目的:檢測GSTA1基因多態(tài)性和GSTM1基因缺失多態(tài)性;測定GST的活性,并闡明GSTA1和GSTM1的基因多態(tài)性對GST活性的影響�？疾旒彝猛瑫r進行環(huán)磷酰胺和白消安靜脈注射時,GST介導(dǎo)下的白消安藥代動力學(xué)特征;以家兔和HepG2細胞為研究對象,考察環(huán)磷酰胺對家兔和HepG2細胞內(nèi)GST活性的影響。方法:1.GSTA1和GSTM1基因多態(tài)性的檢測使用柱式血液基因組提取試劑盒提取血液中的DNA,并通過PCR-RFLP技術(shù)手段對提取的DNA進行聚合酶鏈式反應(yīng),采用DNA測序儀對PCR擴增產(chǎn)物進行測序,從而確定GSTA1的基因分型,以及GSTM1的基因缺失情況。2.GST活性的測定使用紫外可見分光光度計,通過測量在GST特異性催化下,GSH與CDNB的反應(yīng)結(jié)合產(chǎn)物在340nm處吸光度增加的速率,從而推算出GST的酶活性。3.GSTA1和GSTM1基因多態(tài)性對GST活性的影響將GSTA1和GSTM1基因多態(tài)性的檢測結(jié)果和GST活性結(jié)果相聯(lián)系,通過SPSS統(tǒng)計軟件,運用LSD t-test檢驗的方法對二者的關(guān)系進行比較。4.同時給予BUCY靜注后白消安的藥動學(xué)研究健康的家兔5只,給藥前禁食1...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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前言
第一部分 GSTA1及GSTM1的基因多態(tài)性測試及分析
    1 材料與方法
        1.1 研究對象
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 主要實驗試劑
        1.4 PCR引物設(shè)計
        1.5 人血紅細胞DNA的提取
        1.6 PCR反應(yīng)體系
        1.7 PCR產(chǎn)物測序反應(yīng)體系
        1.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果
        2.1 DNA提取及質(zhì)量檢測
        2.2 PCR產(chǎn)物的電泳檢測結(jié)果
        2.3 PCR產(chǎn)物堿基測序結(jié)果
        2.4 GSTA1的基因多態(tài)性分析
        2.5 GSTM1的基因缺失多態(tài)性分析
    3 討論
        3.1 GSTA1及GSTM1基因多態(tài)性的選擇
        3.2 GSTA1及GSTM1基因多態(tài)性測定方法的選擇
        3.3 引物設(shè)計的原則
    4 結(jié)論
第二部分 GST活性的測定及與GSTA1、M1基因多態(tài)性的關(guān)系
    1 材料與方法
        1.1 主要儀器與試劑
        1.2 實驗對象
        1.3 GST活性的測定方法
        1.4 精密度試驗
        1.5 GST活性的統(tǒng)計分析及與GST基因多態(tài)性分析
    2 結(jié)果
        2.1 精密度試驗結(jié)果
        2.2 GST活性分布情況
        2.3 不同性別和年齡段的GST活性分析
        2.4 GSTA1基因多態(tài)性對GST活性的影響
        2.5 GSTM1基因缺失多態(tài)性對GST活性的影響
    3 討論
        3.1 白消安及環(huán)磷酰胺的代謝機制
        3.2 研究對象的選擇
        3.3 GST活性的測定方法及與GSTA1、M1基因多態(tài)性的關(guān)系
    4 結(jié)論
第三部分 基于GST介導(dǎo)的環(huán)磷酰胺與白消安藥動學(xué)相互作用研究
    1 材料與方法
        1.1 主要儀器與試劑
        1.2 實驗試劑的配制
        1.3 白消安及環(huán)磷酰胺給藥及血樣采集方案
        1.4 血清樣品預(yù)處理
        1.5 HPLC法測定白消安血藥濃度的建立
        1.6 標(biāo)準曲線的繪制
        1.7 家兔及HepG2細胞內(nèi)環(huán)磷酰胺對GST活性的影響
    2 結(jié)果
        2.1 HPLC法測白消安血藥濃度方法的評價
        2.2 標(biāo)準曲線的求算
        2.3 同時靜注BUCY后,BU的濃度測定結(jié)果
        2.4 白消安藥代動力學(xué)參數(shù)的求算
        2.5 環(huán)磷酰胺對家兔體內(nèi)白消安藥代動力學(xué)的影響
        2.6 家兔及HepG2細胞內(nèi)環(huán)磷酰胺對GST活性的影響
    3 討論
        3.1 白消安測定方法的確立
        3.2 BU/CY同時給藥對白消安代謝的影響
        3.3 BU/CY給藥順序?qū)ζ潴w內(nèi)代謝動力學(xué)的影響
        3.4 環(huán)磷酰胺激活GST活性的初步研究
    4 結(jié)論
全文結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果
個人簡歷



本文編號：3948020