【摘要】：環(huán)境內(nèi)分泌干擾物是一類(lèi)存在于環(huán)境中的化學(xué)物質(zhì),可通過(guò)多種途徑進(jìn)入機(jī)體,直接或間接損害人類(lèi)健康,因此成為當(dāng)今環(huán)境衛(wèi)生領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。DEHP作為常見(jiàn)的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物,廣泛應(yīng)用于食品包裝材料、容器、醫(yī)療用品及兒童玩具等方面,可以導(dǎo)致不孕不育、性早熟、子宮出血等疾病發(fā)生,已引起社會(huì)和學(xué)者的廣泛關(guān)注。目的:本研究從組織形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方面,系統(tǒng)地探討DEHP暴露對(duì)青春期雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸相關(guān)激素分泌水平,以及對(duì)相關(guān)基因和蛋白表達(dá)情況的影響,闡明DEHP暴露對(duì)青春期雌性大鼠的生殖內(nèi)分泌干擾作用及其機(jī)制,揭示DEHP的雌性生殖毒性,為明確DEHP對(duì)人類(lèi)生殖系統(tǒng)的潛在危害提供科學(xué)依據(jù)。方法:選擇健康清潔級(jí)雌性Wistar大鼠48只為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,21日齡,體重50~60g。隨機(jī)分為4組,即對(duì)照組、低劑量組(250 mg/kg/d DEHP,1/120LD50)、中劑量組(500 mg/kg/d DEHP,1/60LD50)、高劑量組(1000 mg/kg/d DEHP,1/30LD50),每組12只。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,于每天清晨灌胃染毒1次,連續(xù)染毒4周。每日稱重,記錄飲食、飲水量,觀察陰道開(kāi)口情況并記錄陰道開(kāi)口時(shí)間。于動(dòng)情間期處死大鼠,采血,離心后收集血清;取卵巢和子宮組織并稱重,計(jì)算各臟器系數(shù);HE染色法觀察青春期雌性大鼠下丘腦、垂體、卵巢和子宮的病理組織變化;ELISA法檢測(cè)大鼠下丘腦Gn RH激素分泌水平;放射免疫分析法檢測(cè)大鼠血清中FSH、LH、E2、P和T分泌水平;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)下丘腦-垂體-卵巢軸Gn RH、Kiss-1、GPR54等基因m RNA的表達(dá)情況;免疫組織化學(xué)染色法觀察下丘腦-垂體-卵巢軸Gn RH、Kiss-1、GPR54等蛋白的定位情況;Western blot法測(cè)定下丘腦-垂體-卵巢軸相關(guān)蛋白的定量表達(dá)情況。結(jié)果:1.DEHP對(duì)青春期雌性大鼠的一般毒性及生殖毒性(1)DEHP染毒組大鼠活動(dòng)減少,精神不振,行動(dòng)遲緩,皮毛疏松無(wú)光澤,有脫毛現(xiàn)象,以高劑量組最為明顯。(2)與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠攝食量和體重顯著增加(P0.05);而飲水量顯著減少(P0.05)。(3)與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠陰道開(kāi)口時(shí)間顯著提前(P0.05);染毒組大鼠動(dòng)情間期和動(dòng)情周期的持續(xù)時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P0.05)。(4)DEHP染毒組部分大鼠卵巢充血、腫脹,體積增大;子宮體積增大,偶見(jiàn)水腫。(5)與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠卵巢臟器系數(shù)顯著升高(P0.05)。2.青春期雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸組織形態(tài)觀察(1)DEHP染毒組與對(duì)照組青春期雌性大鼠下丘腦神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞以及神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)正常,神經(jīng)元胞體呈多角形,胞核大而圓,居中,核仁大、圓、深染,胞質(zhì)中充滿深紫色小塊或顆粒狀尼氏體;神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的胞體和胞核均較大;少突膠質(zhì)細(xì)胞的胞體較小,呈圓或卵圓形。(2)對(duì)照組和DEHP染毒組大鼠垂體遠(yuǎn)側(cè)部均可見(jiàn)嗜酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞、嫌色細(xì)胞和毛細(xì)血管。(3)DEHP染毒組大鼠卵巢顆粒細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松、數(shù)量減少、輪廓模糊不清晰,細(xì)胞核大小不等;部分卵巢顆粒細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、核碎裂等現(xiàn)象。(4)DEHP染毒組大鼠子宮內(nèi)膜出現(xiàn)胞核假?gòu)?fù)層、上皮增生以及內(nèi)皮纖維化;腔上皮細(xì)胞疏松、不整齊,細(xì)胞核大小不一;固有層腺體萎縮、數(shù)目減少。3.青春期雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸激素水平測(cè)定(1)DEHP染毒組大鼠下丘腦Gn RH激素水平顯著高于對(duì)照組大鼠(P0.05),且隨著染毒劑量增大而增高,存在劑量-反應(yīng)關(guān)系。(2)與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠血清FSH、LH、T激素水平顯著降低(P0.05),P激素水平顯著升高(P0.05),E2激素水平無(wú)顯著差異(P0.05)。4.青春期雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸相關(guān)基因m RNA表達(dá)情況(1)與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠下丘腦Gn RH和GPR54 m RNA表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P0.05),Kiss-1 m RNA表達(dá)水平顯著降低(P0.05)。(2)低劑量組大鼠垂體Gn RHR m RNA表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P0.05),高劑量組大鼠垂體Gn RHR m RNA表達(dá)水平顯著高于其他各組(P0.05);與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠垂體FSH及LH m RNA表達(dá)水平均顯著降低(P0.05)。(3)與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠卵巢FSHR、LHR m RNA表達(dá)水平顯著降低(P0.05),而ERαm RNA表達(dá)水平則顯著升高(P0.05)。(4)與對(duì)照組比較,DEHP染毒組大鼠子宮Gn RHR m RNA及ERαm RNA表達(dá)水平均顯著升高(P0.05)。5.青春期雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸相關(guān)蛋白表達(dá)情況(1)DEHP染毒組大鼠下丘腦組織中Gn RH、Kiss-1、GPR54蛋白表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組(P0.05)。(2)低劑量組大鼠垂體Gn RHR蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著升高(P0.05),中劑量組大鼠垂體Gn RHR蛋白表達(dá)水平與低劑量組相比顯著下降(P0.05),高劑量組大鼠垂體Gn RHR蛋白表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(P0.05);各染毒組大鼠垂體FSH、LH蛋白的表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P0.05)。(3)與對(duì)照組相比,DEHP染毒組大鼠卵巢FSHR、ERα蛋白的表達(dá)水平顯著下降(P0.05);各組大鼠卵巢LHR蛋白的表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)各組大鼠子宮Gn RHR蛋白的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低、中劑量組蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著下降(P0.05),高劑量組與其他各組相比顯著升高(P0.05)。各組大鼠子宮ERα蛋白的表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與對(duì)照組和低劑量組相比,中劑量組蛋白表達(dá)水平顯著下降(P0.05);高劑量組與其他各組相比顯著升高(P0.05)。結(jié)論:1.DEHP暴露可使青春期雌性大鼠攝食量增加,體重增加,陰道開(kāi)口時(shí)間縮短,動(dòng)情周期延長(zhǎng)。2.DEHP暴露可導(dǎo)致青春期雌性大鼠卵巢臟器系數(shù)增加,卵巢充血、腫脹,體積增大,卵巢顆粒細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的損傷現(xiàn)象;DEHP可導(dǎo)致青春期雌性大鼠子宮體積增大、水腫,子宮內(nèi)膜出現(xiàn)不同程度的損傷現(xiàn)象。提示卵巢和子宮可能是DEHP毒性作用的靶器官。3.DEHP暴露可使青春期雌性大鼠下丘腦Gn RH激素水平升高,且隨著染毒劑量的增大而增高,存在劑量-反應(yīng)關(guān)系。還可導(dǎo)致FSH、LH、T激素水平降低,P激素水平升高。提示DEHP可能對(duì)青春期雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸具有內(nèi)分泌干擾作用。4.DEHP暴露可以影響青春期雌性大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸Gn RH、Kiss-1、GPR54、Gn RHR、FSH、LH、FSHR、LHR及ERαm RNA和蛋白的表達(dá)。提示DEHP可能是通過(guò)影響這些基因的表達(dá)水平干擾下丘腦-垂體-卵巢軸的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用,從而影響性腺的發(fā)育和生殖功能。5.DEHP暴露可導(dǎo)致青春期雌性大鼠子宮Gn RHR m RNA和蛋白表達(dá)水平增加。提示DEHP可能是通過(guò)影響子宮Gn RHR的表達(dá)而影響其生殖功能。綜上,DEHP對(duì)青春期雌性大鼠具有生殖毒性,可能通過(guò)干擾下丘腦-垂體-卵巢軸的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用,影響性激素的合成和分泌,損傷雌性動(dòng)物的性腺和生殖內(nèi)分泌功能,產(chǎn)生雌性生殖毒性。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R114

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋曉峰,魏光輝;醫(yī)用塑料增塑劑DEHP安全性研究及對(duì)策[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊(cè));2005年06期

2 汪再文;;美國(guó)研究小組調(diào)查DEHP的健康隱患[J];中國(guó)包裝工業(yè);2005年12期

3 劉曦;于晶晶;王紅;劉嘉馨;;高效液相色譜法測(cè)定一次性使用輸液器中DEHP溶出量[J];中國(guó)醫(yī)療器械信息;2012年06期

4 柯翔鴻;王黎明;李艷;鮑利峰;婁小華;楊光濤;吳凱;袁均林;丁書(shū)茂;楊旭;;DEHP對(duì)小鼠腦細(xì)胞DNA的影響及組織器官氧化損傷[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2007年06期

5 王麗;甘劭安;姜樸;朱新春;鄭丹;陳曦;張榮;陶勇;;塑料拆解地區(qū)水環(huán)境中DEHP檢測(cè)[J];中國(guó)公共衛(wèi)生;2009年11期

6 謝沁珊;王杉杉;蔡鳳云;艾燕;楊旭;;塑料增塑劑DEHP環(huán)境污染水平、人體負(fù)荷及生物毒性的初步研究[J];公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué);2010年05期

7 陳琳;錢(qián)青;張U，

本文編號(hào)：2382116