)生的色氨酸酶分解蛋白胨水溶液中的色氨酸產(chǎn)生吲哚和丙酮酸，吲哚與乙醚層??－１２－??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]松花江流域哈爾濱段典型抗生素的歸趨及風(fēng)險(xiǎn)政價(jià)[D]. 王偉華.東北林業(yè)大學(xué) 2018
[2]龜裂鏈霉菌土霉素途徑特異激活子OtcR功能及應(yīng)用研究[D]. 尹守亮.中國(guó)礦業(yè)大學(xué)(北京) 2017
[3]碳青霉烯不敏感大腸桿菌分子特征及NDM-1適應(yīng)性代價(jià)研究[D]. 徐國(guó)鋒.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015

碩士論文
[1]城市水環(huán)境中抗生素及抗性基因污染特征研究[D]. 孫王茹.河北工程大學(xué) 2019
[2]環(huán)境水樣中四環(huán)素的電化學(xué)分析方法研究[D]. 孫雪梅.成都理工大學(xué) 2017
[3]城市污水中腸桿菌的抗生素耐藥性和多種耐藥基因的檢測(cè)[D]. 張博.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



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