發(fā)布時間：2024-04-09 04:45

　　目的探討西地那非抗低氧刺激的人肺動脈平滑肌細胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的機制與電壓依賴性鉀通道(voltage-dependent potassium channels,Kv)及環(huán)鳥甘酸依賴性蛋白激酶(cGMP-dependent protein kinase,PKG)的關(guān)系。方法采用MTT法及細胞免疫熒光法等檢測細胞增殖情況;應用膜片鉗技術(shù)記錄低氧刺激PASMCs前后及西地那非或KT-5823干預前后的Kv通道電流,運用Kv1.5抗體透析細胞后的Kv通道電流;應用siRNA干擾技術(shù)沉默Kv1.5基因。結(jié)果低氧下西地那非組的細胞增殖水平較低氧對照組明顯降低;西地那非反轉(zhuǎn)了低氧對細胞K+通道電流,尤其Kv1. 5通道電流的降低作用; si RNA組的Kv1. 5蛋白表達明顯減低,沉默Kv1. 5通道基因逆轉(zhuǎn)了西地那非抗低氧刺激的細胞增殖作用; PKG抑制劑KT-5823阻斷了西地那非抗低氧刺激的細胞增殖作用,并且反轉(zhuǎn)了西地那非對低氧下的Kv通道電流的上調(diào)作用。結(jié)論西地那非可通過上調(diào)Kv通道亞型主要是Kv1. 5通道,抑...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗細胞株及培養(yǎng)基
    1.2 試劑及儀器
    1.3 細胞培養(yǎng)分組與干預方法
    1.4 實驗方法
        1.4.1 DAPI染色法檢測細胞增殖
        1.4.2 細胞免疫熒光染色法檢測細胞增殖
        1.4.3 MTT法檢測細胞增殖
        1.4.4 Western blot法檢測siRNA沉默后的Kv1.5表達
        1.4.5 細胞轉(zhuǎn)染與分組
        1.4.6 電生理實驗的溶液配制記錄Kv通道電流的溶液配方:
        1.4.7 全細胞膜片鉗記錄
        1.4.8 全細胞K+電流的采集及分析
    1.5 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 西地那非抑制低氧刺激的PASMCs增殖MTT結(jié)果如Fig 2顯示:
    2.2 西地那非翻轉(zhuǎn)了低氧刺激的PASMCs的K+通道電流尤其Kv1.5通道電流的降低
    2.3 沉默Kv1.5基因?qū)v1.5蛋白及西地那非抗低氧刺激的細胞增殖的影響
    2.4 PKG抑制劑KT-5823逆轉(zhuǎn)西地那非抗低氧刺激的細胞增殖
    2.5 KT-5823抑制西地那非對低氧下細胞 K+通道電流的上調(diào)作用
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