目的探討辛伐他汀抑制破骨細胞分化的機制。方法 RAW264.7細胞培養(yǎng)并傳代,sRANKL+M-CSF誘導(dǎo)RAW264.7細胞向破骨細胞分化;WST-1檢測不同濃度辛伐他汀對破骨細胞增殖活性的影響;TRAP染色檢測辛伐他汀對破骨細胞分化的影響;免疫熒光檢測辛伐他汀對破骨細胞肌動蛋白環(huán)形成的影響及對通路蛋白p65細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移的影響;Western blotting檢測加入辛伐他汀后對通路蛋白p65的影響。結(jié)果 WST-1結(jié)果顯示,辛伐他汀(10-6 mol/L)作用24 h后明顯抑制了破骨細胞的增殖活性。TRAP染色顯示,成熟的破骨細胞增多核,胞漿嗜酸性,染色呈酒紅色,加入辛伐他汀及核因子κB (NF-κB)通路抑制PDTC后,破骨細胞的形成及分化明顯受到抑制。免疫熒光檢測顯示,辛伐他汀抑制破骨細胞肌動蛋白環(huán)的形成、抑制NF-κB信號通路核心蛋白p65的細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)位。免疫印跡結(jié)果顯示,辛伐他汀能夠抑制p65的磷酸化。結(jié)論辛伐他汀通過NF-κB信號通路抑制破骨細胞的分化。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞：
        1.1.2 試劑：
        1.1.3 儀器：
    1.2 實驗方法
        1.2.1 小鼠單核/巨噬細胞RAW 264.
        1.2.2 WST-1檢測細胞增殖活性：
        1.2.3 TRAP染色檢測破骨細胞分化：
        1.2.4 肌動蛋白檢測破骨細胞吸收活性：
        1.2.5 免疫熒光檢測NF-κB核轉(zhuǎn)位：
        1.2.6 Western blotting檢測：
    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 SIM抑制RAW264.7細胞增殖活性
    2.2 破骨細胞的形態(tài)學(xué)觀察
    2.3 TRAP染色檢測破骨細胞分化
    2.4 SIM抑制破骨細胞的分化
    2.5 SIM抑制破骨細胞肌動蛋白環(huán)的形成
    2.6 SIM抑制NF-κB的核轉(zhuǎn)位
    2.7 Westerm blotting結(jié)果
3 討論



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