本文關(guān)鍵詞：多藥耐藥abcb4:EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚系的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:目前癌癥化療失敗的主要原因是多藥耐藥的產(chǎn)生,其產(chǎn)生的機(jī)制則是與ATP結(jié)合盒(ATP-binding cassette,ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)體家族表達(dá)增高有關(guān)。選擇新型模式生物斑馬魚作為實(shí)驗(yàn)對象,通過阿霉素(Doxorubicin,DOX)藥物暴露實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步了解abcb4基因在腫瘤多藥耐藥中的機(jī)制。并建立Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚系,為最終建立斑馬魚藥物篩選模型提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將正常發(fā)育的4~16個細(xì)胞期斑馬魚胚胎隨機(jī)分為四組。分別以Eggwater,2ml/L二甲基亞砜(DMSO),10μmol DOX及含2ml/L DMSO的10μmol DOX對斑馬魚胚胎進(jìn)行暴露處理,并以Eggwater處理的胚胎作為對照組。暴露處理至120hpf,收集暴露處理下的斑馬魚不同時期胚胎運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR和胚胎原位雜交技術(shù),檢測abcb4基因在斑馬魚中的表達(dá)變化情況。同時,對abcb4基因的啟動子進(jìn)行預(yù)測、克隆,并通過熒光素酶活性檢測對啟動子進(jìn)行活性測效。將具有活性的啟動子,構(gòu)建入Tol2-abcb4:EGFP重組質(zhì)粒。通過轉(zhuǎn)座子Tol2系統(tǒng),建立Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚系,并運(yùn)用表觀分析,基因組PCR測序?qū)ζ溥M(jìn)行鑒定。結(jié)果:相較于對照組,DMOS組、DOX組以及DMSO+DOX組的斑馬魚胚胎在96,120hpf時,abcb4基因m RNA表達(dá)水平均有明顯升高(p0.05),而abcb5基因m RNA表達(dá)情況則無明顯變化。通過斑馬魚胚胎原位雜交,均在斑馬魚120hpf胚胎小腸部位發(fā)現(xiàn)有abcb4基因陽性雜交信號,且藥物處理的斑馬魚胚胎在腦及心臟部位發(fā)現(xiàn)abcb4基因陽性雜交信號�？寺〉陌唏R魚abcb4基因啟動子熒光素酶活性檢測明顯高于對照組(p0.05)。建立的Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚能在腦、小腸穩(wěn)定遺傳和表達(dá)綠色熒光蛋白,且基因組PCR測序正確。結(jié)論:阿霉素能誘導(dǎo)斑馬魚abcb4基因表達(dá)水平增高,且在心臟部位有特異性增高表現(xiàn)。首次發(fā)現(xiàn)二甲基亞砜也能誘導(dǎo)增加斑馬魚abcb4基因表達(dá)水平。相較于abcb5基因,abcb4基因的表達(dá)模式更近似于人類ABCB1基因。同時成功地預(yù)測、克隆出斑馬魚abcb4基因啟動子,并證實(shí)了其具有驅(qū)動轉(zhuǎn)錄活性。以及成功建立了Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚系,為下一步abcb4基因在斑馬魚多藥耐藥機(jī)制中的研究,以及斑馬魚多藥耐藥性篩藥模型的建立奠定了重要實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：斑馬魚 多藥耐藥 abcb4 啟動子 轉(zhuǎn)基因技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 略縮詞表9-10
• 引言10-14
• 材料與方法14-29
• 結(jié)果29-40
• 討論40-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 作者簡歷59-60
• 致謝60-61
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集61

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1 薛宏亮;張乃元;袁占鵬;;斑馬魚在神經(jīng)毒理學(xué)研究中的應(yīng)用[J];公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué);2014年02期

2 ;學(xué)科前瞻[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2003年12期

3 張立鳳;鐘濤;桂永浩;;外源性視黃酸對斑馬魚心血管系統(tǒng)發(fā)育的影響[J];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報;2006年02期

4 楊寒朔;湯明海;鄧洪新;楊金亮;;納升超高效液相色譜-飛行時間質(zhì)譜檢測斑馬魚胚胎中小分子多肽的初步研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2007年06期

5 徐娟;吳南翔;;斑馬魚在環(huán)境內(nèi)分泌干擾物篩選和檢測中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);2009年04期

6 胡瑋;程露陽;宋韞韜;夏鴻飛;孫大光;李鵬;李丹;陸彩玲;馬旭;;硫代硫酸鈉干擾斑馬魚胚胎發(fā)育并致畸[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2009年09期

7 何秋霞;劉可春;楚杰;王思鋒;韓利文;王希敏;;斑馬魚作為模式生物在心血管疾病研究中的應(yīng)用[J];生命的化學(xué);2009年05期

8 孫淑娜;桂永浩;蔣t

本文編號：507504