本文關(guān)鍵詞：穿膜肽聯(lián)合鹽霉素磷脂膠束靶向腫瘤干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： DSPE-PEG2000 膠束 肝癌干細(xì)胞 NRP-1受體

【摘要】：在腫瘤中不僅存在著普通腫瘤細(xì)胞,還存在著與腫瘤發(fā)生,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切的腫瘤干細(xì)胞,它是原始腫瘤細(xì)胞。因此,成功清除腫瘤干細(xì)胞對(duì)腫瘤治療起著重要作用。眾多癌癥中,肝癌是目前最常見(jiàn)惡性腫瘤之一,過(guò)去三十年中,在美國(guó)肝癌發(fā)病率增長(zhǎng)了90%。由于肝癌的擴(kuò)散迅速以及轉(zhuǎn)移率高,五年的肝癌復(fù)發(fā)率從40%上升到70%。近年來(lái)肝癌腫瘤干細(xì)胞的研究開(kāi)始引起人們的注意。眾多研究表明腫瘤干細(xì)胞可以比普通肝癌細(xì)胞更能抵御傳統(tǒng)化療方法。鹽霉素是一種離子載體抗生素,并有報(bào)道其可以清除多種腫瘤干細(xì)胞。在鹽霉素被廣泛認(rèn)為可以殺傷腫瘤干細(xì)胞的同時(shí),研究還發(fā)現(xiàn)其對(duì)肝癌和前列腺癌普通細(xì)胞具有很好的殺傷效果。因此,由于鹽霉素能同時(shí)殺傷肝癌細(xì)胞和干細(xì)胞,所以其在肝癌治療上具有很強(qiáng)的應(yīng)用前景[3-5]。本研究論文的研究?jī)?nèi)容如下：第一章,建立了可靠的SAL檢測(cè)方法,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SAL濃度在7.82～1000μg·mL-1范圍內(nèi)與樣品峰面積A呈良好相關(guān)性(r=0.999),直線(xiàn)回歸方程：A=940.43C+16584。高、中、低三個(gè)濃度日內(nèi)精密度和日間精密度RSD均小于5%,滿(mǎn)足體外檢測(cè)要求。第二章,通過(guò)偶聯(lián)法將-iRGD中巰基與DSPE-PEG2000-MAI中馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)生成DSPE-PEG2000-iRGD,通過(guò)MALDI-TOF-MS鑒定DSPE-PEG2000-iRGD的成功合成�？疾炝薉SPE-PEG2000-iRGD膠束的粒徑,zeta電位和形態(tài)結(jié)構(gòu),并優(yōu)化了膠束的制備條件。結(jié)果表明藥物與材料質(zhì)量比為1：10時(shí)包封率較好(96.64%),粒徑較小(13nm左右)。M-SAL-iRGD在pH=5.0和pH7.4的條件下,SAL均呈兩相釋放,在pH=5.0條件下釋放較快。第三章,以NRP-1高表達(dá)的HepG2細(xì)胞和HepG2肝癌干細(xì)胞為模型,以1,2-二油�；视�-甘油-3-磷酸氨基乙醇-氮-(羧基二乙酸熒光素)(CFPE)為熒光探針穿插在DSPE-PEG2000-iRGD膠束中,考察膠束的體外NRP-1受體靶向性。結(jié)果表明M-CFPE-iRGD膠束在HepG2細(xì)胞和HepG2肝癌干細(xì)胞攝取明顯強(qiáng)于未接穿膜肽的M-CFPE。即M-CFPE-iRGD可以很好的被細(xì)胞攝取的能力。另外,本章還評(píng)價(jià)了兩種膠束細(xì)胞中細(xì)胞毒性,和微球體形成率。結(jié)果表明空白膠束對(duì)肝癌細(xì)胞和肝癌干細(xì)胞均無(wú)毒性,而M-SAL-iRGD可增加對(duì)兩種細(xì)胞的毒性,且可抑制HepG2微球體的形成。第四章,建立了HepG2荷瘤裸鼠模型,制備出包載熒光探針DiR的DSPE-PEG2000-iRGD膠束,評(píng)價(jià)其在體內(nèi)分布和肝癌腫瘤靶向性。結(jié)果表明M-DiR-iRGD膠束主要分布在肝和腫瘤組織中,并在腫瘤組織中的聚集多于其它組織。說(shuō)明M-DiR-iRGD具有很好的腫瘤靶向與腫瘤滲透性。采用HPLC-MS分析了游離SAL、M-SAL膠束和M-SAL-iRGD膠束在SD大鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果表明兩種膠束均可延緩S(chǎng)AL在血漿中的消除,其中M-SAL-iR GD能更有效地延緩S(chǎng)AL從血循環(huán)中的清除,增長(zhǎng)其循環(huán)時(shí)間。建立HepG2荷瘤裸鼠模型,評(píng)價(jià)了游離SAL,M-SAL膠束和M-SAL-iRGD的體內(nèi)抗肝癌活性及體內(nèi)腫瘤微球體形成率。結(jié)果顯示M-SAL-iRGD組具有最強(qiáng)的腫瘤抑制能力,且能明顯降低體內(nèi)肝癌腫瘤微球體形成率。綜上所述,M-SAL-iRGD可以很好抑制肝癌及肝癌干細(xì)胞,具有較好的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：DSPE-PEG2000 膠束 肝癌干細(xì)胞 NRP-1受體
【學(xué)位授予單位】：福建中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略詞7-8
• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-15
• 第一章 SAL含量測(cè)定方法的建立15-20
• 1. 儀器與材料15
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法15-17
• 2.1 HPLC色譜條件15
• 2.2 特異性15-16
• 2.3 線(xiàn)性范圍16
• 2.4 提取回收率16-17
• 2.5 精密度17
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果17-18
• 3.1 特異性17
• 3.2 線(xiàn)性范圍17-18
• 3.3 提取回收率18
• 3.4 精密度18
• 4. 小結(jié)與討論18-20
• 第二章 膠束的制備及表征20-26
• 1. 儀器與材料20
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 2.1 M-SAL膠束的制備20-21
• 2.2 M-SAL-iRGD膠束的制備21
• 2.3 材料及膠束的表征21-22
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-25
• 2.1 不同材料與藥物比例對(duì)膠束粒徑,Zeta電位,包封率,載藥量的影響22
• 2.2 膠束的表征22-25
• 4. 小結(jié)與討論25-26
• 第三章 膠束的體外細(xì)胞學(xué)研究26-38
• 1. 儀器與材料26-27
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 2.1. 載CFPE膠束的制備27
• 2.2. 腫瘤細(xì)胞與腫瘤干細(xì)胞的培養(yǎng)27-28
• 2.3 NRP-1受體靶向性評(píng)價(jià)28
• 2.4 證明膠束的體外細(xì)胞結(jié)合活性性28-29
• 2.5 激光共聚焦證明膠束的體外細(xì)胞結(jié)合活性29
• 2.6. CCK-8法對(duì)載藥系統(tǒng)的體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)29-30
• 2.7 膠束體外抗肝癌干細(xì)胞活性30-31
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-37
• 3.1. HepG2腫瘤細(xì)胞與腫瘤干細(xì)胞表面NRP-1表達(dá)分析31-32
• 3.2. 激光共聚焦證明膠束的體外細(xì)胞結(jié)合活性32-33
• 3.3 CCK-8法對(duì)載藥系統(tǒng)的體外細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)33-36
• 3.4 膠束體外抗肝癌干細(xì)胞活性36-37
• 4. 小結(jié)與討論37-38
• 第四章 膠束的體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)38-45
• 1. 儀器和材料38
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法38-40
• 2.1. 血漿樣品預(yù)處理38
• 2.2. 鹽霉素HPLC-MS分析方法學(xué)的建立38-40
• 2.3 血藥濃度的測(cè)定40
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-43
• 3.1 SAL HPLC-MS定量分析方法學(xué)的建立40-42
• 3.2. 藥代動(dòng)力學(xué)42-43
• 4. 小結(jié)與討論43-45
• 第五章 膠束的體內(nèi)靶向性研究45-53
• 1. 儀器和材料45
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法45-47
• 2.1. DIR紫外-可見(jiàn)定量分析方法學(xué)的建立45-46
• 2.2. 活體成像觀(guān)察膠束的靶向性46-47
• 2.3 腫瘤冰凍切片觀(guān)察熒光膠束靶向性47
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果47-51
• 3.1 DIR紫外-可見(jiàn)定量方法學(xué)考察47-48
• 3.2. 活體成像觀(guān)察膠束的靶向性48-50
• 3.3.腫瘤冰凍切片觀(guān)察熒光膠束靶向性50-51
• 4. 小結(jié)與討論51-53
• 第六章 膠束的體內(nèi)抗腫瘤活性53-58
• 1. 儀器和材料53
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法53-54
• 2.1. 人肝癌腫瘤移植模型的建立53-54
• 2.2. 體內(nèi)抗肝癌干細(xì)胞活性評(píng)價(jià)54
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-56
• 3.1 體內(nèi)抗腫瘤評(píng)價(jià)54
• 3.2. 系統(tǒng)毒性評(píng)價(jià)54-55
• 3.3.體內(nèi)抗肝癌干細(xì)胞活性評(píng)價(jià)55-56
• 4. 小結(jié)與討論56-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-60
• 致謝60-61
• 文獻(xiàn)綜述61-66
• 參考文獻(xiàn)64-66
• 作者簡(jiǎn)歷66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 霍曉榮,劉鐵錚,王冉,柳偉榮;鹽霉素和莫能菌素殘留分析方法的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2005年07期

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本文編號(hào)：985466