本文關(guān)鍵詞：CUMS誘導(dǎo)GK大鼠抑郁對沙格列汀藥動學(xué)和CYP450活性影響的研究

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【摘要】：目的糖尿病伴有抑郁癥的患者越來越多。本課題組前已發(fā)現(xiàn)慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)致抑郁SD大鼠改變了降糖藥物米格列奈的藥動學(xué)參數(shù),為了更好地模擬糖尿病患者并發(fā)抑郁后藥物代謝改變情況,本研究探討CUMS誘導(dǎo)自發(fā)性糖尿病Goto Kakizaki(GK)大鼠抑郁對體內(nèi)降糖藥物代謝過程的影響,為臨床上糖尿病并發(fā)抑郁癥患者服用降糖藥物的治療方案提供理論證據(jù)。方法1、糖尿病大鼠模型的制作:5周齡雄性自發(fā)性糖尿病GK大鼠購自上海斯萊克實驗動物有限公司,在SPF級實驗室中飼養(yǎng),直到出現(xiàn)多飲多食多尿的糖尿病癥狀,并測定大鼠餐后2 h血糖水平加以確認(rèn)。2、抑郁大鼠模型的建立:將糖尿病GK大鼠隨機分成兩組:對照組和抑郁模型組。抑郁模型組大鼠單籠飼養(yǎng),采用CUMS方法連續(xù)8周給予不同的應(yīng)激,應(yīng)激方法包括:束縛1 h;熱水游泳(45℃,5min);冷水游泳(4℃,5min);夾尾巴1 min;籠子傾斜45°,24 h;水平搖晃10 min;潮濕墊料24 h;噪音10 min;黑白光倒置(晝夜顛倒)24 h。每天隨機給予一種應(yīng)激,并且避免連續(xù)給予同一種應(yīng)激方法。對照組大鼠不接受任何應(yīng)激。3、抑郁模型的驗證:在應(yīng)激造模前后,采用曠場試驗(open-field test)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定抑郁模型組和對照組的行為學(xué)得分(水平運動得分和垂直運動得分)和血漿中5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)水平,驗證CUMS誘導(dǎo)抑郁模型的成功建立。4、沙格列汀藥動學(xué)分析:抑郁模型建立后,抑郁組和對照組大鼠分別給予新型降糖藥物沙格列汀(0.5 mg/kg)灌胃,并在不同的時間點采血。采用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)測定血漿中沙格列汀的血藥濃度并計算藥動學(xué)參數(shù)。5、CYP450活性的測定:將所有大鼠處死,取出肝臟,利用差速離心法制備肝微粒體混懸液,并測定肝微粒體總蛋白的濃度。采用“Cocktail”探針?biāo)幬锓y定探針?biāo)幬锝?jīng)肝微粒體CYP1A/2C/2D/3A代謝生成的代謝物的含量,來反映相應(yīng)的CYP450各亞型的活性。結(jié)果1、自發(fā)性糖尿病GK大鼠在12周齡產(chǎn)生多飲多食多尿的糖尿病癥狀。大鼠餐后2 h血糖水平是17.51±5.52 mmol/L,高于理論值11 mmol/L。抑郁組GK大鼠在應(yīng)激造模前后,曠場試驗的行為學(xué)(水平運動得分和垂直運動得分)和血漿中5-HT、DA水平均顯著性的降低(P0.01)。和對照組相比,抑郁組大鼠精神狀態(tài)萎靡,對應(yīng)激反應(yīng)不強烈、活動和體重均下降。2、HPLC-MS/MS檢測血漿中沙格列汀的方法特異性好、靈敏度高,介質(zhì)效應(yīng)、檢測限、準(zhǔn)確度和精密度均符合生物樣品檢測要求。與對照組相比,抑郁組GK大鼠沙格列汀的藥動學(xué)參數(shù)有明顯的改變。曲線下面積、達(dá)峰時間、峰濃度、平均滯留時間和清除率在統(tǒng)計學(xué)上有意義(P0.05),但半衰期和表觀分布容積沒有顯著性差異。3、在抑郁組和對照組兩組間肝微粒體總蛋白的濃度有明顯的差異。HPLC-MS/MS檢測探針的代謝物方法快速靈敏、簡單易行,介質(zhì)效應(yīng)、提取回收率、準(zhǔn)確度和精密度都符合生物樣品檢測要求。兩組間代謝物的濃度以及CYP450活性均有顯著性的差異。不同的CYP450亞型活性的變化趨勢與調(diào)節(jié)幅度都不同。與對照組相比,抑郁組肝微粒體CYP3A的活性發(fā)生顯著性的增加。結(jié)論1、CUMS誘導(dǎo)GK大鼠抑郁改變了沙格列汀在體內(nèi)的代謝過程、肝微粒體總蛋白濃度和CYP各亞型活性。2、肝微粒體和沙格列汀的體外試驗驗證了沙格列汀藥動學(xué)的改變是由肝臟藥物代謝酶CYP450活性改變引起的。3、CUMS誘導(dǎo)GK大鼠抑郁對不同的CYP450亞型活性的變化趨勢與調(diào)節(jié)幅度不同。
【關(guān)鍵詞】：慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激 抑郁癥 沙格列汀 CYP450 自發(fā)糖尿病大鼠
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文論著摘要5-8
• 英文論著摘要8-12
• 英文縮略語12-14
• 前言14-17
• 第一章 CUMS誘導(dǎo)GK大鼠抑郁模型的建立17-23
• 一、引言17
• 二、實驗材料17-18
• 三、實驗方法18-19
• 四、實驗結(jié)果19-23
• 第二章 沙格列汀藥動學(xué)分析23-36
• 一、引言23
• 二、實驗材料23-24
• 三、實驗方法24-27
• 四、實驗結(jié)果27-36
• 第三章“Cocktail”探針?biāo)幬锓y定CYP450的活性36-53
• 一、引言36
• 二、實驗材料36-37
• 三、實驗方法37-43
• 四、實驗結(jié)果43-53
• 討論53-56
• 結(jié)論56-57
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 附錄63-74
• 一、文獻(xiàn)綜述 心理應(yīng)激對藥物代謝的影響63-71
• 參考文獻(xiàn)66-71
• 二、在學(xué)期間科研成績71-72
• 三、致謝72-73
• 四、個人簡介73-74

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本文編號：530711