核受體Nur77（TR3）由即刻早期基因NR4A1編碼,在機(jī)體免疫調(diào)控,腫瘤發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要功能。程序性死亡配體1（PD-L1）是一種40 kDa的跨膜蛋白,在多種惡性腫瘤中高度表達(dá),與腫瘤不良預(yù)后密切相關(guān)。PD-L1與受體PD-1相互作用,抑制NK細(xì)胞、T細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活化、增殖,使其功能發(fā)生紊亂和枯竭,從而抑制其對(duì)腫瘤的殺傷,使腫瘤發(fā)生免疫逃逸。雖然Nur77和PD-L1都在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,但它們之間的關(guān)系還沒(méi)有得到很好的研究。在本課題中我們重點(diǎn)研究了 Nur77對(duì)PD-L1的調(diào)控。首先,我們檢測(cè)了不同乳腺癌細(xì)胞中Nur77和PD-L1的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Nur77和PD-L1的表達(dá)存在明顯的負(fù)相關(guān)性。接下來(lái),通過(guò)siRNA技術(shù)在MDA-MB-231細(xì)胞中敲低Nur77,發(fā)現(xiàn)PD-L1的表達(dá)明顯上調(diào),說(shuō)明在乳腺癌細(xì)胞中Nur77可以負(fù)向調(diào)控PD-L1的表達(dá)。在HeLa細(xì)胞中,利用siRNA敲低或用Crispr技術(shù)敲除Nur77,PD-L1的表達(dá)和mRNA水平均明顯上調(diào);過(guò)表達(dá)Nur77,PD-L1的表達(dá)顯著下調(diào)。為了進(jìn)一步研究Nur77調(diào)控PD-L1的生物學(xué)功能,我們開(kāi)展了自... 

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第一章 前言
    1. 核受體
        1.1 核受體的結(jié)構(gòu)和功能
    2. 孤兒核受體Nur77
        2.1 孤兒核受體Nur77的結(jié)構(gòu)
        2.2 孤兒核受體Nur77的功能
            2.2.1 Nur77的免疫功能
            2.2.2 Nur77在腫瘤中的生物學(xué)功能
        2.3 Nur77和腫瘤免疫
            2.3.1 腫瘤免疫
            2.3.2 Nur77和腫瘤免疫密切相關(guān)
    3. 程序性死亡配體-1和程序性死亡受體-1
        3.1 程序性死亡配體-1 PD-L1
        3.2 程序性死亡受體PD-1
        3.3 PD-L1/PD-1的信號(hào)通路
        3.4 PD-L1/PD-1和腫瘤免疫逃逸
        3.5 基于PD-L1/PD-1的腫瘤免疫策略
        3.6 IFN-γ和PD-L1
    4. 本文研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1細(xì)胞株質(zhì)粒和菌株
        1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
        1.3 主要試劑
            1.3.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
            1.3.2 干擾序列
            1.3.3 引物
        1.4 主要的實(shí)驗(yàn)配方
            1.4.1 SDS-PAGE變性膠
            1.4.2 細(xì)胞培養(yǎng)所需的溶液配方
            1.4.3 Western BLot和CO-IP相關(guān)溶液配方
            1.4.4 分子克隆所需配方
            1.4.5 稀釋抗體的配方
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 蛋白印跡法
        2.2 構(gòu)建重組質(zhì)粒
            2.2.1 制備DH5a感受態(tài)細(xì)菌
            2.2.2 PCR基因擴(kuò)增
            2.2.3 瓊脂糖凝膠電泳分析
            2.2.4 膠回收
            2.2.5 目的片段和空載體的酶切
            2.2.6 目的片段和載體回收
            2.2.7 酶切后片段的酶連
            2.2.8 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
            2.2.9 驗(yàn)證重組質(zhì)粒
        2.3 細(xì)胞培養(yǎng)涉及的相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法
            2.3.1 細(xì)胞的傳代鋪板凍存和復(fù)蘇
            2.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.3.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)法
        2.4 MTT法即NK-92 MI對(duì)HeLa細(xì)胞的殺傷功能檢測(cè)
        2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法
        2.6 核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)
        2.7 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        2.8 統(tǒng)計(jì)分析
第三章 結(jié)果與分析
    1. 乳腺癌細(xì)胞中Nur77對(duì)PD-L1的表達(dá)調(diào)控
        1.1 Nur77和PD-L1在不同乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)
        1.2 乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中Nur77調(diào)控PD-L1的表達(dá)
    2. 宮頸癌細(xì)胞HeLa中Nur77對(duì)PD-L1的表達(dá)調(diào)控
        2.1 宮頸癌細(xì)胞HeLa中Nur77調(diào)控PD-L1的表達(dá)
        2.2 宮頸癌細(xì)胞HeLa中Nur77調(diào)控PD-L1的轉(zhuǎn)錄水平
        2.3 HeLa細(xì)胞中敲低Nur77后對(duì)NK-92 MI的免疫殺傷功能影響
        2.4 Nur77不影響PD-L1的細(xì)胞定位
        2.5 HeLa細(xì)胞中Nur77和STAT1發(fā)生相互作用
        2.6 Nur77通過(guò)STAT1調(diào)控PD-L1
    3. IFN-γ誘導(dǎo)條件下Nur77對(duì)PD-L1的表達(dá)調(diào)控
    4. 配體誘導(dǎo)條件下Nur77對(duì)PD-L1表達(dá)的調(diào)控
第四章 討論
第五章 結(jié)論與展望
    1. 結(jié)論
    2. 展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Identification of a novel splice variant of human PD-L1 mRNA encoding an isoform-lacking Igv-like domain[J]. Xian-hui HE~2 Li-hui XU Yi LIU~3 Key Laboratory of Ministry of Education for Tissue Transplantation and Immunology,Ji-nan University,Guangzhou 510632,China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2005(04)



本文編號(hào)：3734452