本文關(guān)鍵詞：靶向微管新結(jié)構(gòu)雙吲哚馬來酰亞胺化合物HD-ZWM-288抗腫瘤作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：惡性腫瘤是當(dāng)今危害人類健康甚至危及生命的主要疾病之一,其發(fā)病率逐年上升。乳腺癌和肝癌都是十分常見的惡性腫瘤,因其具有易轉(zhuǎn)移并且易產(chǎn)生耐藥性等特點,使得尋找毒性低同時療效好的新型化療藥物也成為目前腫瘤治療方面的一個重要的研究方向。中國海洋大學(xué)朱偉明課題組在從海洋微生物中發(fā)現(xiàn)抗腫瘤活性的新吲哚咔巴唑生物堿的基礎(chǔ)上,開展了對雙吲哚馬來酰亞胺類生物堿結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系的研究工作,設(shè)計并合成了一系列雙吲哚馬來酰亞胺類化合物,它們是一類具有烷基和腈基鏈的取代的結(jié)構(gòu)。我們的前期研究已表明這些化合物能夠抑制多株腫瘤細胞的生長。本文在發(fā)現(xiàn)HD-ZWM-288靶向微管的基礎(chǔ)上,深入研究了其微管介導(dǎo)的抗腫瘤作用機制。在對化合物篩選中,我們發(fā)現(xiàn)HD-ZWM-288有抑制微管的作用。以MCF-7細胞株和MDA-MB-231細胞株為研究對象,MTT法檢測了HD-ZWM-288對它們的生長抑制作用,并呈現(xiàn)出時間和劑量的依賴性。我們建立了裸鼠皮下移植瘤模型,連續(xù)給藥兩周,結(jié)果表明HD-ZWM-288體內(nèi)也能夠抑制腫瘤生長。免疫熒光染色、Western Blot和免疫組化染色實驗的結(jié)果均表明,HD-ZWM-288在體內(nèi)和體外都具有抑制微管蛋白的作用。用流式檢測發(fā)現(xiàn)化合物處理后的細胞被阻滯在G2/M周期。延長給藥時間,通過DAPI染色和Annexin Ⅴ和PI雙染這些手段發(fā)現(xiàn)與對照組相比加入了HD-ZWM-288后的細胞皺縮、染色質(zhì)聚集和凋亡率增加,這些結(jié)果提示該化合物最終可能通過細胞凋亡的方式誘導(dǎo)細胞死亡。綜上所述,HD-ZWM-288抑制乳腺癌細胞增殖,首先它抑制微管蛋白聚合,導(dǎo)致cdc2、p-cdc2蛋白表達下降,使細胞停滯于G2/M期,進一步抑制增殖,最終導(dǎo)致細胞凋亡。肝癌的發(fā)生與惡化與細胞本身的增殖、凋亡和分化三者之間達成的平衡失穩(wěn)息息相關(guān)。通過MTT法檢測的結(jié)果顯示HD-ZWM-288能夠抑制HepG-2細胞株的增殖。同樣建立裸鼠單側(cè)腋下皮下HepG-2移植瘤模型,結(jié)果證明在體內(nèi)它也能抑制HepG-2移植瘤生長。通過流式細胞術(shù)檢測,發(fā)現(xiàn)HD-ZWM-288可以誘導(dǎo)HepG-2凋亡并且使細胞停滯在G2/M期。采用DAPI染色同樣發(fā)現(xiàn)化合物處理細胞后出現(xiàn)典型的凋亡特點。Western Blot檢測結(jié)果表明cyclin B1的蛋白表達水平增加,cdc2和p-cdc2的蛋白表達水平下降,進一步證明G2/M期阻滯是由于HD-ZWM-288影響細胞的周期相關(guān)蛋白導(dǎo)致的。選用Western Blot檢測加藥后磷酸化H2AX的表達變化,表明化合物作用后出現(xiàn)了DNA雙鏈斷裂。在HD-ZWM-288誘導(dǎo)HepG-2細胞凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中,我們還發(fā)現(xiàn)化合物作用于細胞后ROS的顯著增加,Bcl-2/Bax這兩者的蛋白表達率顯著降低,線粒體膜電勢崩潰和細胞色素C釋放,進而激活了caspase-9, caspase-3和PARP這一級聯(lián)反應(yīng),最終導(dǎo)致細胞凋亡。綜上所述,HD-ZWM-288首先造成HepG-2細胞DNA損傷,進一步導(dǎo)致細胞周期阻滯,無法修復(fù)損傷的細胞則啟動了線粒體途徑的凋亡。血管生成是腫瘤的發(fā)生、生長以及轉(zhuǎn)移過程當(dāng)中必不可少的關(guān)鍵所在。MTT結(jié)果說明HD-ZWM-288能抑制血管內(nèi)皮細胞HUVEC的生長。進一步研究發(fā)現(xiàn),在較低劑量下,化合物對遷移和管形成有明顯的抑制作用。此外,還采用雞胚尿囊膜實驗和建立的裸鼠皮下移植瘤模型對化合物的抗新生血管作用進行評價。CAM和免疫組織化學(xué)實驗結(jié)果均表明HD-ZWM-288在體內(nèi)也可以有效地發(fā)揮抑制血管生成的作用。在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上檢測了在血管形成中起到重要作用的分子和相關(guān)通路,結(jié)果表明HD-ZWM-288的抗新生血管作用可能與其抑制VEGF信號通路和其下游的ERK1/2和Akt通路活性有關(guān)。本課題首次對HD-ZWM-288,這一雙吲哚馬來酰亞胺類的生物堿進行抗癌活性和機制的探究。結(jié)果表明該化合物通過多方面機制發(fā)揮其抗腫瘤作用,并且體內(nèi)有效,以上結(jié)果表明HD-ZWM-288是一個具有發(fā)展?jié)摿Φ目鼓[瘤先導(dǎo)化合物,我們的研究也為其今后的進一步研究與開發(fā)提供理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：HD-ZWM-288 微管 凋亡 新生血管
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 縮略語詞匯表12-14
• 緒論14-18
• 參考文獻16-18
• 第一章 HD-ZWM-288靶向微管抗腫瘤活性及其機制的研究18-51
• 1.1 前言18-23
• 1.2 實驗材料23-26
• 1.3 試驗方法26-34
• 1.4 實驗結(jié)果34-44
• 1.5 討論44-47
• 參考文獻47-51
• 第二章 HD-ZWM-288誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的機制研究51-75
• 2.1 前言51-57
• 2.2 實驗材料57-58
• 2.3 試驗方法58-61
• 2.4 實驗結(jié)果61-69
• 2.5 討論69-71
• 參考文獻71-75
• 第三章 HD-ZWM-288抗新生血管活性及其機制的研究75-97
• 3.1 前言75-80
• 3.2 實驗材料80-81
• 3.3 試驗方法81-84
• 3.4 實驗結(jié)果84-91
• 3.5 討論91-92
• 參考文獻92-97
• 結(jié)論97-98
• 致謝98-99
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文99-100
• 附件100

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 朱漢華;李浪;;TNF-α介導(dǎo)的心肌細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在心肌損傷中的作用[J];心血管病學(xué)進展;2008年02期

2 葉義標;陳濤;;肝癌血管生成與抗血管生成治療的研究進展[J];中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2009年10期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 徐志紅;雙吲哚馬來酰亞胺和吲哚咔唑生物堿的合成與構(gòu)效關(guān)系研究[D];中國海洋大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：靶向微管新結(jié)構(gòu)雙吲哚馬來酰亞胺化合物HD-ZWM-288抗腫瘤作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：507992