本文關(guān)鍵詞：藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的制備及評(píng)價(jià)

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【摘要】：研究目的:課題選用親水性的天然多糖低分子肝素與藤黃酸共價(jià)結(jié)合,在溶液中自組裝形成兩親性聚合物膠束,改善藤黃酸的水溶性以及穩(wěn)定性;建立體內(nèi)藥物含量分析方法,考察膠束在小鼠體內(nèi)的分布及靶向性;建立小鼠原位肝癌移植模型,考察膠束的抗腫瘤作用。實(shí)驗(yàn)方法:(1)藤黃酸-低分子肝素接枝物(GA-LMWH)的制備及表征:通過藤黃酸與低分子肝素反應(yīng),得到GA-LMWH兩親性共聚物;經(jīng)單因素考察和正交試驗(yàn)確定最優(yōu)合成工藝;利用紫外分光光度計(jì)測(cè)定藤黃酸接枝低分子肝素的取代度,通過紅外、DSC、電鏡、粒度儀等對(duì)自組裝膠束的結(jié)構(gòu)、粒徑、電位、CMC值等方面進(jìn)行表征。(2)GA-LMWH膠束在小鼠體內(nèi)的組織分布研究:考察膠束在離體血漿中的穩(wěn)定性,評(píng)價(jià)GA-LMWH膠束在小鼠體內(nèi)的靶向作用,以FITC標(biāo)記肝素,得到粒徑范圍在200nm左右的GA-LMWH-FITC膠束;經(jīng)鼠尾靜脈注射后,利用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)各組織中的熒光強(qiáng)度,根據(jù)統(tǒng)計(jì)距藥動(dòng)學(xué)參數(shù)得到各組織的藥時(shí)曲線下面積、靶向效率、平均滯留時(shí)間等,評(píng)價(jià)自組裝膠束的靶向性。(3)GA-LMWH自組裝膠束的抗腫瘤作用研究:利用H22腹水瘤細(xì)胞建立肝癌原位移植瘤模型,通過肝功能檢測(cè)與組織切片病理學(xué)觀察以及存活時(shí)間曲線比較藤黃酸溶液與GA-LMWH膠束的抗腫瘤療效差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)肝素-藤黃酸接枝物(GA-LMWH)的制備及表征:經(jīng)單因素考察及正交試驗(yàn)得出最優(yōu)處方,其具體條件為活化中間體酯的溫度為0℃、乙二胺的加入量為200mL(藤黃酸的投料量為0.3mmol時(shí))、反應(yīng)物的摩爾數(shù)投料比為n(肝素鈉):n(藤黃酸):n(EDCI)=1:20:10。紅外及DSC圖譜表明產(chǎn)物成功合成,通過紫外檢測(cè),GA-LMWH的取代度為(27.45±0.22913)%;電鏡觀察膠束的形態(tài)均一,利用納米粒度儀檢測(cè)其粒徑范圍在200nm左右,電位-30m V,說明膠束結(jié)構(gòu)穩(wěn)定;熒光分光光度計(jì)測(cè)得CAC值為(0.0024±0.00019)mg×m L-1。(2)GA-LMWH自組裝膠束在小鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究:血漿穩(wěn)定性試驗(yàn)表明,膠束在血漿中穩(wěn)定存在24小時(shí)。將低分子肝素用FITC標(biāo)記,得到具有熒光特性的GA-LMWH-FITC膠束,尾靜脈注射小鼠體內(nèi)后,膠束的肝臟富集效應(yīng)顯著,且體內(nèi)平均滯留時(shí)間MRT是GA溶液MRT的6倍。(3)GA-LMWH的抗腫瘤效應(yīng)研究:抗腫瘤試驗(yàn)表明,低分子肝素組與模型組在肝功能評(píng)價(jià)和生存時(shí)間上比較并沒有顯著性差異(p0.05),表明本實(shí)驗(yàn)中低分子肝素溶液對(duì)腫瘤沒有直接抑制作用,雖然GA-LMWH膠束組和GA溶液組的肝功能指標(biāo)均沒有恢復(fù)至正常值,但與模型組和低分子肝素組比較均有明顯降低(p0.05),GA-LMWH膠束組在谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶AST這兩項(xiàng)肝功能指標(biāo)與GA溶液組比較有顯著性差異的降低(p0.05),生命曲線較GA溶液組有所延長(zhǎng)(p0.05)。結(jié)論:通過化學(xué)合成的方法將藤黃酸接枝到低分子肝素上形成兩親性共聚物,其水溶液中自組裝成納米級(jí)膠束;能夠被動(dòng)富集于肝臟部位的作用顯著,且延長(zhǎng)了體內(nèi)滯留時(shí)間,GA-LMWH膠束保留了藤黃酸的抗腫瘤活性,原位移植瘤實(shí)驗(yàn)也表現(xiàn)出較藤黃酸溶液更好的抗腫瘤效果。
【關(guān)鍵詞】：藤黃酸 自組裝膠束 肝靶向 組織分布 抗腫瘤
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 英文縮略詞表14-15
• 前言15-20
• 第一章 藤黃酸接枝低分子肝素（GA-LMWH）自組裝膠束的制備及表征20-38
• 1.儀器與試藥20-21
• 1.1 儀器20
• 1.2 試藥20-21
• 2.GA-LMWH的制備與結(jié)果21-28
• 2.1 GA-LMWH合成總路線21
• 2.2 藤黃酸乙二胺單酰胺的合成21
• 2.3 藤黃酸-低分子肝素接枝物的合成21-22
• 2.4 GA-LMWH膠束的制備22
• 2.5 GA-LMWH膠束合成條件的單因素考察及工藝篩選22-26
• 2.5.1 催化劑的選擇22-23
• 2.5.2 反應(yīng)溶劑的選擇23
• 2.5.3 合成GA-LMWH載體的選擇23-24
• 2.5.4 合成活性中間體溫度的選擇24-25
• 2.5.5 藤黃酸乙二胺單酰胺的合成中乙二胺的用量25
• 2.5.6 反應(yīng)物投料比的選擇25-26
• 2.6 單因素考察得到出的制備條件26-28
• 3.GA-LMWH自組裝膠束的表征28-37
• 3.1 傅里葉紅外吸收光譜(FTIR)28-29
• 3.2 差示掃描量熱分析29-30
• 3.3 膠束的形態(tài)粒徑與電位30-31
• 3.4 自組裝膠束臨界聚集濃度的測(cè)定31-33
• 3.4.1 自組裝膠束臨界聚集濃度的測(cè)定原理31-32
• 3.4.2 臨界聚集濃度的測(cè)定32
• 3.4.3 自組裝膠束的CAC值的測(cè)定結(jié)果32-33
• 3.5 GA-LMWH取代度的測(cè)定33-37
• 3.5.1 藤黃酸分析方法的建立33-35
• 3.5.2 藤黃酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制35
• 3.5.3 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)35-36
• 3.5.4 藤黃酸取代度的測(cè)定36
• 3.5.5 藤黃酸取代度的測(cè)定結(jié)果36-37
• 4.討論37
• 5.本章小結(jié)37-38
• 第二章 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的藥動(dòng)學(xué)組織分布實(shí)驗(yàn)38-69
• 第一節(jié) 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的血漿穩(wěn)定性38-47
• 1 儀器、試藥與動(dòng)物38-39
• 1.1 儀器38
• 1.2 試劑與藥品38
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物38-39
• 2.方法與結(jié)果39-45
• 2.1 分析方法的建立39-43
• 2.1.1 色譜條件39
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)所需血漿樣品的收集39
• 2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備39-40
• 2.1.4 方法專屬性考察40-42
• 2.1.5 藤黃酸在血漿中的精密度實(shí)驗(yàn)42
• 2.1.6 方法回收率實(shí)驗(yàn)42-43
• 2.2 血漿穩(wěn)定性試驗(yàn)43-45
• 2.2.1 血漿穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)步驟43-44
• 2.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析44
• 2.2.3 血漿穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果44-45
• 3 討論45-47
• 第二節(jié) 熒光物質(zhì)標(biāo)記藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的制備47-54
• 1 儀器與試藥47
• 1.1 儀器47
• 1.2 試劑與藥品47
• 2 方法與結(jié)果47-52
• 2.1 熒光物質(zhì)的選擇、熒光標(biāo)記GA-LMWH的原理及流程圖47-49
• 2.2.GA-LMWH-FITC合成步驟49-50
• 2.2.1 低分子肝素的活化49
• 2.2.2 FITC標(biāo)記低分子肝素鈉的制備49-50
• 2.2.3 FITC標(biāo)記GA-LMWH的合成50
• 2.3 GA-LMWH-FITC的合成結(jié)果50-52
• 2.3.1 GA-LMWH-FITC的紅外圖譜50-51
• 2.3.2 GA-LMWH-FITC的粒徑分布51-52
• 3 討論52-54
• 第三節(jié) 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束在小鼠體內(nèi)的組織分布研究54-69
• 1 儀器、試藥與動(dòng)物54-55
• 1.1 儀器54
• 1.2 藥品與試劑54
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物54-55
• 2 方法與結(jié)果55-68
• 2.1 熒光檢測(cè)條件55
• 2.2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析55
• 2.3 血漿樣品的制備55
• 2.3.1 空白血漿的制備55
• 2.3.2 含熒光膠束的血漿樣品制備55
• 2.3.3 給藥后血漿樣品的制備55
• 2.4 組織樣品的制備55-56
• 2.4.1 空白組織樣品的制備55-56
• 2.4.2 含熒光膠束組織樣品的制備56
• 2.4.3 給藥小鼠的組織處理56
• 2.5 血漿及各組織標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備56-59
• 2.6 精密度實(shí)驗(yàn)59
• 2.7 相對(duì)回收率實(shí)驗(yàn)59
• 2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)59-62
• 2.9 給藥方法與生物樣品的采集62-64
• 2.10 藥動(dòng)學(xué)分析及靶向性研究64-68
• 2.10.1 利用藥動(dòng)學(xué)參數(shù)分析組織靶向性64-67
• 2.10.2 GA-LMWH-FITC體內(nèi)分布的熒光切片觀察67-68
• 3 討論68
• 4 本章小結(jié)68-69
• 第三章 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的體內(nèi)抗腫瘤作用研究69-79
• 1.儀器、材料與動(dòng)物69
• 1.1 儀器69
• 1.2 材料69
• 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物69
• 2.方法與結(jié)果69-77
• 2.1 小鼠原位肝癌移植69-71
• 2.1.1 體內(nèi)H22細(xì)胞傳代69-70
• 2.1.2 小鼠原位肝癌模型建立70-71
• 2.2 體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)71-77
• 2.2.1 分組與給藥71
• 2.2.2 肝功能檢測(cè)71-72
• 2.2.3 體重變化及器官指數(shù)變化趨勢(shì)72-73
• 2.2.4 肝臟組織的病理觀察73-76
• 2.2.5 存活時(shí)間與生存率分析76-77
• 3.討論77-78
• 4.本章小結(jié)78-79
• 全文總結(jié)79-81
• 參考文獻(xiàn)81-85
• 綜述85-97
• 參考文獻(xiàn)91-97
• 個(gè)人簡(jiǎn)介97
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況97-98
• 致謝98

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2 王洋;張雪;馬力艷;肖景超;劉舉;劉洋;周云鵬;韓爽;;新型藤黃酸衍生物的合成[J];合成化學(xué);2014年02期

3 王進(jìn)欣;楊燕;馬俊海;張磊;郭青龍;尤啟冬;;藤黃酸氧化類似物的合成及抗腫瘤活性的二維定量構(gòu)效關(guān)系[J];高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào);2010年06期

4 張生烈;李乾;張磊;孫昊鵬;尤啟冬;;藤黃酸衍生物的合成及抗腫瘤活性研究[J];有機(jī)化學(xué);2012年08期

5 劉舉;王洋;周云鵬;李春艷;陳燁;姜明俊;張秋實(shí);徐利鋒;;藤黃酸衍生物的合成[J];合成化學(xué);2013年02期

6 李樹珍;歐陽五慶;;藤黃酸聚乳酸納米粒的研制[J];中國(guó)生物工程雜志;2008年02期

7 吳亞先;胡鐘;何黎琴;鄭偉;王效山;;藤黃酰甘氨酸的合成及體外抗腫瘤活性測(cè)試[J];化學(xué)世界;2012年04期

8 ;[J];;年期

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1 柏志全;李華榮;張海峰;朱林燕;陳麗新;王立偉;;氯通道在藤黃酸誘導(dǎo)低分化鼻咽癌細(xì)胞凋亡中的作用[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十一次全國(guó)學(xué)術(shù)會(huì)議�？痆C];2011年

2 丁婭;張鵬;湯曉燕;耿冬冬;張燦;;聚乙二醇化藤黃酸前藥的研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第12分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

3 李占林;王麗莉;華會(huì)明;;藤黃抗腫瘤活性成分的研究[A];第七屆全國(guó)天然有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

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6 依荷芭麗·遲;詹曉凱;楊林;崔成旭;王金萬;;注射用藤黃酸(THS)治療晚期惡性腫瘤的開放、隨機(jī)、對(duì)照、多中心Ⅱa期研究[A];第三屆中國(guó)腫瘤內(nèi)科大會(huì)教育集暨論文集[C];2009年

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9 張啟國(guó);李翠萍;陳軍浩;歐陽建;;藤黃酸誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡及機(jī)制研究[A];第12屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2009年

10 秦玉新;蒙凌華;丁健;;藤黃酸對(duì)DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ催化活性抑制作用的研究[A];2007醫(yī)學(xué)前沿論壇暨第十屆全國(guó)腫瘤藥理與化療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年

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1 健康時(shí)報(bào)記者 王志勝;注射藤黃酸“餓死”腫瘤[N];健康時(shí)報(bào);2008年

2 徐敏;藤黃酸掐斷腫瘤“營(yíng)養(yǎng)源”[N];解放日?qǐng)?bào);2008年

3 劉們;藤黃酸可間接抑制腫瘤[N];上�？萍紙�(bào);2008年

4 湯濤邋記者 王春;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)中草藥單體抗癌新機(jī)制[N];科技日?qǐng)?bào);2008年

5 胡德榮;中草藥單體抑制腫瘤新機(jī)制被發(fā)現(xiàn)[N];健康報(bào);2008年

6 姜澎;中草藥單體可以“餓死”腫瘤[N];文匯報(bào);2008年

7 岳陽;華東師大發(fā)現(xiàn)中草藥單體抗癌新機(jī)制[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

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1 馬建軍;藤黃酸治療破骨細(xì)胞相關(guān)骨溶解疾病的機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 王勇;藤黃酸抗淋系腫瘤細(xì)胞系的作用及分子機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2008年

3 張啟國(guó);藤黃酸誘導(dǎo)惡性血液病細(xì)胞株凋亡及機(jī)理研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

4 許景艷;藤黃酸抑制套細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株增殖和促凋亡的機(jī)理研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

5 姜小良;藤黃酸對(duì)腎癌細(xì)胞的抑制作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

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1 賈步云;藤黃酸B分離純化、納米脂質(zhì)載體制備及初步藥效學(xué)研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 王佰寧;藤黃中藤黃酸和新藤黃酸的提取分離及藥理毒理研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 閆雪霏;藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的制備及評(píng)價(jià)[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2016年

4 周政濤;注射用藤黃酸Ⅰ期臨床耐受性及藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2006年

5 劉寧寧;維拉帕米對(duì)藤黃酸抗腫瘤作用的增敏效應(yīng)及其機(jī)制研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

6 孫中強(qiáng);新型抗腫瘤藥物藤黃酸系列化合物的合成及抗腫瘤活性研究[D];東華大學(xué);2013年

7 吳孟強(qiáng);新型抗腫瘤藥物姜黃素衍生物和藤黃酸衍生物的合成與抗腫瘤活性的研究[D];東華大學(xué);2013年

8 鄭巍;藤黃酸抑制膀胱癌細(xì)胞生長(zhǎng)的研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 詹曉凱;藤黃酸IIa期臨床總結(jié)報(bào)告[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

10 閆春梅;藤黃酸抗多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖效應(yīng)與調(diào)節(jié)HERG鉀通道相關(guān)關(guān)系的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：638966