本文關(guān)鍵詞：ABCC2基因過表達(dá)細(xì)胞株的建立及鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建攜帶ABCC2基因的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,篩選出穩(wěn)定過表達(dá)ABCC2基因的細(xì)胞株并進(jìn)行鑒定,為體外實(shí)驗(yàn)確定與多藥耐藥相關(guān)蛋白2(MRP2)外排轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)的底物藥物及其轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制提供細(xì)胞模型。方法根據(jù)Gen Bank提供的ABCC2基因c DNA序列設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增該基因并將其連接至慢病毒載體PZE-LV105,包裝病毒并感染HEK293細(xì)胞。用嘌呤霉素進(jìn)行篩選得到過表達(dá)ABCC2基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,通過基因測序、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RTQ-PCR)和蛋白免疫印跡(Western blot)對穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。結(jié)果測序結(jié)果證明重組慢病毒過表達(dá)載體所攜帶的ABCC2基因序列與GenBank提供的ABCC2序列一致;RTQ-PCR分析結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了ABCC2基因的HEK293細(xì)胞中MRP2的mRNA相對表達(dá)比正常HEK293細(xì)胞和空白載體對照HEK293細(xì)胞高出約320倍;蛋白免疫印跡試驗(yàn)顯示,轉(zhuǎn)染了ABCC2基因的HEK293細(xì)胞中MRP2蛋白表達(dá)水平比正常HEK293細(xì)胞和空白載體對照HEK293細(xì)胞高出約150倍。結(jié)論該實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了穩(wěn)定過表達(dá)ABCC2基因的細(xì)胞株,該細(xì)胞株可用于初步篩選確定MRP2的特異性外排轉(zhuǎn)運(yùn)底物及其轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院藥學(xué)部;
【關(guān)鍵詞】： ABCC基因 過表達(dá) 慢病毒載體 HEK細(xì)胞
【分類號】：R96
【正文快照】： ABCC2基因編碼的蛋白質(zhì)是一種ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,一般稱作ABCC2轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白或者多藥耐藥相關(guān)蛋白2(MRP2)。該蛋白主要分布在肝臟、膽囊、腎臟、小腸和結(jié)腸等組織細(xì)胞[1],負(fù)責(zé)外排轉(zhuǎn)運(yùn)特異性底物,尤其在很多治療性藥物和有毒性外源性物質(zhì)的膽汁排泄中發(fā)揮重要作用[2-4]。雖然AB-CC

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1 辛華雯;劉慧明;李元啟;黃暉;趙麗;余愛榮;李罄;吳笑春;李維亮;熊磊;;ABCC2基因多態(tài)性與腎移植受者環(huán)孢素所致肝功能異常的相關(guān)性研究[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2013年07期

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本文編號：825199