本文關鍵詞：米諾地爾多克隆抗體的制備及其酶聯(lián)免疫檢測方法的建立

  更多相關文章： 米諾地爾 人工抗原 多克隆抗體 ELISA

【摘要】：米諾地爾(minoxidil)系血管擴張藥的一種。由于局部長期使用其可刺激毛發(fā)增生,故美國FDA于1988年批準該藥外用治療男性雄激素性脫發(fā)。米諾地爾雖然僅外用于局部,但仍存在輕度皮炎、眩暈、刺激性過敏,面部和四肢多毛癥等不良反應,使用不慎會刺激和灼傷眼部。因此,我國《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007)明令禁止在化妝品中添加米諾地爾,包括日用洗發(fā)、護發(fā)類化妝品。但一些生產(chǎn)商為片面追求功效、牟取暴利,仍違規(guī)在洗發(fā)護發(fā)類化妝品中添加米諾地爾。然而,目前國內尚無關于洗發(fā)護發(fā)類化妝品中米諾地爾及其鹽和衍生物的檢測方法與標準。有紫外分光光度法和高效液相色譜法測定洗劑和血漿中的米諾地爾個別文獻,但由于其方法尚不成熟而使得應用受限,米諾地爾快速專屬的檢測方法亟待發(fā)展。酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assy,ELISA)具有檢測迅速、方便、靈敏、特異等特點,近年來,其在藥物殘留領域方面的應用受到關注。本研究旨在制備出具有良好免疫原性的米諾地爾人工抗原及其多克隆抗體并初步建立米諾地爾的酶聯(lián)免疫檢測方法。由于米諾地爾為小分子物質,不具備免疫原性,必須應用蛋白鏈接技術,將米諾地爾與牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)進行偶聯(lián),制備出人工抗原Minoxidil-BSA,經(jīng)紫外光譜分析法(UV)、SDS-PAGE電泳法對其進行鑒定后,用Minoxidil-BSA免疫BALB/C小鼠,制備多克隆抗體(p Ab),鑒定抗血清的效價;進而系統(tǒng)建立米諾地爾的酶聯(lián)免疫檢測法。實驗數(shù)據(jù)表明:Minoxidil-BSA與BSA的紫外光譜掃描結果相比,發(fā)生了明顯的改變,Minoxidil-BSA與BSA的電泳條帶相比,也發(fā)生了明顯的改變,表明人工抗原合成成功。用Minoxidil-BSA免疫BALB/C小鼠,其抗血清效價為1:12800,競爭ELISA法結果證明抗血清對米諾地爾的敏感性較好,通過方陣滴定法確定的最佳工作濃度為包被原濃度1:200和抗體稀釋倍數(shù)1:3200。建立的米諾地爾酶聯(lián)免疫檢測法研究表明:Minoxidil質量濃度在0.001-10μg/ml范圍內,與吸光度呈良好的線性關系,其標準方程為y=-0.0823x+0.938(R2=0.9811)。本研究成功制備出了米諾地爾人工抗原及其多克隆抗體,建立了米諾地爾的酶聯(lián)免疫檢測方法。相關研究結果,不僅為進一步發(fā)展米諾地爾的免疫膠體金檢測方法奠定了堅實基礎,同時也為米諾地爾殘留的免疫學分析和快速、準確的檢測提供了切實可行的技術支持。
【關鍵詞】：米諾地爾 人工抗原 多克隆抗體 ELISA
【學位授予單位】：河北北方學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R943;R927
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 英文縮寫9-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-25
• 結果25-30
• 附圖30-38
• 附表38-43
• 討論43-47
• 結論47-48
• 參考文獻48-53
• 綜述 小分子人工抗原合成及多克隆抗體制備的研究進展53-65
• 參考文獻60-65
• 致謝65-66
• 個人簡歷66

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王建華;張沖;;小分子抗原人工合成進展[J];應用化學;2011年04期

，

本文編號：797352