本文關(guān)鍵詞：我國(guó)中部及南部部分地區(qū)中華按蚊對(duì)溴氰菊酯殺蟲(chóng)劑抗性機(jī)制的初步研究

  更多相關(guān)文章： 中華按蚊 溴氰菊酯抗性 抗藥性生測(cè) Kdr突變 表皮蛋白基因

【摘要】：目的了解目前云南省、江蘇省和河南省中華按蚊對(duì)溴氰菊酯抗藥性的基本情況,調(diào)查鈉離子通道基因(Kdr基因)突變頻率。探討藥膜接觸時(shí)間和受試樣本量對(duì)WHO抗性生測(cè)結(jié)果的影響。初步分析表皮蛋白基因(insect cuticle proteins genes, ICPG)與中華按蚊抗藥性之間的關(guān)系,探討其表達(dá)量在蚊不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的變化規(guī)律。方法(1)選擇云南省盈江縣、江蘇省睢寧縣及河南省開(kāi)封縣為調(diào)查點(diǎn),進(jìn)行中華按蚊的現(xiàn)場(chǎng)采集及飼養(yǎng)工作,通過(guò)抗藥性生物測(cè)定收集得到足夠的現(xiàn)場(chǎng)抗性蚊和敏感蚊,以及1-2齡幼蟲(chóng)、3-4齡幼蟲(chóng)、蛹、0d成蚊、5d成蚊、10d成蚊、15d成蚊等不同發(fā)育階段的蚊樣。(2)現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行抗藥性生物測(cè)定。包括按世界衛(wèi)生組織(WHO)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的中華按蚊群體抗藥性水平測(cè)定,受試樣本量一定時(shí)不同藥膜接觸時(shí)間下的抗藥性測(cè)定和藥膜接觸時(shí)間一定時(shí)不同受試樣本量下的抗藥性測(cè)定。用SPSS19.0對(duì)三個(gè)調(diào)查點(diǎn)的受試蚊蟲(chóng)生測(cè)校正死亡率進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。(3)應(yīng)用PCR對(duì)Kdr基因ⅡS6段進(jìn)行擴(kuò)增并測(cè)序,分別檢測(cè)存活蚊和死亡蚊的Kdr等位基因突變頻率,用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法比較。同時(shí)用卡方檢驗(yàn)比較三個(gè)調(diào)查點(diǎn)存活蚊Kdr等位基因突變頻率。(4)通過(guò)生物信息學(xué)分析篩選出與抗性有關(guān)的中華按蚊ICPG,用熒光定量PCR(RT-qPCR)測(cè)定其在各樣本中的表達(dá)量。采取相對(duì)定量的2-△△Ct計(jì)算法處理熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)�，F(xiàn)場(chǎng)抗性蚊、敏感蚊和實(shí)驗(yàn)室對(duì)照敏感蚊的ICPG表達(dá)量比較用Kruskal-wallis檢驗(yàn)。對(duì)不同發(fā)育階段蚊的ICPG表達(dá)量用方差分析比較,用GraphPad prism 5制作統(tǒng)計(jì)趨勢(shì)圖。結(jié)果(1)云南盈江縣、江蘇睢寧縣和河南開(kāi)封縣中華按蚊均為抗性水平(R),24 h校正死亡率分別為67.42%、54.33%和47.40%(χ2=12.240,P0.05)。三地區(qū)抗性蚊Kdr突變頻率分別為4.0%、96.0%和100%(χ2=31.26,P0.05)。在盈江縣和睢寧縣,存活蚊和死亡蚊之間Kdr突變頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.190,0.628,P均0.05)；但在開(kāi)封縣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異(χ2=75.81,P0.05)。(2)對(duì)WHO抗性生測(cè)方法的研究中發(fā)現(xiàn),受試樣本量一定時(shí),rKD隨著藥膜接觸時(shí)間增加而增大,于80 min時(shí)達(dá)到峰值,開(kāi)封縣為66.78%,盈江縣為71.30%,而后進(jìn)入平穩(wěn)期。藥膜接觸時(shí)間一定時(shí),受試樣本量越少,擊倒越遲。(3)熒光定量PCR結(jié)果表明,CPF3和CPLCG3在現(xiàn)場(chǎng)抗性蚊體內(nèi)的表達(dá)量顯著高于敏感蚊及實(shí)驗(yàn)室對(duì)照敏感蚊,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01), CPR30僅在抗性蚊體內(nèi)特異性表達(dá)。(4) ICPG在中華按蚊不同生長(zhǎng)發(fā)育階段(1-2齡、3-4齡、蛹、0 d、5d、10d、 15d)表達(dá)具有差異性。CPLCG3隨蚊齡的增加而增加,CPF3和CPF4在成蚊中特異性表達(dá),CPR78在蛹期特異性表達(dá)。結(jié)論(1)各地區(qū)調(diào)查點(diǎn)的中華按蚊仍為溴氰菊酯高抗性群體。不同地區(qū)中華按蚊抗性機(jī)制不同,Kdr突變?cè)诳剐援a(chǎn)生中發(fā)揮的作用也不同。(2)藥膜接觸時(shí)間和受試樣本量對(duì)中華按蚊抗藥性測(cè)定結(jié)果有影響。對(duì)抗性水平較高的蚊蟲(chóng),應(yīng)延長(zhǎng)藥膜接觸時(shí)間至80 min;如何減少接觸筒中受試蚊蟲(chóng)的數(shù)量而又能獲得其抗性水平,需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證及相應(yīng)數(shù)理統(tǒng)計(jì)模型的建立。(3)中華按蚊ICPG在現(xiàn)場(chǎng)抗性蚊和敏感蚊之間表達(dá)具有差異性,且隨著蚊齡的變化而變化。
【關(guān)鍵詞】：中華按蚊 溴氰菊酯抗性 抗藥性生測(cè) Kdr突變 表皮蛋白基因
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R184.31
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 引言9-14
• 參考文獻(xiàn)12-14
• 技術(shù)路線14-15
• 第一部分 中華按蚊對(duì)溴氰菊酯抗性水平檢測(cè)及Kdr突變頻率調(diào)查15-28
• 1 引言15-16
• 2 材料與方法16-21
• 3 結(jié)果21-24
• 4 討論24-26
• 參考文獻(xiàn)26-28
• 第二部分 藥膜接觸時(shí)間和受試樣本量對(duì)中華按蚊抗性測(cè)定結(jié)果的影響28-37
• 1 引言28
• 2 材料與方法28-30
• 3 結(jié)果30-33
• 4 討論33-35
• 參考文獻(xiàn)35-37
• 第三部分 抗性和敏感中華按蚊表皮蛋白相關(guān)分子表達(dá)量差異比較37-52
• 1 引言37-38
• 2 材料與方法38-45
• 3 結(jié)果45-48
• 4 討論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-52
• 第四部分 不同發(fā)育階段中華按蚊表皮蛋白相關(guān)分子表達(dá)量差異比較52-67
• 1 引言52-53
• 2 材料與方法53-59
• 3 結(jié)果59-64
• 4 討論64-66
• 參考文獻(xiàn)66-67
• 結(jié)語(yǔ)67-68
• 致謝68-69
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷69-70
• 附件70-78

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 譚偉龍;朱長(zhǎng)強(qiáng);艾樂(lè)樂(lè);韓招久;姜志寬;趙彤言;;中華按蚊對(duì)菊酯類殺蟲(chóng)劑的抗性及kdr突變[J];中華衛(wèi)生殺蟲(chóng)藥械;2015年04期

2 方福瑾;王衛(wèi)杰;沈波;朱昌亮;;幾丁質(zhì)合成酶1與蚊抗藥性相關(guān)研究[J];中華衛(wèi)生殺蟲(chóng)藥械;2014年03期

3 裴速建;張華勛;李凱杰;胡樂(lè)群;夏菁;尚曉鵬;;湖北省中華按蚊對(duì)溴氰菊酯的抗藥性監(jiān)測(cè)[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2014年01期

4 常雪蓮;薛玉芹;張安冬;朱國(guó)鼎;方強(qiáng);;安徽省沿淮地區(qū)中華按蚊溴氰菊酯抗性及代謝解毒酶活性kdr突變頻率調(diào)查[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2013年03期

5 徐鐵龍;鐘代斌;方強(qiáng);湯林華;周水森;鄭彬;;安徽淮南中華按蚊溴氰菊酯抗藥性和P450單加氧酶活性隨蚊齡變化的研究[J];中國(guó)血吸蟲(chóng)病防治雜志;2013年02期

6 付鳳洋;陳斌;鐘代斌;孟鳳霞;閆振天;何正波;閆桂云;;重慶市中華按蚊溴氰菊酯抗性與kdr基因突變的關(guān)系[J];寄生蟲(chóng)與醫(yī)學(xué)昆蟲(chóng)學(xué)報(bào);2013年01期

7 祁欣;張紅衛(wèi);徐鐵龍;湯林華;周水森;鄭彬;;河南省部分地區(qū)溴氰菊酯抗性中華按蚊代謝酶活性的調(diào)查研究[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2012年06期

8 馬素媛;王英;趙清;徐鐵龍;吳紅渠;艾國(guó)平;;Bti對(duì)三帶喙庫(kù)蚊的殺傷效果及溫度的影響[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2012年12期

9 武松;馬爾健;陸群;仰鳳桃;陳道俊;王波;翟金霞;余俊峰;常娜;季飛虎;洪結(jié)鳳;葉苗青;;合肥市3縣中華按蚊對(duì)溴氰菊酯抗性現(xiàn)狀的研究[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2012年03期

10 祁欣;崔晶;;云南及河南省部分地區(qū)中華按蚊對(duì)溴氰菊酯抗性及kdr突變頻率調(diào)查[J];中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志;2012年02期

，

本文編號(hào)：1067247