發(fā)布時間：2023-03-19 00:23

　　背景及目的:凝血酶是凝血級聯(lián)反應(yīng)的核心蛋白酶,除了發(fā)揮其凝血功能以外,研究表明它還可能與哮喘的發(fā)病機制有關(guān)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用于臨床抗凝的直接凝血酶抑制藥物達比加群,能有效減輕雞卵清白蛋白(OVA)誘導(dǎo)的哮喘小鼠模型的氣道重塑病理改變,但其對凝血酶誘導(dǎo)的人氣道平滑肌細胞(HASMCs)的功能變化是否存在作用尚不清楚。Yes-associated protein(YAP)是Hippo信號通路的關(guān)鍵分子,通過影響細胞增殖和分化等來調(diào)節(jié)器官大小和組織穩(wěn)態(tài)。最近的研究發(fā)現(xiàn)YAP在哮喘小鼠模型的氣道平滑肌中高表達,但YAP是否參與凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs功能變化未見報道。因此,本研究的目的是探討達比加群對凝血酶誘導(dǎo)的細胞增殖、遷移和重塑相關(guān)蛋白上調(diào)的影響,明確YAP在凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs功能變化中的作用,以及凝血酶調(diào)控YAP的潛在分子機制。方法:我們使用原代HASMCs作為研究模型。使用CCK-8、EdU實驗檢測細胞增殖;劃痕實驗檢測細胞遷移;qRT-PCR、Western Blot分別檢測細胞外基質(zhì)蛋白Collagen Ⅰ、纖維化蛋白α-SMA、YAP下游靶蛋白CTGF和Cyclin...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    一、實驗材料
        1. 實驗器材設(shè)備
        2. 主要實驗試劑
        3. 主要試劑的配制
    二、實驗方法
        1. 原代HASMCs培養(yǎng)
        2. 原代HASMCs免疫熒光鑒定
        3. 小干擾RNA轉(zhuǎn)染
        4. CCK-8實驗
        5. EdU實驗
        6. 細胞劃痕實驗
        7. 細胞總RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
        8. 實時熒光定量PCR (qRT-PCR)
        9. 細胞總蛋白的提取及濃度測定
        10. 蛋白免疫印跡(Western Blot)
        11.免疫熒光
        12. 免疫共沉淀(CoIP)
        13. 統(tǒng)計學(xué)分析
實驗結(jié)果
    一、原代HASMCs的特點與鑒定
    二、達比加群對凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs重塑的作用
    三、達比加群對凝血酶誘導(dǎo)的YAP激活的影響
    四、YAP對凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs重塑的作用
    五、凝血酶激活YAP的機制研究
討論
結(jié)論
參考文獻
中英文縮略詞表
攻讀碩士期間主要科研成果
致謝



本文編號：3764162