本文關(guān)鍵詞：三氯化鋁致成骨細(xì)胞凋亡的Fas-線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的SD乳鼠顱骨成骨細(xì)胞(OB)第3代為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,依據(jù)三氯化鋁(AlCl3)對(duì)OB的半數(shù)抑制濃度(IC50),設(shè)立4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,即空白對(duì)照組(CG)、低劑量染鋁組(LG,1/20IC50)、中劑量染鋁組(MG,1/10 IC50)、高劑量染鋁組(HG,1/5 IC50);向各組培養(yǎng)液中加入三氯化鋁(AlCl3·6H2O)溶液,其終濃度分別為0 mg/mL、0.06 mg/mL、0.12 mg/mL、0.24 mg/mL,培養(yǎng)24h。應(yīng)用AO/EB雙重?zé)晒馊旧z測(cè)OB凋亡形態(tài),并統(tǒng)計(jì)凋亡率;qRT-PCR法檢測(cè)OB Fas、FasL、FADD、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表達(dá);Western blot檢測(cè)OB Fas、FasL、FADD、CytC、Bid和tBid蛋白表達(dá);Caspase活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)OB Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性。旨在探討三氯化鋁致OB凋亡的Fas-線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:(1)染鋁組OB均可見細(xì)胞核呈現(xiàn)點(diǎn)狀亮綠色的早期凋亡細(xì)胞,細(xì)胞核染為亮橘紅色的晚期凋亡細(xì)胞,與細(xì)胞核為紅色的壞死細(xì)胞;隨染鋁劑量的增加,OB凋亡數(shù)目增多,染鋁組OB凋亡率顯著高于CG(P0.01),表明AlCl3可誘導(dǎo)OB凋亡。(2)染鋁組OB Fas、FasL、FADD mRNA及蛋白表達(dá)量,Caspase-8 mRNA表達(dá)量及Caspase-8活性均顯著高于CG(P0.05;P0.01),說明Fas/FasL信號(hào)通路參與了AlCl3誘導(dǎo)的OB凋亡。(3)染鋁組OB胞漿中CytC蛋白表達(dá)量、Caspase-9 mRNA表達(dá)量及Caspase-9活性均顯著高于CG(P0.01),說明線粒體信號(hào)通路參與了AlCl3誘導(dǎo)的OB凋亡。(4)染鋁組OB Bid mRNA及蛋白表達(dá)水平、tBid的蛋白表達(dá)水平、Caspase-3 mRNA表達(dá)量及活性均極顯著高于CG(P0.01),說明AlCl3通過Fas和線粒體信號(hào)通路激活Caspase3誘導(dǎo)OB凋亡,Fas凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能通過活化Bid作用于線粒體,導(dǎo)致線粒體凋亡信號(hào)激活。
【關(guān)鍵詞】：三氯化鋁 大鼠 成骨細(xì)胞 Fas/FasL信號(hào)通路 線粒體信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-10
• 1 前言10-15
• 1.1 機(jī)體中鋁的來源、代謝及生物學(xué)毒性10-11
• 1.2 鋁與代謝性骨病11
• 1.3 鋁與成骨細(xì)胞11-12
• 1.4 鋁與細(xì)胞凋亡12-14
• 1.4.1 鋁與Fas信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路12-13
• 1.4.2 鋁與線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路13-14
• 1.4.3 Fas-線粒體雙信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在細(xì)胞凋亡中的作用14
• 1.5 研究目的和意義14-15
• 2 材料與方法15-21
• 2.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑15-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器15
• 2.1.2 試劑15-16
• 2.2 大鼠顱骨OB的培養(yǎng)及處理16-17
• 2.2.1 OB的提取16-17
• 2.2.2 OB的培養(yǎng)及處理17
• 2.3 檢測(cè)項(xiàng)目與方法17-20
• 2.3.1 OB凋亡形態(tài)觀察及凋亡指數(shù)觀測(cè)17-18
• 2.3.2 OB Fas、Fas L、FADD、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、BidmRNA檢測(cè)18-20
• 2.3.3 OB Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 活性的檢測(cè)20
• 2.3.4 OB Fas、Fas L、FADD、Bid、tBid、CytC蛋白檢測(cè)20
• 2.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析及統(tǒng)計(jì)20-21
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果21-27
• 3.1 OB AO/EB雙熒光染色結(jié)果及凋亡率21-22
• 3.2 AlCl_3對(duì)OB Fas、Fas L、FADD mRNA表達(dá)的影響22
• 3.3 AlCl_3對(duì)OB Fas、Fas L、FADD蛋白表達(dá)的影響22-23
• 3.4 AlCl_3對(duì)OB Bid mRNA、Bid、tBid蛋白表達(dá)的影響23-25
• 3.4.1 AlCl_3對(duì)OB Bid mRNA表達(dá)的影響23-24
• 3.4.2 AlCl_3對(duì)Bid、t Bid蛋白表達(dá)的影響24-25
• 3.5 AlCl_3對(duì)OB胞漿中Cyt C蛋白表達(dá)的影響25
• 3.6 AlCl_3對(duì)OB Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表達(dá)的影響25-26
• 3.7 AlCl_3對(duì)OB Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 活性的影響26-27
• 4 討論27-31
• 4.1 AlCl_3對(duì)OB凋亡形態(tài)的影響27-28
• 4.2 AlCl_3對(duì)OB Fas信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響28-29
• 4.3 AlCl_3對(duì)OB線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響29
• 4.4 AlCl_3對(duì)OB Fas-線粒體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響29-31
• 4.4.1 AlCl_3對(duì)Bid表達(dá)的影響29-30
• 4.4.2 AlCl_3對(duì)Caspase-3 mRNA表達(dá)及活性的影響30-31
• 5 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻(xiàn)33-40
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文40

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：308858