觀察優(yōu)降寧（pargyline）對(duì)細(xì)胞色素P450 3A（cytochrome P450 3A,CYP3A）亞型CYP3A4/3A7啟動(dòng)子及增強(qiáng)子區(qū)組蛋白甲基化修飾及其基因轉(zhuǎn)錄的影響。原代分離培養(yǎng)人胎肝細(xì)胞,分為空白對(duì)照組、溶媒組、優(yōu)降寧低、中、高(0.6、1.2、2.4 mmol·L^-1)濃度組,Hep G2細(xì)胞用0.03、0.3、3 mmol·L^-1優(yōu)降寧處理48 h,觀察組蛋白甲基化修飾對(duì)CYP3A4/3A7基因表達(dá)的影響;3 mmol·L^-1優(yōu)降寧處理組與對(duì)照組的HepG2細(xì)胞進(jìn)行染色質(zhì)免疫共沉淀,選取特異CYP3A4/3A7啟動(dòng)子、增強(qiáng)子區(qū)位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR,H3K4me2富集以input百分比表示觀察富集的改變。結(jié)果表明,優(yōu)降寧能促進(jìn)人原代胎肝細(xì)胞、HepG2細(xì)胞增殖生長(zhǎng),與溶媒對(duì)照組相比,優(yōu)降寧(1.2、2.4 mmol·L^-1)顯著升高人原代胎肝細(xì)胞CYP3A7表達(dá)水平,且優(yōu)降寧(3 mmol·L^-1)顯著升高HepG2細(xì)胞CYP3A4/3A7表達(dá)水... 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    藥品與主要試劑
    胎兒肝臟樣本
    原代胎肝細(xì)胞的分離培養(yǎng)[7,8]
    Hep G2細(xì)胞傳代與培養(yǎng)
    優(yōu)降寧對(duì)原代胎肝細(xì)胞及Hep G2細(xì)胞CYP3A4/3A7表達(dá)影響
    優(yōu)降寧對(duì)CYP3A4/3A7啟動(dòng)子及增強(qiáng)子區(qū)組蛋白甲基化修飾及其轉(zhuǎn)錄的影響
        細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理
        細(xì)胞的甲醛交聯(lián)與超聲破碎
    免疫復(fù)合物的沉淀及洗滌
    解交聯(lián)、蛋白酶消化及DNA分離純化
    CYP3A4/3A7啟動(dòng)子及增強(qiáng)子區(qū)位點(diǎn)的q PCR檢測(cè)
    統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
    1人原代胎肝細(xì)胞形態(tài)觀察
    2優(yōu)降寧對(duì)原代人胎肝細(xì)胞和Hep G2細(xì)胞CYP3A4/3A7基因表達(dá)的影響
        2.1 Trizol法提取人原代胎肝細(xì)胞總RNA的鑒定
        2.2 Pargyline對(duì)原代人胎肝細(xì)胞和Hep G2細(xì)胞CYP3A4/3A7基因表達(dá)的影響
    3優(yōu)降寧對(duì)CYP3A4/3A7啟動(dòng)子及增強(qiáng)子區(qū)組蛋白甲基化修飾狀態(tài)的影響
        3.1樣品超聲碎斷DNA片段大小檢測(cè)及DNA濃度檢測(cè)
        3.2 CYP3A4/3A7啟動(dòng)子及增強(qiáng)子區(qū)組蛋白甲基化修飾狀態(tài)
討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]異鼠李素對(duì)CYP3A4的調(diào)節(jié)及藥物相互作用分析[J]. 丁麗麗,張晶晶,竇薇.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2012(08)



本文編號(hào)：3684007