本文關(guān)鍵詞：新型透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備及性能研究

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【摘要】：透明質(zhì)酸(hyaluronan,HA)是天然存在于人和動(dòng)物體內(nèi)的大分子粘多糖,在體外一般以鈉鹽(透明質(zhì)酸鈉,sodium hyaluronate,SH)形式存在,具有良好的粘彈性、生物相容性和保濕性,已廣泛應(yīng)用于化妝品、食品及眼科、骨科臨和床外科等醫(yī)藥領(lǐng)域,其作為組織填充工程材料的研究也已引起人們的興趣。然而,HA在生物體內(nèi)易降解,存留時(shí)間短,嚴(yán)重影響其應(yīng)用范圍的擴(kuò)展。傳統(tǒng)的方法是通過(guò)對(duì)其進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾得到衍生物來(lái)延長(zhǎng)其在生物體內(nèi)的存留時(shí)間和提高其機(jī)械性能。而修飾后的衍生物分子量增大,粘彈性增強(qiáng),不易注射,難以臨床應(yīng)用。同時(shí),目前所用的結(jié)構(gòu)修飾劑大都具有一定的毒性,給患者造成難以預(yù)料的傷害。本研究以醫(yī)藥領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的安全無(wú)毒的聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)和生物源組分京尼平為交聯(lián)劑制備交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉(cross-linked sodium hyaluronate,CSH)凝膠并探討其顆�；姆椒ê凸に�,凝膠的抗酶解性和生物安全性。單因素試驗(yàn)考察不同磷酸鹽緩沖溶液離子濃度、反應(yīng)時(shí)間及反應(yīng)溫度對(duì)聚乙二醇交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉(PEG-CSH)凝膠抗酶解性能的影響,然后通過(guò)正交試驗(yàn)篩選優(yōu)化試驗(yàn)方案。結(jié)果得到聚乙二醇交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的最佳制備條件為:磷酸鹽緩沖溶液離子濃度為0.1 mol·L-1,反應(yīng)時(shí)間為10 h,反應(yīng)溫度為60℃,此條件制備所得的交聯(lián)凝膠抗酶解率為88.57%;以交聯(lián)凝膠的溶脹度為指標(biāo),考察京尼平濃度、透明質(zhì)酸鈉分子量、反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度對(duì)京尼平交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的影響,經(jīng)過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果,得到京尼平交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠最佳制備條件:京尼平濃度為0.2%,透明質(zhì)酸鈉分子量為260萬(wàn)Da,反應(yīng)時(shí)間為48 h,反應(yīng)溫度為60℃,所得交聯(lián)凝膠溶脹度為6.53;對(duì)PEG交聯(lián)凝膠進(jìn)行制粒,篩選并優(yōu)化制粒工藝條件,采用改良咔唑法對(duì)所得凝膠的抗酶解性能進(jìn)行研究。得到顆粒化PEG-CSH凝膠的最佳制備工藝條件為:交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠用其體積6.5倍的95%乙醇醇沉,沉淀在50℃下干燥5 h,間歇瞬時(shí)粉碎后,分級(jí)顆粒,最后復(fù)溶得到不同粒徑的顆�；宦�(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠。所得的顆粒化交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠抗酶解率為80.53%。依據(jù)GB/T16886醫(yī)療器械生物學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)PEG-CSH凝膠、顆粒化交聯(lián)凝膠進(jìn)行動(dòng)物皮膚致敏試驗(yàn)和皮內(nèi)刺激試驗(yàn),初步評(píng)價(jià)新型交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的生物安全性。在小鼠皮膚表面涂抹新型交聯(lián)凝膠考察凝膠對(duì)動(dòng)物的致敏情況,表皮注射新型凝膠考察交聯(lián)凝膠對(duì)小鼠皮內(nèi)刺激情況。根據(jù)試驗(yàn)期間小鼠采食量和體重增量的變化評(píng)價(jià)涂抹或注射交聯(lián)凝膠對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)的影響,觀察小鼠局部、全身和行為反應(yīng),評(píng)價(jià)涂抹或注射交聯(lián)凝膠對(duì)其行為反應(yīng)的影響。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果為在小鼠皮內(nèi)注射新型凝膠不會(huì)產(chǎn)生致敏或刺激作用,具有生物安全性。本研究?jī)?yōu)化所得的新型交聯(lián)凝膠制備條件和顆粒化凝膠制備工藝可以為進(jìn)一步研究聚乙二醇和京尼平交聯(lián)凝膠的制備及性能奠定基礎(chǔ),亦可以為新型透明質(zhì)酸鈉衍生物作為生物材料的研究提供科學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：透明質(zhì)酸鈉 交聯(lián) 制粒 抗酶解性能 生物安全性
【學(xué)位授予單位】：河南工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R943
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第一章 前言11-25
• 1.1 透明質(zhì)酸研究現(xiàn)狀11-17
• 1.1.1 透明質(zhì)酸的分布11-12
• 1.1.2 透明質(zhì)酸的結(jié)構(gòu)12-13
• 1.1.3 透明質(zhì)酸的理化性質(zhì)13-14
• 1.1.3.1 透明質(zhì)酸的流變學(xué)特性13
• 1.1.3.2 透明質(zhì)酸的降解反應(yīng)13
• 1.1.3.3 透明質(zhì)酸能發(fā)生交聯(lián)和酯化反應(yīng)13-14
• 1.1.4 透明質(zhì)酸的生物活性及功能14-15
• 1.1.4.1 抗氧化活性14
• 1.1.4.2 免疫調(diào)節(jié)作用14
• 1.1.4.3 促進(jìn)血管的生成14
• 1.1.4.4 促進(jìn)傷口愈合14
• 1.1.4.5 促進(jìn)腫瘤形成14
• 1.1.4.6 保濕功能14-15
• 1.1.5 透明質(zhì)酸制備方法及生產(chǎn)現(xiàn)狀15
• 1.1.5.1 組織提取法制備HA15
• 1.1.5.2 發(fā)酵法制備HA15
• 1.1.6 透明質(zhì)酸的應(yīng)用15-17
• 1.1.6.1 透明質(zhì)酸在化妝品中的應(yīng)用16
• 1.1.6.2 透明質(zhì)酸在食品領(lǐng)域的應(yīng)用16
• 1.1.6.3 透明質(zhì)酸在臨床上的應(yīng)用16-17
• 1.2 透明質(zhì)酸鈉及其衍生物的研發(fā)進(jìn)展17-21
• 1.2.1 透明質(zhì)酸鈉衍生物的制備18-19
• 1.2.1.1 通過(guò)酯化反應(yīng)得到衍生物18
• 1.2.1.2 通過(guò)接枝反應(yīng)得到衍生物18
• 1.2.1.3 通過(guò)交聯(lián)反應(yīng)得到衍生物18-19
• 1.2.2 透明質(zhì)酸鈉衍生物的應(yīng)用19-21
• 1.2.2.1 透明質(zhì)酸鈉衍生物治療關(guān)節(jié)疾病20
• 1.2.2.2 透明質(zhì)酸鈉衍生物在術(shù)后防粘連方面的應(yīng)用20
• 1.2.2.3 透明質(zhì)酸鈉衍生物在軟組織填充方面的應(yīng)用20-21
• 1.2.2.4 透明質(zhì)酸鈉凝膠在生物藥品遞送系統(tǒng)方面的應(yīng)用21
• 1.3 京尼平簡(jiǎn)介21-22
• 1.4 顆�；宦�(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備方法22-23
• 1.5 交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的生物學(xué)評(píng)價(jià)23
• 1.6 本研究的主要內(nèi)容、目的意義和創(chuàng)新點(diǎn)23-25
• 1.6.1 本研究的主要內(nèi)容23-24
• 1.6.2 本研究的目的意義及創(chuàng)新點(diǎn)24-25
• 第二章 新型聚乙二醇交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠制備條件篩選與優(yōu)化25-31
• 2.1 材料與儀器25
• 2.1.1 主要試驗(yàn)試劑25
• 2.1.2 主要試驗(yàn)儀器25
• 2.2 試驗(yàn)方法25-27
• 2.2.1 聚乙二醇交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉（PEG-CSH）凝膠的制備25-26
• 2.2.1.1 磷酸鹽緩沖液的離子濃度對(duì)PEG-CSH凝膠的影響25
• 2.2.1.2 反應(yīng)時(shí)間對(duì)PEG-CSH凝膠的影響25
• 2.2.1.3 反應(yīng)溫度對(duì)PEG-CSH凝膠的影響25-26
• 2.2.1.4 PEG交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠制備的正交試驗(yàn)26
• 2.2.2 凝膠的抗酶解性能研究26-27
• 2.2.2.1 葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制26
• 2.2.2.2 改良咔唑法測(cè)定凝膠的抗酶解性能26-27
• 2.3 試驗(yàn)結(jié)果和分析27-30
• 2.3.1 葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制27
• 2.3.2 緩沖液的離子濃度對(duì)交聯(lián)凝膠抗酶解性能的影響27-28
• 2.3.3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)交聯(lián)凝膠抗酶解性能的影響28
• 2.3.4 反應(yīng)溫度對(duì)交聯(lián)凝膠抗酶解性能的影響28-29
• 2.3.5 PEG交聯(lián)凝膠制備的正交試驗(yàn)結(jié)果29-30
• 2.3.6 驗(yàn)證試驗(yàn)30
• 2.4 本章小結(jié)30-31
• 第三章 新型京尼平交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠制備工藝的初步研究31-37
• 3.1 試驗(yàn)材料31
• 3.1.1 主要試驗(yàn)試劑31
• 3.1.2 主要試驗(yàn)儀器31
• 3.2 試驗(yàn)方法31-32
• 3.2.1 京尼平濃度對(duì)交聯(lián)凝膠的影響31
• 3.2.2 透明質(zhì)酸鈉分子量對(duì)交聯(lián)凝膠的影響31
• 3.2.3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)交聯(lián)凝膠的影響31
• 3.2.4 反應(yīng)溫度對(duì)交聯(lián)凝膠的影響31-32
• 3.2.5 京尼平交聯(lián)凝膠制備的正交試驗(yàn)32
• 3.2.6 交聯(lián)凝膠的溶脹度測(cè)定32
• 3.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析32-36
• 3.3.1 京尼平濃度對(duì)交聯(lián)凝膠的影響32-33
• 3.3.2 透明質(zhì)酸鈉的分子量對(duì)交聯(lián)凝膠的影響33
• 3.3.3 反應(yīng)時(shí)間對(duì)交聯(lián)凝膠的影響33-34
• 3.3.4 反應(yīng)溫度對(duì)交聯(lián)凝膠的影響34-35
• 3.3.5 正交試驗(yàn)結(jié)果35-36
• 3.3.6 驗(yàn)證試驗(yàn)36
• 3.4 本章小結(jié)36-37
• 第四章 顆粒化交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備工藝的篩選與優(yōu)化37-42
• 4.1 儀器與試劑37
• 4.1.1 主要試驗(yàn)試劑37
• 4.1.2 主要試驗(yàn)儀器37
• 4.2 試驗(yàn)方法與結(jié)果37-41
• 4.2.1 凝膠的制備37-38
• 4.2.1.1 非交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉（SH）凝膠的制備37
• 4.2.1.2 PEG 交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉（CSH）凝膠的制備37
• 4.2.1.3 顆�；宦�(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的制備預(yù)實(shí)驗(yàn)37-38
• 4.2.2 凝膠的抗酶解性能研究38-39
• 4.2.2.1 葡萄糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制38
• 4.2.2.2 凝膠的抗酶解性能測(cè)定38-39
• 4.2.3 顆粒化交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠制備條件的優(yōu)化39-40
• 4.2.3.1 醇沉所用乙醇量的考察39
• 4.2.3.2 干燥溫度的考察39
• 4.2.3.3 干燥時(shí)間的考察39
• 4.2.3.4 正交試驗(yàn)優(yōu)化制備條件39-40
• 4.2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)40-41
• 4.3 本章小結(jié)41-42
• 第五章 新型交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的初步生物學(xué)評(píng)價(jià)42-49
• 5.1 試驗(yàn)動(dòng)物42
• 5.2 試驗(yàn)方法42-44
• 5.2.1 交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠樣品的制備42
• 5.2.2 小鼠采食量、體重增量及行為反應(yīng)的監(jiān)測(cè)42
• 5.2.3 動(dòng)物皮膚致敏試驗(yàn)42-43
• 5.2.4 小鼠皮內(nèi)刺激試驗(yàn)43-44
• 5.3 結(jié)果與分析44-48
• 5.3.1 動(dòng)物皮膚致敏試驗(yàn)結(jié)果44-46
• 5.3.1.1 小鼠采食量監(jiān)測(cè)結(jié)果44
• 5.3.1.2 小鼠體重增量監(jiān)測(cè)結(jié)果44-45
• 5.3.1.3 小鼠行為監(jiān)測(cè)結(jié)果45
• 5.3.1.4 小鼠皮膚致敏試驗(yàn)結(jié)果45-46
• 5.3.2 動(dòng)物皮內(nèi)刺激試驗(yàn)結(jié)果46-48
• 5.3.2.1 小鼠采食量監(jiān)測(cè)結(jié)果46-47
• 5.3.2.2 小鼠體重增量監(jiān)測(cè)結(jié)果47-48
• 5.3.2.3 小鼠行為監(jiān)測(cè)結(jié)果48
• 5.3.2.4 小鼠皮內(nèi)刺激記分結(jié)果48
• 5.4 本章小結(jié)48-49
• 第六章 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-55
• 致謝55-56
• 作者簡(jiǎn)介56

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1 高振強(qiáng);杜金鳳;楊R，

本文編號(hào)：851539